Donosowe podawanie mezenchymalnych komórek macierzystych w mysim modelu urazowego uszkodzenia mózgu

Zacznij od znieczulonej myszy z urazowym uszkodzeniem mózgu.

W miejscu urazu demienizacja aksonów i uszkodzenie neuronów wywołują uwalnianie cytokin prozapalnych.

Zabezpiecz mysz i donosowo dostarcz enzym proteolityczny.

Następnie ustaw mysz ekranem do góry na krótki czas i powtórz podawanie enzymu.

Enzymy proteolityczne degradują macierz zewnątrzkomórkową w nabłonku nosa i zwiększają przepuszczalność komórek.

Następnie podaj donosowo znakowaną mezenchymalną komórkę macierzystą lub roztwór MSC.

Przytrzymaj głowę myszy w pozycji pionowej przez chwilę, aby zapobiec przedwczesnemu drenażowi i umożliwić wchłanianie MSC do tkanki nosowej.

Powtórz proces dostarczania MSC.

Pozwól myszy na odzyskanie sprawności.

Sygnały chemotaktyczne cytokin prozapalnych kierują MSCs do migracji z jamy nosowej do miejsca uszkodzenia mózgu.

W miejscu urazu MSC wydzielają czynniki neurotroficzne, które sprzyjają remielinizacji. Podkreśla to potencjał neuroterapeutyczny MSCs w zakresie naprawy neuronów.

W przypadku dostarczania komórek, po potwierdzeniu braku odpowiedzi na uszczypnięcie palca u nogi, poszarp mysz, jednocześnie unieruchamiając czaszkę. Umieść końcówkę pipety zawierającej 4 jednostki hialuronidazy na mikrolitr PBS w pobliżu nosa myszy pod kątem 45 stopni i podaj 3 mikrolitry zawiesiny hialuronidazy do każdego nozdrza. Umieść zwierzę twarzą do góry na czystej podkładce na pięć minut, a następnie powtórz zabieg cztery razy, co daje w sumie 100 jednostek leczenia hialuronidazą.

Po ostatnim zabiegu umieść mysz z powrotem na podkładce na 30 minut, a następnie unieruchomij mysz, jak pokazano powyżej. Z unieruchomioną głową podawać 3 mikrolitry zawiesiny mezenchymalnych komórek macierzystych do każdego nozdrza przez okres trzech sekund na podanie roztworu, przytrzymując mysz w pozycji przez 30 sekund, aż krople próbki całkowicie znikną. Po dwóch minutach powtórz podawanie do trzech razy, aż zostanie dostarczona cała objętość mezenchymalnych komórek macierzystych. Następnie wróć mysz do klatki z monitorowaniem aż do pełnego leżenia.