Zakażenie płodowymi neuronalnymi komórkami macierzystymi wirusem Zika

Weźmy zawiesinę wirusa Zika, wirusa chorobotwórczego, o pożądanej wielokrotności infekcji, stosunku cząstek wirusa do komórek.

Wymieszać zawiesinę wirusa z ludzkimi płodowymi komórkami macierzystymi mózgu.

Inkubuj mieszaninę, pozwalając wirusowi związać się z receptorami na komórkach, ułatwiając endocytozę wirusa.

Następnie odwirować mieszaninę i wyrzucić supernatant zawierający niezinternalizowane cząstki wirusa.

Ponownie zawiesić komórki zakażone wirusem w pożywce i umieścić je w wielodołkowej płytce pokrytej białkiem macierzy zewnątrzkomórkowej, umożliwiając adhezję komórek.

Inkubuj płytkę.

Zinternalizowany wirus Zika wykorzystuje maszynerię komórek gospodarza do produkcji nowych cząstek wirusa.

Replikacja wirusa znacząco zmienia morfologię komórek, powodując ich uszkodzenie i ułatwiając rozprzestrzenianie się infekcji na sąsiednie komórki.

Komórki zakażone wirusem Zika mogą być wykorzystane do dalszej analizy.

Ponownie zawiesić osad w stadzie ZIKV przy wielokrotności infekcji lub MOI od 1 do 10. Objętość roztworu ZIKV nie powinna przekraczać 0,5 mililitra. Inkubować próbki w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez godzinę. Następnie odwróć probówkę dwa do trzech razy i odwiruj m