Obrazowanie wapnia w czasie rzeczywistym przyśrodkowej kory przedczołowej myszy za pomocą miniskopu

Weźmy znieczuloną, transdukowaną mysz, której wszczepiono soczewkę o indeksie gradientu skierowaną do przyśrodkowej kory przedczołowej, gdzie neurony wyrażają genetycznie zakodowane wskaźniki wapnia.

Zdejmij pokrywę obiektywu i oczyść jej powierzchnię, aby zapewnić czystą przepuszczalność światła.

Przymocuj miniskop do uchwytu obiektywu.

Dostosuj pozycję miniskopu, aby określić optymalną płaszczyznę ogniskowej. Ta regulacja zapewnia wyraźną wizualizację ciał komórek neuronalnych.

Odłącz i poczekaj, aż mysz odzyska sprawność.

Podłącz do miniskopu i przenieś mysz do komory z konfiguracją nagrywania behawioralnego.

Podczas obrazowania miniskop emituje światło, aby wzbudzić wskaźniki wapnia, które fluoryzują po wewnątrzkomórkowym napływie wapnia.

Soczewka o indeksie gradientu przekazuje te sygnały optyczne z głębokich tkanek mózgowych do miniskopu, zmniejszając rozpraszanie światła i umożliwiając wizualizację aktywności neuronalnej w czasie rzeczywistym.

Przetwarzaj zarejestrowaną przejściową aktywność wapnia z obserwacjami behawioralnymi, aby skorelować aktywność neuronów z określonymi zachowaniami.

Po krótkim znieczuleniu myszy izofluranem, przed zdjęciem nasadki ochronnej poluzuj blokującą