21 marca 2013
Ten artykuł opisuje szybką i efektywną metodę intubacji myszy do pomiarów funkcji płuc lub wkraplania płuc, która pozwala myszom na regenerację i badanie w późniejszym czasie. Zabieg polega na niedrogim światłowodowym źródle światła, które bezpośrednio oświetla tchawicę.
Ogólnym celem tej procedury jest intubacja myszy, aby umożliwić wentylację mechaniczną lub instalację płynów. Osiąga się to poprzez pierwszy montaż kaniuli i źródła światła. Drugim krokiem jest zawieszenie myszy pionowo za górne siekacze.
Po manipulowaniu głową i ciałem, aby umożliwić prostą drogę do intubacji, włóż wprowadzacz światłowodowy i kaniulę przez struny głosowe. Ostatecznie światłowód jest usuwany, a mysz z założoną kaniulą jest ustawiana w pozycji leżącej w celu wentylacji lub instalacji. Okej, dzisiaj pokażemy prostą procedurę intubacji płuca myszy.
Wizualizacja jest ważna, ponieważ często ułożenie myszy jest krytycznym krokiem w zakresie wprowadzania kaniuli, a więc przy odrobinie wprawy wymaga to trochę praktyki. Każdy, kto powinien być w stanie robić to wielokrotnie w stosunkowo krótkim czasie, demonstrując dziś procedurę, to dr Sandy Doss, który jest młodszym członkiem wydziału na wydziale medycyny pulmonologicznej i szkole medycznej. Pierwszym krokiem jest przygotowanie.
Przygotuj kaniulę dla dorosłych myszy, stosuje się cewnik dożylny o długości od jednego do 1,5 cala i rozmiarze 20. Następnie przygotuj światłowodowy, przecinając optyczny o długości 0,5 milimetra, aby wygładzić krawędź. Po przecięciu przytrzymaj włókno na końcu i wykonuj małe kółka tak, aby końcówki dotykały kawałka papieru ściernego o ziarnistości 1000.
Drugi koniec jest wkładany do korka z gumy silikonowej dopasowanego do otworu źródła światła. Najpierw przepchnij igłę o rozmiarze 18. Następnie włóż światłowód przez otwór igły i wyjmij igłę.
Gumowy korek jest następnie podłączany do halogenowego źródła światła o mocy 150 W. Następnie przełóż światłowodowy przez krótki kawałek rurki z gumy silikonowej. Zamocuj rurkę na miejscu, jednocześnie umożliwiając regulację światłowodowego.
Po umieszczeniu na miejscu włóż silikonową rurkę ciasno do końcówki przynęty kaniuli. Dostosuj położenie światłowodowego tak, aby przechodził przez kaniulę i około czterech milimetrów przed końcówką. Gdy wszystko jest już przygotowane, umieść znieczuloną mysz na pionowym wsporniku, ostrożnie zawieszając zwierzę za górne siekacze.
Po zabezpieczeniu, bardzo delikatnie, wyciągnij język i przytrzymaj go kciukiem i palcem wskazującym. Umieść środkowy palec między szyją a plastikowym wspornikiem podtrzymującym na języku z palcem wskazującym. Palec i kciuk służą do otwierania ust i prostowania drogi intubacji.
Kąt głowy reguluje się środkowym palcem za szyją, jak pokazano tutaj. Następnie wizualizuj struny głosowe. Jeśli sznurki nie są widoczne, delikatnie pociągnij mocniej za język, używając środkowego palca jako podparcia.
Po wizualizacji użyj światłowodowego zarówno jako źródła światła, jak i wprowadzacza, i przepchnij go przez struny głosowe. Jedną z oznak, że kaniula znajduje się w tchawicy, jest to, że mysz może sapać, gdy kaniula jest wkładana po raz pierwszy. Po włożeniu przesuń kaniulę o około pięć milimetrów dalej, a następnie uważając, aby nie przesunąć kaniuli, wycofaj światłowodowy, połóż mysz i zabezpiecz kaniulę kawałkiem taśmy i podeprzyj piastę kaniuli na kawałku plasteliny.
Małe lusterko dentystyczne przechowywane w zamrażarce może być użyte do potwierdzenia, że kaniula znajduje się w tchawicy, a nie w przełyku. Umieść lustro przed piastą przynęty cewnika. Jeśli cewnik znajduje się we właściwej pozycji, wydychany oddech spowoduje kondensację na lustrze.
Jeśli procedura intubacji jest wykonywana tylko w celu instalacji środków w aerozolu do płuc, można to zrobić, gdy mysz leży na wznak. Jednak w tej pozycji instalacje płynne są wykonywane bardziej efektywnie, gdy mysz jest nadal zawieszona w pozycji pionowej, a następnie następuje natychmiastowe usunięcie kaniuli w celu pomiaru czynności płuc. Zaintubowana, znieczulona mysz jest następnie podłączana do respiratora mechanicznego, jak pokazano tutaj.
Ustawienia respiratora powinny być wykonane przed rozpoczęciem intubacji, aby nie było opóźnień w wentylacji. Dla tej zaintubowanej myszy wyświetlany jest zapis ciśnienia i objętości wentylacji. Oceniliśmy zdolność metody do uzyskania powtarzalnych pomiarów oporu dróg oddechowych w okresie pięciu tygodni.
Dane na tym wykresie pokazują, że nie ma wpływu na wykonywanie powtarzających się pomiarów, ponieważ rezystancja podstawowa pozostaje względnie stała. U każdej z czterech myszy badanych w odstępach tygodniowych oceniliśmy szczelność uszczelki między tchawicą a kaniulą intubacyjną, wstrzykując bolusy powietrzne do płuc po poświęceniu myszy. Chociaż po stresie może wystąpić bardzo powolny wyciek, powrót do relaksacji, wycieki ciśnienia wydają się być minimalne.
Podczas wykonywania tej procedury bardzo ważne jest, aby zachować ostrożność podczas wyjmowania myszy z podstawki nośnej, ponieważ bardzo łatwo jest przypadkowo wyciągnąć kaniulę.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Niniejsza praca opisuje prostą i wydajną metodę intubacji myszy w celu pomiaru funkcji płuc lub instylacji dopłucnej. Procedura ta umożliwia myszom regenerację i ich dalsze badanie w późniejszym czasie, dzięki wykorzystaniu niedrogiego światłowodowego źródła światła, które bezpośrednio oświetla tchawicę.
Intubacja płuc myszy umożliwia prowadzenie podłużnych badań płucnych przy zmniejszonej liczbie zwierząt i zwiększonej mocy statystycznej dzięki wykorzystaniu każdego zwierzęcia jako własnej kontroli. Metoda ta wspomaga walidację celów oraz ograniczanie ryzyka mechanistycznego w modelach chorób układu oddechowego, pozwalając na wielokrotne oceny funkcjonalne w czasie. Technika wspomagana światłowodowo obniża bariery techniczne, czyniąc projekty podłużne dostępnymi dla większej liczby laboratoriów.
Metoda ta wpisuje się w proces odkrywania leków, od wczesnej walidacji celu po przedkliniczne badania skuteczności, szczególnie w przypadku wskazań oddechowych, gdzie podłużna ocena funkcji płuc jest kluczowym biomarkerem.