JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:31 min. • August 7th, 2025
Weź znieczulonego szczura i nałóż smar do oczu.
Ogol docelową kończynę, wysterylizuj skórę i ustaw szczura tak, aby zapewnić optymalny dostęp do docelowego mięśnia.
Podnieś i nacinaj skórę, aby odsłonić mięsień.
Zapoznaj się ze zdjęciami płyt końcowych silnika lub MEP, regionów, w których zakończenia aksonów neuronów ruchowych łączą się z włóknami mięśniowymi, tworząc połączenia nerwowo-mięśniowe.
Mentalnie zmapuj obszar MEP na odsłonięty mięsień.
Weź szklaną mikropipetę zawierającą znacznik fluorescencyjny.
Wstrzyknąć znacznik domięśniowo w wiele punktów wzdłuż obszaru MEP.
Usuń nadmiar śladu, zamknij nacięcie i podaj środek przeciwbólowy.
Wstrzyknięcie zwiększa dostępność znacznika w połączeniach nerwowo-mięśniowych, ułatwiając jego endocytozę na końcach aksonów.
Znaczniki zamknięte w pęcherzykach są następnie transportowane wstecznie do ciał komórek neuronu ruchowego w rdzeniu kręgowym.
Obecność znakowanych znacznikiem neuronów ruchowych w rdzeniu kręgowym sugeruje neuroterapeutyczny potencjał dostarczania ukierunkowanego na MEP.
Aby wstrzyknąć żywy mięsień na płytki końcowe silnika, należy najpierw użyć ściągacza do mikropipet, aby wyciągnąć mikropipety szklane z graded wyposażone w tłoki. Następnie, za pomocą mikroskopu preparacyjnego, połam końcówki mikropipet parą kleszczyków tak, aby wewnętrzna średnica każdego światła wynosiła około 0,5 milimetra. Następnie napełnij wyciągnięte pipety fluorozłotem.
Teraz nałóż lubrykant do oczu na znieczulone zwierzę i ogol kończynę, która ma zostać wstrzyknięta. Użyj gazy, aby przetrzeć ogolony obszar trzema naprzemiennymi peelingami z chlorheksydyny i 70% alkoholu. Następnie umieść zwierzę na czystej podkładce, aby umożliwić dostęp do docelowego mięśnia. Kiedy zwierzę jest w pozycji, użyj kleszczy z uchwytami do zębów, aby unieść skórę nad docelowym mięśniem z dala od leżącego poniżej mięśnia i użyj nożyczek chirurgicznych, aby wykonać nacięcie w skórze.
Zadbaj o to, aby nacięcie było wystarczająco duże, aby całkowicie odsłonić interesujący mięsień, przy minimalnym zakłóceniu powięzi. Następnie, używając zdjęć płyty końcowej silnika, aby mentalnie przetransponować położenie i kształt obszaru płyty końcowej silnika na mięsień i podano 3 do 4 zastrzyków od 1 do 2 mikrolitrów fluoro-złota na całej długości obszaru płyty końcowej silnika.
Po ostatnim wstrzyknięciu należy delikatnie przetrzeć mięsień, aby usunąć wszelkie przesączenie. Następnie użyj kleszczy, aby zbliżyć do siebie dwa końce naciętej skóry. Zamknij ranę klipsami chirurgicznymi i naciekaj całą rozpiętość rany odpowiednim środkiem znieczulenia miejscowego.