Metoda zadawania urazowego uszkodzenia mózgu z zamkniętą głową u Drosophila

Weź znieczulone dorosłe muchy Drosophila w pustej fiolce.

Włóż wacik do fiolki, aby ograniczyć muchy na dnie, zapewniając silniejsze uderzenie podczas zadawania obrażeń.

Gdy muchy wyzdrowieją ze znieczulenia, przymocuj fiolkę do sprężyny urządzenia do urazów o dużej sile uderzenia.

Koniec fiolki należy oprzeć na podniesionej platformie. Następnie pociągnij sprężynę do tyłu pod kątem i zwolnij ją.

Fiolka uderza w platformę, powodując wielokrotne zderzenie much ze ściankami fiolki.

Mózg drosophila uderza w torebkę głowy, naśladując urazowe uszkodzenie mózgu z zamkniętą głową lub TBI, nie powodując uszkodzeń zewnętrznych.

Pozwól muszkom zregenerować się i przenieś je do fiolki z jedzeniem.

Uraz powoduje uszkodzenie błon neuronowych, upośledzając funkcje neuronów.

Cząsteczki sygnałowe z uszkodzonych neuronów rekrutują komórki odpornościowe, prowadząc do postępującej degradacji tkanki mózgowej, co ostatecznie prowadzi do śmierci muszek.

Umieść od 1 do 60 much znieczulonych dwutlenkiem węgla w pustej fiolce i zakorkuj fiolkę za pomocą ciasno przylegającego wacika. Następnie narysuj linię na fiolce, 1 cal od jej podstawy. Strącić muchy z boków fiolki i wepchnąć wacik, aż dopasuje się do nowo narysowanej linii.

Poczekaj pięć minut, aż muchy odzyskają mobilność dzięki dwutlenkowi węgla. Następnie włożyć koniec sprężyny do fiolki, aż wewnętrzna krawędź rzepu zrówna się z górną częścią fiolki. To mocuje fiolkę do sprężyny, tworząc szczelne złącze zaciskowe. Gdy sprężyna leży płasko, upewnij się, że 1 cal fiolki zachodzi na podniesiony obszar pokrywy pojemnika na lód.

W tym czasie należy założyć ochronniki słuchu, ponieważ uderzenie fiolki o pokrywę pojemnika na lód powoduje głośny dźwięk. Następnie przytrzymać fiolkę w okolicy rzepu za pomocą kciuka i palca wskazującego lewej ręki. Prawą ręką przyciśnij deskę mocno do blatu stołu.

Następnie pociągnij sprężynę idealnie prosto z powrotem pod żądanym kątem, a następnie zwolnij sprężynę. Poczekaj, aż sprężyna całkowicie się zatrzyma, a następnie wyjmij fiolkę ze sprężyny. Umieść fiolkę na blacie stołu i pozwól muchom dojść do siebie przez co najmniej pięć minut. W tym czasie muchy powoli odzyskują swój normalny ruch. Następnie przenieś muchy do fiolki z pokarmem dla much w celu późniejszej analizy.