JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:36 min. • April 28th, 2025
Weź znieczulonego szczura.
Ogol skórę głowy. Następnie nałóż żel pod oczy, aby utrzymać nawilżenie rogówki.
Zabezpiecz zwierzę na ramie stereotaktycznej i zdezynfekuj miejsce operacji. Wykonaj nacięcie w linii środkowej i cofnij je, aby odsłonić czaszkę.
Wywierć otwór w prawej półkuli czołowej, aby uzyskać dostęp do kory przedczołowej.
Umieść stereotaktycznie sterowaną strzykawkę zawierającą zawiesinę komórek glejaka lub guza mózgu, nad miejscem wiercenia.
Za pomocą sterownika pompy wstrzyknij zawiesinę komórkową do kory przedczołowej.
Powoli wycofuj igłę, aby zapobiec refluksowi wstrzykniętych komórek. Następnie uszczelnij wywiercone miejsce woskiem kostnym.
Zszyj nacięcie chirurgiczne i zdezynfekuj miejsce.
Wróć do klatki szczura i użyj czerwonej lampy, aby utrzymać temperaturę ciała.
Po wstrzyknięciu, komórki guza mózgu namnażają się, infiltrują otaczające tkanki i indukują angiogenezę, zakłócając normalne funkcjonowanie mózgu i tworząc model glejaka.
Aby zaszczepić mózg znieczulonej 170-gramowej samicy szczura Fisher F344 komórkami glejaka, najpierw potwierdź sedację przez brak odpowiedzi na szczypanie palca. Usuń włosy z poziomu oczu do tyłu czaszki i nałóż maść na oczy zwierzęcia. Unieruchomić zwierzę w urządzeniu stereotaktycznym. Zdezynfekuj odsłoniętą skórę jodem powidonu i odsłoń czaszkę z 2-centymetrowym nacięciem w linii środkowej skóry głowy. Za pomocą wiertła diamentowego wykonaj otwór o średnicy 1 milimetra, 2 milimetry z tyłu i 2 i pół milimetra z boku do bregmy w prawej półkuli czołowej.
Następnie załaduj igłę strzykawki insulinowej o rozmiarze 29 z 5 mikrolitrami zawiesiny komórkowej. I użyj sterownika pompy mikrostrzykawki, aby wstrzyknąć komórki na głębokość trzech milimetrów do czaszki pod kierownictwem stereotaktycznym i powoli wycofaj igłę. Zamknij nacięcie woskiem kostnym. Następnie zszyj i zdezynfekuj skórę większą ilością jodu powidonu. I użyj czerwonej lampy, aby ustabilizować temperaturę ciała zwierzęcia, po operacji, z monitorowaniem aż do pełnego wyzdrowienia.