JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:08 min. • July 8th, 2025
Zacznij od płytki zawierającej hodowane mielinizowane neurony ruchowe, komórki nerwowe kontrolujące mięśnie i miotuby, wielojądrowe komórki mięśniowe.
Neuron ruchowy jest połączony z miotubą za pomocą połączenia nerwowo-mięśniowego lub NMJ, miejsca transmisji sygnału.
Dodaj chlorek wapnia do studzienki.
Obserwuj pod odwróconym mikroskopem, aby uzyskać obrazowanie na żywo i nagrać film.
Jony wapnia dostają się do neuronu ruchowego i wyzwalają uwalnianie acetylocholiny lub ACh, neuroprzekaźnika pobudzającego.
Te neuroprzekaźniki wiążą się z receptorami ACh na miotubach, umożliwiając wnikanie jonów sodu i wywołując skurcz mięśniówek.
Nagraj film. Następnie oprogramowanie generuje oznaczoną kolorami grafikę ruchu w czasie dla skurczów rurki mięśniowej, gdzie kolor czerwony oznacza najszybszą prędkość, a niebieski oznacza najwolniejszą prędkość.
Następnie wprowadź bloker nerwowo-mięśniowy, który wiąże się z receptorami ACh. Zapobiega to napływowi sodu i ogranicza skurcze rurki mięśniowej.
Nagraj film ponownie. Zmniejszenie koloru czerwonego wskazuje na zmniejszenie skurczów rurki mięśniowej.
Aby wywołać skurcze rurki mięśniowej, dodaj 25 milimolowy chlorek wapnia do każdej studzienki zróżnicowanych komórek połączenia nerwowo-mięśniowego. W ciągu jednej do dwóch minut od zabiegu umieść płytkę na stoliku odwróconego mikroskopu. Korzystając z mikroskopii żywych komórek, nagraj film ze skurczu rurki przez 20 sekund. Pod koniec nagrania dodaj 300 nanogramów na mililitr kurary do pożywki hodowlanej i nagrywaj film przez kolejne 20 sekund, zanim otworzysz plik filmowy w odpowiednim oprogramowaniu do analizy wektorów ruchu w celu analizy.