JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:39 min. • July 8th, 2025
Weźmy szalki Petriego zawierające równomierne rozmieszczenie pokarmu dla robaków na pożywkach wzrostowych nicieni.
Odwróć każdą płytkę i zaznacz środek.
Za pomocą mikroskopu wprowadź robaki Caenorhabditis elegans do centralnie zaznaczonego miejsca.
Następnie wprowadź robaki dopasowane do wieku na pozostałe płytki.
Robaki te wyrażają albo dzikie, albo zmutowane formy ludzkiego białka wiążącego RNA, które tworzy toksyczne agregaty w cytoplazmie neuronów i prowadzi do śmierci neuronów.
Zmniejsza to zdolność robaków do kontrolowania ruchów mięśni, co skutkuje upośledzeniem funkcji motorycznych.
Pozwól robakom pełzać przez określony czas.
Za pomocą mikroskopu zaznacz ostateczną lokalizację każdego robaka.
Zmierz odległość promieniową przebytą przez robaki od centralnego punktu do ich końcowych pozycji.
W porównaniu z grupą kontrolną, robaki wykazujące niższy poziom białka typu dzikiego wykazują łagodne upośledzenie motoryczne, te z wyższym poziomem białka typu dzikiego wykazują umiarkowane upośledzenie, a te ze zmutowanym białkiem wykazują poważne upośledzenie.
Odwróć płytki testowe NGM do góry nogami i oznacz spód identyfikatorem szczepów C. elegans, które mają być badane. Zrób małą kropkę z markerem na środku odwróconej płytki. Podczas pracy z mikroskopem preparacyjnym przenieś robaki na środek płytki testowej i ustaw minutnik na 30 minut. Połóż pokrywkę z powrotem na talerzu i odłóż ją na bok. Kontynuuj przenoszenie robaków, aż wszystkie szczepy znajdą się na wyznaczonych płytkach testowych.
Po 30 minutach rozpocznij ocenianie pierwszej płytki, zdejmując pokrywkę i umieszczając płytkę ekranem do dołu pod mikroskopem preparacyjnym. Dostosuj ostrość mikroskopu, aż wszystkie robaki będą widoczne przez agar. Używając pisaka w innym kolorze od środkowego punktu, umieść małą kropkę w miejscu każdego robaka.
Sprawdź krawędź płytki, ponieważ niektóre robaki mogą się tam znaleźć. Policz także i zapisz, ile robaków nie poruszyło się od punktu środkowego. Zmierz odległość od punktu środkowego do końcowych oznaczeń lokalizacji dla każdego robaka i zapisz odległość za pomocą linijki. Pierwszy punkt robaka jest oznaczony myślnikiem. Rejestruj dane o długości dla każdej kropki po kolei, obracając płytkę w kierunku zgodnym z ruchem wskazówek zegara.