Name: Ortotopowy mysi model raka jelita grubego (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:21:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Poznaj metodę tworzenia ortotopowego modelu myszego raka jelita grubego poprzez iniekcję komórek nowotworowych do ściany kątnicy. Ten model umożliwia badanie naturalnego przebiegu choroby i testowanie nowych terapii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Katedra Chirurgii, University of California, San Francisco Raymond Shaheen, M.D.

I. Przygotowanie komórek
<ol>
<li>Komórki raka jelita grubego hoduje się w kulturze i zbiera, gdy są subkonfluentne.</li>
<li>Przygotowuje się zawiesinę pojedynczych komórek w soli fizjologicznej buforowanej fosforanami i przechowuje ją w lodzie.</li>
</ol>
II. Przygotowanie guza
<ol>
<li>Mysz z wcześniej wywołanym podskórnym guzem jelita grubego zostaje poddana eutanazji.</li>
<li>Guz podskórny zostaje usunięty przy użyciu techniki sterylnej i podzielony na fragmenty o wielkości 2-3 mm.</li>
<li>Fragmenty guza są przechowywane w soli fizjologicznej fosforanowej w lodzie.</li>
</ol>
III. Przygotowanie myszy
Uwaga: W naszym laboratorium do znieczulania myszy stosujemy wziewny izofluran; alternatywnie można zastosować środki znieczulające w formie iniekcji, aby uzyskać ten sam efekt
<ol>
<li>Głębokość znieczulenia ocenia się za pomocą ucisku palca u nogi. Odruch wycofania po uciśnięciu palca nie powinien wystąpić.</li>
<li>Na tym etapie można podać antybiotyki.</li>
<li>Znieczuloną mysz, która została uprzednio ogolona, ustawia się w odpowiedniej pozycji.</li>
<li>Brzuch przygotowuje się za pomocą roztworu betadyny.</li>
<li>Brzuch oraz miejsce operacyjne zostają obłożone sterylnymi chustami.</li>
</ol>
IV. Laparotomia
<ol>
<li>W skórze wykonuje się niewielkie nacięcie</li>
<li>Mięśnie ściany brzucha zostają chwycone i uniesione</li>
<li>Następuje wejście do jam brzusznej, a jedno ostrze nożyczek służy do odsunięcia zawartości jamy brzusznej</li>
<li>Nacięcie zostaje rozszerzone do 2-3 cm</li>
</ol>
V. Odsłonięcie kątnicy
<ol>
<li>Identyfikuje się i wypreżnia kątnicę wraz z jej ślepym workiem</li>
<li>Kątnicę izoluje się od reszty organizmu myszy, używając wcześniej dociętej, sterylnej gazy</li>
<li>Do utrzymania wilgotności kątnicy stosuje się ciepły roztwór soli fizjologicznej</li>
</ol>
VI. Wstrzykiwanie komórek do ściany kątnicy
<ol>
<li>Do wstrzyknięcia 50 µL objętości komórek w ścianę kątnicy używa się igły o rozmiarze 27 G lub cieńszej</li>
<li>Igłę należy wyjąć</li>
<li>Miejsce wstrzyknięcia poddaje się kontroli, aby upewnić się, że nie występuje wyciek</li>
<li>Kątnicę wprowadza się z powrotem do jamy brzusznej</li>
</ol>
VII. Przeszczepienie guza na kątnicę
Uwaga: Oprócz wstrzykiwania komórek w ścianę kątnicy, alternatywnym podejściem jest przeszczepienie guza na kątnicę
<ol>
<li>Na kątnicy wykonuje się szew w kształcie ósemki, używając nici o rozmiarze 6-0 lub 7-0</li>
<li>Ścianę kątnicy lekko uszkadza się</li>
<li>Następnie umieszcza się fragment guza</li>
<li>Szew zostaje zawiązany</li>
<li>Kątnica zostaje wprowadzona z powrotem do jamy brzusznej</li>
</ol>
VIII. Zamknięcie ściany brzusznej i rekonwalescencja myszy
<ol>
<li>Ścianę brzuszną myszy zamyka się za pomocą trzech szwów przerywanych, używając nici chirurgicznej o rozmiarze 3-0 lub 4-0</li>
<li>Alternatywnie można zastosować prosty szew ciągły</li>
<li>Na tym etapie można podać przeciwbólowe leki pooperacyjne oraz bolus płynowy</li>
<li>Pozostawia się mysz do wybudzenia z anestezji.</li>
</ol>
Uwaga: W przypadku anestetyków wziewnych proces ten trwa zazwyczaj 30 sekund
IX. Wyniki - Guz pierwotny i przerzuty do wątroby
<img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_8/A.png" alt="Analiza próbki tkanki; zbliżenie na wypreparowany organ, badanie mikroskopowe, odkrycie biomedyczne." data-altupdatedat="1787630408000"> <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_9/B.png" alt="Disekcja mózgu ukazująca strukturę naczyniową; eksperyment w badaniu biologicznym z użyciem pęsety." data-altupdatedat="1787630408000"> <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_10/C.png" alt="Obraz mikroskopu histologicznego podkreślający strukturę tkanki; obecność komórek nowotworowych; badanie patologiczne." data-altupdatedat="1787630408000"> Guz pierwotny – pokazany in situ (A) oraz z dowodami neowaskularyzacji (B); w barwieniu H&amp;E guzy są miejscowo naciekające (C)
 
<img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_11/D.png" alt="Disekcja organów zwierzęcych, obserwacja anatomiczna, pokazująca kształt i strukturę organu." data-altupdatedat="1787630408000"> Przerzuty w wątrobie – widok ex vivo (D)

<ol><li>Heijstek, M. W., Kraneburg, O., Rinkes Borel, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+colorectal+cancer+and+liver+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Surg%22%5BJournal%5D)">Mouse models of colorectal cancer and liver metastases.</a> Dig Surg. 22, 16-25 (2005).</li>
<li>Kobaek-Larsen, M., Thorup, I., Diederichsen, A., Fenger, C., Hoitinga, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+colorectal+cancer+and+its+metastases+in+rodent+models%3A+comparative+aspects+with+those+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Review of colorectal cancer and its metastases in rodent models: comparative aspects with those in humans.</a> Comp Med. 50, 16-26 (2000).</li>
<li>Wilmanns, C., Fan, D., O'Brian, C. A., Bucana, C. D., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+and+ectopic+organ+environments+differentially+influence+the+sensitivity+of+murine+colon+carcinoma+cells+to+doxorubicin+and+5-fluorouracil%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orthotopic and ectopic organ environments differentially influence the sensitivity of murine colon carcinoma cells to doxorubicin and 5-fluorouracil.</a> Int J Cancer. 52, 98-104 (1992).</li>
<li>Kashtan, H., Rabau, M., Mullen, J. B., Wong, A. H. C., Roder, J. C., Shiptz, B., Stern, H. S., Gallinger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-rectal+injection+of+tumor+cells%3A+a+novel+animal+model+of+rectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Intra-rectal injection of tumor cells: a novel animal model of rectal cancer.</a> Surg Oncol. 1, 251-256 (1992).</li>
</ol>

Choć mysie modele guzów podskórnych są łatwe do ustanowienia i monitorowania, oczywiste jest, że model ten nie może odtworzyć pierwotnej lokalizacji anatomicznej raka jelita grubego. Ze względu na różnice w mikrośrodowisku wykazano, że komórki raka jelita grubego rosnące pod skórą zmieniają swój fenotyp i prawie zawsze nie ulegają progresji ani nie dają przerzutów 1,2. W rzeczywistości odpowiedź guza na terapię może drastycznie różnić się w zależności od tego, czy komórki nowotworowe zostały wszczepione w loka...

<table><tbody><tr><td>Pożywki i komponenty do hodowli komórkowej</td><td></td><td></td><td>będą się różnić w zależności od użytej linii komórkowej</td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna (PBS)</td><td>BioWhittaker</td><td>17-512F</td><td>dostępna również u wielu innych dostawców</td></tr><tr><td>Probówki wirówkowe 15 mL, polipropylenowe</td><td>Corning</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>Płytki 6-dołkowe z pokrywką</td><td>BD Biosciences</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Pinceta Iris, prosta, z ząbkami</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>15914</td><td>zaleca się posiadanie dwóch takich narzędzi</td></tr><tr><td>Nożyczki sekcyjne Iris, proste, ostre</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14393</td><td></td></tr><tr><td>Igłotrzymacz (standardowy)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14109</td><td></td></tr><tr><td>Igłotrzymacz (Castroviejo)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14137</td><td></td></tr><tr><td>Cidex Plus</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>7364</td><td>narzędzia należy okresowo autoklawować, ale można je również sterylizować poprzez namaczanie w roztworze Cidex</td></tr><tr><td>Nici chirurgiczne 6-0 lub 7-0</td><td></td><td></td><td>do ślepego jelita; courtesy of Department of Surgery, UCSF</td></tr><tr><td>Nici chirurgiczne 3-0 lub 4-0</td><td></td><td></td><td>do ściany brzucha; courtesy of Department of Surgery, UCSF</td></tr><tr><td>Aparat do znieczulania / Izofluran</td><td>J.A. Baulch and Associates</td><td>3206</td><td>dostępne również u wielu innych dostawców</td></tr><tr><td>Mata grzewcza, jednorazowa, 6&quot; x 6&quot;</td><td>Prism Technologies</td><td>20419</td><td></td></tr><tr><td>Taśma, pomarańczowa, 13 mm x 13 m</td><td>Fisher Scientific</td><td>15901F</td><td>do unieruchomienia znieczulonej myszy</td></tr><tr><td>Trymer Pro-Cord/Cordless</td><td>Oster Professional Products</td><td>78997-010</td><td>do strzyżenia futra myszy</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027132</td><td>można nabyć w każdym sklepie z artykułami medycznymi</td></tr><tr><td>Gaza 2 x 2, 3-warstwowa</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson</td><td>7635</td><td>można nabyć w każdym sklepie z artykułami medycznymi</td></tr><tr><td>Pole sterylne, bariera, 16&quot; x 29&quot;</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson</td><td>0905</td><td>można nabyć w każdym sklepie z artykułami medycznymi</td></tr><tr><td>Aplikatory z końcówką bawełnianą, 6&quot;</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-960-3Q</td><td>można nabyć w każdym sklepie z artykułami medycznymi</td></tr><tr><td>Strzykawka, 10 cc, z końcówką Luer-lock</td><td>BD Biosciences</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka, 1 cc, tuberkulinowa, z końcówką typu slip</td><td>BD Biosciences</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>Igła 27 1/2 G</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Igła 30 G</td><td>BD Biosciences</td><td>305106</td><td></td></tr></tbody></table>

ortotopowy model raka jelita grubego u myszy

Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Tradycyjny podskórny model nowotworowy nie jest optymalny do badania raka jelita grubego. Ortotopowe modele mysie raka jelita grubego, w których komórki nowotworowe rozwijają się w ich naturalnej lokalizacji, z wysoką wiernością odwzorowują przebieg choroby u ludzi. Do stworzenia tego modelu można zastosować dwie techniki. Obie metody są podobne i wymagają znieczulenia myszy oraz laparotomii w celu odsłonięcia kątnicy. Pierwsza technika polega na wstrzyknięciu zawiesiny komórek raka jelita grubego w ścianę kątnicy. Komórki nowotworowe są najpierw hodowane in vitro, zbierane w fazie subkonfluencji i przygotowywane w formie zawiesiny pojedynczych komórek. Małą objętość komórek wstrzykuje się powoli, aby zapobiec wyciekowi. Druga technika polega na przeszczepieniu fragmentu guza podskórnego na kątnicę. Mysz z wcześniej indukowanym podskórnym nowotworem jelita grubego zostaje uśmiercona, a guz usunięty przy użyciu techniki sterylnej. Fragment guza jest dzielony na mniejsze części w celu przeszczepienia ich innej myszy. Przed transplantacją ścianę kątnicy delikatnie uszkadza się, aby ułatwić infiltrację komórek nowotworowych. Czas rozwoju guzów pierwotnych i przerzutów do wątroby będzie się różnić w zależności od zastosowanej techniki, linii komórkowej oraz gatunku myszy. Ten ortotopowy model mysi jest użyteczny w badaniu naturalnej progresji raka jelita grubego oraz testowaniu nowych środków terapeutycznych przeciwko temu nowotworowi.

Do ustanowienia tego modelu można wykorzystać dwie techniki: wstrzyknięcie zawiesiny komórek nowotworowych w ścianę kątnicy lub przeszczepienie fragmentu guza podskórnego na kątnicę. Model ten jest przydatny do badania naturalnej progresji raka jelita grubego oraz testowania nowych środków terapeutycznych przeciwko rakowi jelita grubego.

Ortotopowy model raka jelita grubego u myszy

Tradycyjny model guza podskórnego nie jest idealny do badania raka jelita grubego. Ortotopowe modele mysie raka jelita grubego, które charakteryzują się...

Witam, nazywam się William Sang. Pracuję w laboratorium dr. Edgara Engelmana w Katedrze Patologii na Uniwersytecie Stanforda. Jestem również rezydentem chirurgii na Uniwersytecie Kalifornijskim w San Francisco.Dzisiaj pokażę Państwu, jak opracować ortotopowy model raka jelita grubego u myszy. Model ten jest przydatny do badania naturalnej progresji raka jelita grubego oraz do testowania nowych środków terapeutycznych przeciwko temu nowotworowi. Stanowi on alternatywę dla tradycyjnego modelu nowotworów podskórnych.Podskórny model nowotworu jest mniej niż idealny, ponieważ komórki nowotworowe rosnące pod skórą wykazują zmieniony fenotyp i często nie postępują ani nie dają przerzutów. W rzeczywistości odpowiedź nowotworu na terapię może się znacznie różnić w zależności od tego, czy komórki nowotworowe zostały wszczepione podskórnie, czy w lokalizacji ortotopowej. Do ustanowienia ortotopowego modelu raka jelita grubego u myszy można zastosować dwie techniki.Jedna z technik polega na wstrzyknięciu zawiesiny komórek raka jelita grubego w ścianę SQL. Druga technika polega na przeszczepieniu fragmentu guza podskórnego na kątnicę. Obie techniki są podobne i obejmują następujące etapy: po pi

orthotopic-mouse-model-of-colorectal-cancer

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Ten film opisuje protokół generowania mysiego modelu ortotopowego ksenoprzeszczepu jelita grubego pochodzącego od pacjenta do badania progresji komórek raka jelita grubego u myszy bez otyłości z cukrzycą/ciężkim złożonym niedoborem odporności (NOD/SCID). Ten mysi model pomaga w zrozumieniu wzorca wzrostu guza pierwotnego i przerzutów.

Generowanie mysiego modelu raka jelita grubego PDOX: badanie progresji raka jelita grubego w modelu mysim

Ten film opisuje technikę generowania organoidów CRC transdukowanych przez cząsteczki lentiwirusowe GFP w celu umożliwienia obrazowania fluorescencyjnego. Te organoidy oznaczone GFP, po umieszczeniu w modelach zwierzęcych, pomagają w badaniu inwazji guza i przerzutów.

Znakowanie komórek organoidowych CRC: metoda generowania komórek organoidowych raka jelita grubego transdukowanych przez GFP lentiwirusem

Ten film opisuje protokół tworzenia mysiego modelu spontanicznych przerzutów ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów z rakiem jelita grubego lub PDX. Te modele ksenoprzeszczepów częściowo naśladują cechy ludzkich nowotworów i rozumieją krytyczne aspekty nowotworów złośliwych u ludzi, w tym inwazję i przerzuty.

Mysie modele spontanicznych przerzutów: platforma do badania potencjału przerzutowego komórek raka jelita grubego wstrzykiwanych ortotopowo

Film opisuje technikę iniekcji śródśladowej komórek rakowych w celu opracowania ortotopowego modelu myszy z wysoce jednorodnymi guzami. W związku z tym ortotopowy model myszy umożliwia realistyczną symulację przerzutów, stanowiąc cenne narzędzie do badania zmian fenotypu podczas wzrostu i rozprzestrzeniania się guza.

Wstrzyknięcie śródśladowych komórek nowotworowych: technika dostarczania komórek rakowych w celu ustalenia ortotopowego modelu myszy raka jelita grubego

Celem tego protokołu jest zastosowanie dynamicznego rezonansu magnetycznego wzmocnionego kontrastem (DCE-MRI) dla ortotopowych ksenoprzeszczepów guza trzustki u myszy. DCE-MRI jest nieinwazyjną metodą analizy mikrokrążenia w tkance docelowej i przydatną do oceny odpowiedzi naczyniowej w guzie po nowej terapii.

Obrazowanie rezonansu magnetycznego z kontrastem dynamicznym ortotopowego modelu myszy z rakiem trzustki

Zdolność klonów przerzutowych do kolonizacji odległych miejsc zależy od ich zdolności do proliferacji i/lub zdolności do przetrwania w mikrośrodowisku gospodarza bez znaczącej proliferacji. W tym miejscu przedstawiamy model zwierzęcy, który umożliwia ilościową wizualizację obu typów kolonizacji wątroby przez klony z przerzutami.

Zaawansowany zwierzęcy model przerzutów jelita grubego w wątrobie: techniki obrazowania i właściwości klonów z przerzutami

Opisujemy powstawanie ortotopowych guzów jelita grubego poprzez wstrzykiwanie komórek nowotworowych lub organoidów do jelita ślepego myszy i późniejszą izolację krążących komórek nowotworowych (CTC) z tego modelu.

Izolacja krążących komórek nowotworowych w ortotopowym mysim modelu raka jelita grubego

Przedstawiono protokół tworzenia genetycznie modyfikowanego mysiego modelu raka jelita grubego poprzez segmentowe zakażenie adeno-cre i jego nadzorowanie za pomocą kolonoskopii o wysokiej rozdzielczości.

Genetycznie zmodyfikowany mysi model sporadycznego raka jelita grubego

Ten protokół opisuje generowanie modeli ortotopowych ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów poprzez dopęcherzowe wkraplanie komórek raka urotelialnego o wysokim stopniu złośliwości lub dodoodbytnicze wstrzykiwanie komórek raka jelita grubego do myszy z nieotyłym cukrzycą/ciężkim złożonym niedoborem odporności (NOD/SCID) w celu pierwotnego wzrostu guza i spontanicznych przerzutów pod wpływem komórek zrębu węzłów chłonnych, co naśladuje postęp ludzkich chorób przerzutowych.

Ortotopowe modele ksenoprzeszczepów pobrane od pacjentów dla ludzkiego raka urotelialnokomórkowego i raka jelita grubego, wzrostu guza i spontanicznych przerzutów

Ten protokół opisuje ortotopową implantację komórek nowotworowych pochodzących od pacjenta w ścianie jelita ślepego myszy z niedoborem odporności. Model podsumowuje zaawansowany rak jelita grubego, chorobę z przerzutami i pozwala na ocenę nowych leków terapeutycznych w klinicznie istotnym scenariuszu przerzutów do płuc i wątroby.

Ortotopowa implantacja komórek nowotworowych pochodzących od pacjenta u myszy podsumowuje zaawansowanego raka jelita grubego

Niniejsze badanie koncentruje się na indukcji in vivo podskórnej indukcji luminescencyjnych komórek raka jelita grubego w modelu mysim oraz na późniejszym pomiarze luminescencji za pomocą systemu obrazowania. Procedura ma na celu stworzenie powtarzalnego modelu wzrostu guza do monitorowania w czasie rzeczywistym i oceny terapeutycznej.

Podskórne zastrzyki ludzkich komórek raka jelita grubego u athymicznych nagich myszy w celu oceny skuteczności przeciwnowotworowej

Poznaj metodę tworzenia ortotopowego modelu myszego raka jelita grubego poprzez iniekcję komórek nowotworowych do ściany kątnicy. Ten model umożliwia badanie naturalnego przebiegu choroby i testowanie nowych terapii.

Ortotopowy model raka jelita grubego u myszy

Przeglądaj więcej filmów