JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:05 min. • July 8th, 2025
Zacznij od znieczulonej myszy zabezpieczonej w aparacie stereotaktycznym z ogoloną głową.
Zdezynfekuj skórę głowy i wykonaj nacięcie, aby odsłonić czaszkę.
Oczyść czaszkę, aby usunąć warstwę tkanki łącznej.
Korzystając z punktu odniesienia na czaszce, zaznacz miejsce docelowe i wywierć otwór.
Weź strzykawkę zawierającą roztwór lizofosfatydylocholiny lub LPC, utrwalony na aparacie stereotaktycznym.
Określić współrzędne dwóch punktów wstrzyknięcia w obszarze istoty białej mózgu i odpowiednio ustawić strzykawkę.
Wstrzyknąć roztwór LPC i trzymać igłę na miejscu przez pewien czas po wstrzyknięciu w każdym miejscu.
Zszyj nacięcie i pozwól zwierzęciu dojść do siebie.
W miejscu wstrzyknięcia LPC oddziałuje bezpośrednio z mieliną, zaburzając jej strukturę i powodując jej rozpad.
Powoduje to miejscową dysfunkcję neuronów, ustanawiając w ten sposób ogniskowy model demielinizacji.
Zacznij od podłączenia igły o rozmiarze 32 do strzykawki o pojemności pięciu mikrolitrów. Pobrać 5 mikrolitrów roztworu LPC w celu przygotowania wstrzyknięcia. Następnie potwierdź głębokość znieczulenia myszy poprzez brak odruchu szczypania palców u stóp, podczas gdy oddech jest płynny. Ustaw mysz w ramce stereotaktycznej grzbietem do góry i zabezpiecz głowę stożkiem nosowym i zaciskiem zębowym.
Przymocuj mysz do aparatu stereotaktycznego za pomocą obustronnych nauszników. Upewnij się, że nauszniki są wypoziomowane, a głowa jest pozioma i stabilna. Zdezynfekuj skórę głowy, przecierając jodoforem. Następnie za pomocą skalpela wyciąć małe nacięcie na około 1,5 centymetra wzdłuż linii środkowej skóry głowy, aby odsłonić czaszkę. Przetrzyj czaszkę bawełnianym wacikiem zamoczonym w 1% nadtlenku wodoru, aż bregma, lambda i tylne ciemiączko zostaną odsłonięte.
Umieścić strzykawkę na aparacie stereotaktycznym. Upewnij się, że zwierzę znajduje się w pozycji poziomej i zlokalizuj ciało modzelowate. Po ustaleniu miejsca wstrzyknięcia należy zapisać współrzędne i narysować marker na czaszce. Delikatnie wywierć zaznaczone miejsce wiertłem do czaszki. Należy uważać, aby uniknąć krwawienia.
Powoli przesuń igłę do podanych współrzędnych. Aby wywołać demielinizację ciała modzelowatego, należy wstrzyknąć 2 mikrolitry roztworu LPC w każde miejsce wstrzyknięcia z szybkością 0,4 mikrolitra na minutę. Po wstrzyknięciu należy trzymać igłę w każdym miejscu przez dodatkowe 10 minut. Na koniec zszyj skórę szwem 4-0 i poczekaj, aż zwierzę obudzi się w ciągu 10 minut.