Leczenie plastrów koronalnych szczurów neurotoksycznym peptydem
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:51 min. • July 8th, 2025
Weź wycinek mózgu koronalnego szczura i przetnij go wzdłuż linii środkowej, aby uzyskać półplasterki, upewniając się, że oba pochodzą z tego samego regionu anatomicznego do eksperymentów kontrolnych i testowych.
Przenieś półplasterki do natlenionego CSF w celu odzyskania.
Następnie umieść je w fiolkach z aCSF do kontroli i aCSF z neurotoksycznym peptydem do testu.
Uszczelnij fiolki igłami dotleniającymi, aby dostarczyć tlen do tkanki i inkubować.
W testowej fiolce neurotoksyczny peptyd wiąże się ze swoim receptorem neuronalnym, zakłócając normalną sygnalizację neuronalną.
Ta zakłócona sygnalizacja prowadzi do akumulacji białek neurotoksycznych i zmienia białka związane z mikrotubulami, sprzyjając neurodegeneracji.
Po inkubacji przenieść półplasterki do probówek zawierających schłodzony bufor do lizy.
Homogenizuj tkankę, aby uwolnić zawartość komórkową, podczas gdy inhibitory w buforze zapobiegają degradacji białek.
Odwirować i zebrać supernatant zawierający rozpuszczalne białka i przechowywać je do dalszej analizy.
Ostrożnie podziel każdą sekcję małymi nożyczkami wzdłuż linii środkowej, aby uzyskać dwa zwierciadlane półplasterki. Użyj każdej pary półplasterków do kontroli i leczone
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych