Metoda oceny funkcji efektorowych za pośrednictwem Fc indukowanych przez przeciwciała specyficzne dla hemaglutyniny grypy

Ogólnym celem tego protokołu jest ocena zdolności przeciwciała lub próbki surowicy do aktywacji funkcji efektorowej za pośrednictwem Fc. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie immunologii i wakcynologii poprzez pomiar aktywacji odporności zależnej od przeciwciał za pośrednictwem Fc. Główną zaletą tej techniki jest to, że eksperyment można przeprowadzić w ciągu 24 godzin od przygotowania materiału do analizy danych.

Tę procedurę zademonstruje Mark Bailey, doktorant z laboratorium Petera Palese. Aby indukować ekspresję hemaglutyniny wirusa grypy poprzez transfekcję, najpierw umieść ludzkie komórki embrionalnej nerki 293 w stężeniu dwa razy 10 do czwartej komórki na basenik w białej kulturze tkankowej traktowanej na 96-dołkowej płytce. Po czterech godzinach w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% CO2 transfekuj komórki 100 nanogramami DNA kodującego wirusową hemaglutyninę i 0,2 mikrolitra odczynnika do transfekcji na studzienkę i całkowitą objętością 50 mikrolitrów optymalnie zredukowanej pożywki surowicy 1X.