Celowane dostarczanie substancji do mózgu myszy poprzez infuzję do tętnicy szyjnej wewnętrznej

Weźmy znieczuloną mysz z odsłoniętą wspólną tętnicą szyjną lub CCA, która rozdziela się na tętnicę szyjną zewnętrzną lub ECA i tętnicę szyjną wewnętrzną lub ICA.

Szczelnie zszyj dystalny ECA, umieść luźny węzeł w pobliżu rozwidlenia, a następnie zapnij CCA i ICA, aby ograniczyć przepływ krwi.

Naciąć ETO, a następnie wprowadzić kapilar połączony ze strzykawką zawierającą substancję badaną.

Przesuń kapilarę między rozwidleniem a zaciskiem CCA, a następnie zabezpiecz ją, zaciskając proksymalny węzeł ECA.

Usuń klips ICA i wstrzyj substancję w celu ukierunkowanego dostarczenia do mózgu, omijając krążenie ogólnoustrojowe.

Substancja przenika przez barierę krew-mózg, aby dotrzeć do miąższu mózgu.

Po odsłonięciu ECA i ICA za pomocą kleszczy umieść segment 1-centymetrowego szwu nylonowego pod tętnicą szyjną zewnętrzną, a następnie umieść drugi segment o długości 1 centymetra. Następnie zawiąż stały węzeł w najwyższym możliwym punkcie ETO.

W najniższym możliwym punkcie ECA bezpośrednio nad rozwidleniem CCA zawiązać luźniejszy rozsuwany węzeł. Następnie użyj zacisków do naczyń, aby zamknąć CCA w najniższym możliwym punkcie i zamknąć ICA.

Prawidłowe zamknięcie tętnicy szyjnej wewnętrznej przed wykonaniem małego nacięcia w tętnicy szyjnej zewnętrznej zapobiegnie krwawieniu.

Teraz, za pomocą nożyczek sprężynowych do mikrodysekcji, wykonaj 2-milimetrowe nacięcie w ECA między dwoma węzłami.

Ważne jest, aby cięcie było małe, ponieważ duże nacięcie spowoduje wyciek substancji, która ma być podawana.

Zmontuj system infuzyjny, podłączając 6 cali rurki kapilarnej do strzykawki tuberkulinowej zawierającej 250 mikrolitrów substancji, która ma być podawana. Następnie delikatnie wsunąć końcówkę rurki kapilarnej w nacięcie w ECA. Kontynuuj przesuwanie końcówki, aż osiągnie połowę odległości między rozwidleniem a klipsem na CCA.

Zawiąż dolny węzeł ECA. Sprawdź, czy węzeł jest wystarczająco luźny, aby zapewnić płynność kapilarną i wystarczająco szczelny, aby zapobiec wyciekowi. Następnie wyjmij klips z ICA. Delikatnie docisnąć tłok strzykawki, umożliwiając infuzję substancji z prędkością około 10 mikrolitrów na sekundę.

Po infuzji substancji badanej umieścić klips z powrotem na ICA. Delikatnie wyjmij rurkę kapilarną, a następnie całkowicie zawiąż dolny węzeł ECA. Usuń zacisk z ICA i CCA. Następnie zdejmij retraktor lub haczyki na chusteczki i poduszkę.

Oczyść obszar, który ma być zszyty, sterylnym roztworem soli fizjologicznej, a następnie zamknij nacięcie za pomocą nylonowych szwów. Po podaniu zatwierdzonego środka przeciwzapalnego i przeciwbólowego w celu złagodzenia dyskomfortu pooperacyjnego, umieść zwierzę w klatce na poduszce grzewczej na co najmniej godzinę i monitoruj powrót do zdrowia.