Modelowanie regeneracji aksonów czuciowych u szczura za pomocą iniekcji zwoju korzenia grzbietowego i uszkodzenia zmiażdżenia korzenia grzbietowego

Zacznij od znieczulonego szczura.

Wykonaj nacięcie skóry w linii środkowej między kręgami C2 szyjki macicy a kręgiem piersiowym T2.

Następnie naciąć wzdłuż linii środkowej białej tkanki włóknistej i wycofać pierwszą warstwę mięśni.

Wypreparuj cienką błoniastą tkankę w linii środkowej drugiej warstwy mięśni, a następnie wycofaj prążkowane mięśnie podłużne.

Na koniec naciąć trzecią warstwę mięśni, aby odsłonić kręgosłup.

Usuń blaszkę i szypułkę pokrywające leżące po lewej stronie kręgów od C4 do T1, aby odsłonić zwoje korzenia grzbietowego od C5 do C8 lub DRG.

Wstrzyknąć rekombinowaną zawiesinę wirusa związaną z adenowirusem do DRG.

Wirus koduje białko stymulujące wzrost, które pomaga w regeneracji aksonów.

Za pomocą kleszczy zmiażdż korzenie grzbietowe od C5 do C8, aby przeciąć połączenia aksonalne od DRG do rdzenia kręgowego, tworząc kontrolowane uszkodzenie aksonów.

Model jest gotowy do badania regeneracji aksonów za pośrednictwem wirusa.

Rozpocznij operację od zlokalizowania widocznych wyrostków kolczystych C2 i T2 na skórze. Następnie użyj skalpela numer 10, aby wykonać nacięcie skóry między wyrostkami kolczystymi C2 i T2. Po otwarciu skóry na pierwszej warstwie mięśni powinna być widoczna biała linia środkowa tkanki włóknistej, która ma galaretowatą teksturę.

Wykonaj nacięcie o podobnej wielkości na pierwszej warstwie mięśnia wzdłuż białej linii środkowej. Nie wychodź poza wydatny wyrostek kolczysty T2, ponieważ w pobliżu znajduje się główne naczynie krwionośne. Wycofaj pierwszą warstwę mięśni za pomocą dwóch retraktorów, jednego umieszczonego rostralnie, a drugiego doogonowo.

Druga warstwa mięśni z prążkowanym wyglądem powinna być teraz widoczna. Zlokalizuj linię środkową drugiej warstwy mięśni, gdzie można zaobserwować dwa podłużne mięśnie, połączone cienką błoniastą tkanką. Następnie użyj mikronożyczek, aby wyciąć tkankę błoniastą i oddzielić dwa mięśnie podłużne.

Wyreguluj zwijacze tak, aby odsłonić trzecią warstwę cienkiej kufy zakrywającej kręgosłup. Wyrostki kolczyste można wyczuć, lekko dotykając kleszczami trzeciej warstwy mięśni. Użyj mikronożyczek, aby wykonać małe nacięcie na trzeciej warstwie mięśnia. I delikatnie zeskrob mięsień z kości za pomocą kirety lub skalpela w bok, aby wyraźnie odsłonić kręgi.

Aby odsłonić lewe DRG od C5 do C8, użyj pary cienkich rongeurów do wykonania lewej hemilaminektomii na kręgach od C4 do T1, ostrożnie usuwając część blaszki i szypułki. Po wystawieniu wystarczającej ilości DRG do wstrzyknięcia, należy przygotować strzykawkę, umieszczając wypełnioną wirusem mikrolitrową strzykawkę wyposażoną w specjalnie wykonaną igłę o rozmiarze 33 na stereotaktycznym uchwycie strzykawki. Następnie należy użyć igły ze skosem w rozmiarze 30, aby wykonać mały powierzchowny otwór na każdym z docelowych DRG, aby pomóc w wprowadzeniu igły do wstrzykiwań. Delikatnie wyreguluj współrzędne stereotaktyczne, aby włożyć igłę o rozmiarze 33 do środka DRG.

Idealnie byłoby, gdyby igła była umieszczona w samym środku DRG, aby zapewnić równomierną dyfuzję wstrzykniętego roztworu w całym DRG.

Po wprowadzeniu igły należy użyć pompy strzykawkowej do infuzji, aby wstrzyknąć 1 mikrolitr wirusa do każdego DRG. Podczas wstrzyknięcia DRG będzie powoli zmieniać kolor, jeśli roztwór wirusa zawiera kolorowy barwnik. Nie należy nadmiernie wkładać igły, ponieważ może to spowodować wyciek płynu z brzusznej strony DRG.

Jeśli podczas wstrzykiwania dojdzie do wycieku, należy natychmiast wyregulować położenie igły. Trzy minuty po zakończeniu wstrzyknięcia należy wyjąć igłę do wstrzykiwań. Aby wykonać jednoczesne zmiażdżenie korzenia grzbietowego od C5 do C8, zmiażdż każdy korzeń trzy razy przez 10 sekund za pomocą pary kleszczy z cienką końcówką. Całkowicie przeciwstawij się końcom kleszczy. W miejscu zgniecenia powinna pojawić się biała linia w tkance.