Dwufotonowe obrazowanie in vivo siatkówki myszy

Weźmy znieczuloną transgeniczną mysz z głową zabezpieczoną pod kątem na uchwycie do obrazowania in vivo siatkówki myszy.

Siatkówka zawiera komórki zwojowe siatkówki lub RGC, wyrażające białko znakowane fluoroforem.

Nałóż smar do oczu i załóż szkiełko nakrywkowe na oko.

Pod mikroskopem równomiernie oświetlić siatkówkę, aby wzbudzić białka fluorescencyjne w RGC.

Korzystając z emitowanej fluorescencji, uzyskaj szeroki widok płaszczyzny ogniskowej RGC i nieostrych RGC.

Przełącz na tryb obrazowania dwufotonowego, skupiając niskoenergetyczne światło bliskiej podczerwieni w warstwie RGC.

W punkcie ogniskowym, połączona energia z dwóch fotonów wzbudza fluorofor, który następnie uwalnia energię w postaci fluorescencji.

Ponieważ wzbudzenie jest ograniczone do jednego punktu, fluorescencja z innych płaszczyzn ogniskowych jest zminimalizowana.

Przechwytuj obrazy w wielu płaszczyznach ogniskowych wzdłuż osi z, aby zobrazować całą warstwę RGC.

Nałóż nawilżające krople do oczu na oba oczy myszy. Obróć główne ramię uchwytu głowicy, aż źrenica jednego oka zorientuje się w linii ze ścieżką światła, a następnie umieść szkiełko nakrywkowe o numerze 1.5 w kompaktowym uchwycie filtra. Po przymocowaniu uchwytu