JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:27 min. • May 29th, 2025
Zacznij od znieczulonej myszy z eksperymentalnym autoimmunologicznym zapaleniem mózgu i rdzenia kręgowego lub EAE. Ten stan powoduje stan zapalny w oczach i mózgu.
Umieść mysz w aparacie do obrazowania, wyrównując górną część pleców na środku.
Przykryj dolną część myszy czarną szmatką, aby zapobiec zakłóceniom sygnału z tego obszaru.
Użyj oprogramowania do obrazowania, aby zarejestrować pozycję myszy.
Weź strzykawkę wypełnioną odczynnikiem zawierającym podłoże bioluminescencyjne i wstrzyknij go dootrzewnowo myszy.
Odczynnik krąży i dostaje się do miejsca zapalenia, gdzie substrat oddziałuje z enzymami specyficznymi dla stanu zapalnego.
Reakcja enzym-substrat wytwarza sygnał bioluminescencyjny.
Rób zdjęcia w regularnych odstępach czasu, aby monitorować ten sygnał.
Nerw wzrokowy leży blisko powierzchni, dzięki czemu bioluminescencja wokół oczu jest widoczna. W przeciwieństwie do tego, sygnały z mózgu są słabe, ponieważ czaszka pochłania emitowane światło.
Na obrazie niebieski oznacza łagodny stan zapalny, a czerwony oznacza ciężki stan zapalny.
Aby wykonać obrazowanie in vivo, utrzymuj myszy w znieczuleniu izofluranem od 2 do 2,5% podczas wszystkich procedur obrazowania. Umieść dwie myszy obok siebie w aparacie i umieść górne kolce myszy pośrodku.
Następnie osłoń miejsce szczepienia czarną szmatką. Otwórz oprogramowanie do przechwytywania obrazu i zainicjuj kamerę. Następnie wykonaj obraz bazowy, aby ocenić prawidłowe ułożenie myszy.
Następnie użyj ostrości B z odległością 6.5 centymetra od aparatu, aby uchwycić wszystkie obrazy. Następnie wymieszaj gotowy do użycia odczynnik chemiluminescencyjny w 40 miligramach na mililitr przed napełnieniem strzykawki. Następnie wstrzyknij 100 mikrolitrów myszom dootrzewnowo i uchwyć obrazy bioluminescencji 5, 10 i 15 minut po wstrzyknięciu.