JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:33 min • June 17th, 2025
Napełnij strzykawkę roztworem zawierającym wirusy związane z adenowirusem (AAV) i lidokainę, środek znieczulający miejscowo.
Umieść obudzoną mysz w pozycji leżącej i zakryj jej górną część ciała.
Przytrzymaj obręcz miedniczną myszy i ogol dolną część pleców, aby odsłonić skórę. Wysterylizuj go jodem i etanolem.
Zlokalizuj szczelinę w dolnym odcinku kręgosłupa i delikatnie naciśnij, aby ją zaznaczyć.
Obrócić ogon, aby wyrównać grzbiet i włożyć strzykawkę w pionie.
Dostosuj kąt, aż nastąpi ruch ogonem, potwierdzając wejście igły do przestrzeni śródoponowej, w której przepływa płyn mózgowo-rdzeniowy lub płyn mózgowo-rdzeniowy.
Powoli wstrzykiwać roztwór, aby uzyskać równomierne rozprowadzenie.
Cząsteczki wirusa wiążą się z neuronami, wnikają do środka i uwalniają swój materiał genetyczny do jądra, umożliwiając ukierunkowaną ekspresję genów.
Lidokaina tymczasowo blokuje sygnały nerwowe, powodując krótkotrwały paraliż nóg, potwierdzając pomyślny poród w płynie mózgowo-rdzeniowym.
Protokół ten ustanawia podawanie dooponowe jako skuteczną metodę leczenia chorób OUN.
Przed rozpoczęciem procedury przymocuj igłę o rozmiarze 27 do strzykawki Hamiltona o pojemności 25 mikrolitrów i wyrównaj skośną końcówkę igły ze skalą wolumetryczną na strzykawce, a następnie ostrożnie załaduj do strzykawki 8 mikrolitrów 4 razy 10 do 10 kopii genomu roztworu wirusa, uważając, aby uniknąć pęcherzyków.
Następnie umieść obudzoną mysz w wieku od 30 do 70 dni, ważącą od 12 do 30 gramów na łóżku w pozycji leżącej w kapturze bezpieczeństwa biologicznego i przykryj górną część ciała sterylną gazą, aby uspokoić mysz i uniknąć ugryzienia. Mocno chwyć mysz za obręcz miedniczną, kciukiem po jednej stronie, a palcem wskazującym i środkowym po drugiej, utrzymując skórę między obustronnymi obręczami miednicznej napiętą kciukiem i palcem wskazującym, a następnie ogol futro między obustronnymi obręczami miednicznej i wysterylizuj odsłoniętą skórę peelingiem na bazie jodku i 70% etanolu.
W celu bezpośredniego dokanałowego podania roztworu wirusa związanego z adenowirusem, należy wykonać badanie dotykowe przestrzeni międzykręgowej wzdłuż linii środkowej między obustronnymi obręczami miednicy i za pomocą paznokcia wcisnąć wgłębienie w skórze, aby wskazać przestrzeń międzykręgową od L5 do L6. Obróć lekko i delikatnie podstawę ogona, aby odsłonić linię środkową kręgosłupa i wyreguluj skos igły w kierunku głowy zwierzęcia. Trzymając mysz mocno zamocowaną na swoim miejscu, wyrównaj igłę wzdłuż linii środkowej kręgosłupa i delikatnie i pionowo włóż igłę w środek wgłębienia, utrzymując strzykawkę w środkowej płaszczyźnie strzałkowej.
Gdy igła zetknie się z kością, powoli zmniejsz kąt do około 30 stopni i wsuń igłę w przestrzeń międzykręgową. Nagłe machnięcie ogonem jest oznaką udanego wejścia w przestrzeń opony śródoponowej. Gdy igła wejdzie w przestrzeń międzykręgową, końcówka będzie mocno zaciśnięta. Wstrzyknąć roztwór wektorowy i utrzymać igłę w przestrzeni śródoponowej przez jedną minutę, a następnie powoli wycofać igłę z rotacją, aby zminimalizować wyciek.