Uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne narządów poprzez symulację zmian hemodynamicznych w modelu przeszczepu wątroby szczura

Uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne narządu poprzez symulację zmian hemodynamicznych w modelu przeszczepu wątroby szczura. Uraz niedokrwienno-reperfuzyjny jest częstym zastosowaniem po przeszczepie wątroby. Pacjenci z zajęciem narządów pozawątrobowych zwykle dłużej pozostają w szpitalu, wydają więcej i mają gorsze rokowania.

Rozwój powikłań jest ściśle związany z długością fazy bezwątrobowej przeszczepu wątroby. Jednak podstawowe badania nad uszkodzeniem niedokrwienno-reperfuzyjnym po przeszczepie wątroby wykazały, że wskaźnik przeżycia po przeszczepieniu wątroby jest odwrotnie proporcjonalny do stopnia uszkodzenia narządów pozahaptowych. Opierając się na definicji fazy bezhaptycznej, przeprowadziliśmy symulację zmiany hemodynamicznej w transplantacji wątroby skutkującej uszkodzeniem niedokrwienno-reperfuzyjnym narządów pozahaptycznych.

Przedmiotem niniejszej pracy jest szczegółowy opis sposobu budowy zwierzęcego modelu fazy anhaptycznej u szczurów, podstawowe badania nad uszkodzeniem niedokrwienno-reperfuzyjnym po przeszczepieniu wątroby. Dr Yuan Yuan jest odpowiedzialny za wszystkie operacje wideo na zwierzętach. Dwa kleszcze okulistyczne, proste i zginające oraz soczewka międzygałkowa, kleszcze IOL, nożyczki okulistyczne, jeden do dwóch retraktorów, waciki, szwy chirurgiczne 3-0, gaza jodoformowa, igły do szycia, Biosystems w razie potrzeby i soczewka międzygałkowa, kleszcze IOL służą do oddzielania naczyń krwionośnych z powodu okrągłych głów.

Maszyna do znieczulania zwierząt, maszyna do odwadniania, maszyna do zatapiania, patologiczna krajalnica, maszyna do zamrażania, krajalnica do tkanek, piec do suszenia powietrza, neuronowy mikroskop optyczny, skaner, enfluran do znieczulenia ogólnego, 4% roztwór paraformaldehydu, dowolny wodny etanol, ksylen, wysokowydajny wosk parafinowy, roztwór barwnika hematoksylino-eozyny, kwas solny, amoniak, szkiełko nakrywkowe, neutralna guma i odczynniki do barwienia oraz materiały eksploatacyjne. Pipety, wirówka, automatyczny analizator biochemiczny, aminotransferaza alaninowa, zestaw ALT, asparaginian, aminotransferaza, zestaw AST, zestaw kreatyniny. Po zważeniu szczury są znieczulane izofluranem przez maszynę do znieczulania zwierząt.

Po dezynfekcji jamy brzusznej wykonaj środkowe nacięcie trzy centymetry poniżej wyrostka mieczykowatego za pomocą kleszczy i nożyczek. Otwórz jamę brzuszną, odsłoń wątrobę za pomocą retraktora i zmobilizuj więzadło wątrobowo-żołądkowe. Użyj bawełnianych wacików, aby delikatnie odwrócić środkowy płat wątroby i obrócić go do góry, aby odsłonić porta habitis.

Zidentyfikuj przewód żółciowy, żyłę wrotną i tętnicę wątrobową. Popchnij jelito cienkie w kierunku lewej dolnej jamy brzusznej za pomocą bawełnianych zamiany i przesuń żyłę główną dolną do prawej żyły nerkowej, odizoluj żyłę wrotną, tętnicę wątrobową i żyłę główną dolną powyżej prawej żyły nerkowej za pomocą soczewki wewnątrzgałkowej, IOL, kleszczy oznaczonych jedwabną nicią 3-0, każdy z węzłem poślizgowym. Rozciąć skórę lewej i prawej kończyny dolnej i odsłonić żyłę udową za pomocą kleszczy okulistycznych.

Powoli wstrzyknąć heparynę drobnocząsteczkową 625 j.m./kg przez żyłę udową w celu heparynizacji całego organizmu. Podwiązać żyłę wrotną, tętnicę wątrobową i żyłę główną dolną powyżej prawej żyły nerkowej za pomocą szwów o numerze 3-0, trwających 45 minut. Wymień jelito cienkie w jamie brzusznej i przykryj je gazą.

W tych okresach znieczulenie wziewne jest zmniejszone. Po 45 minutach uwolnij żyłę wrotną, tętnicę wątrobową i żyłę główną dolną powyżej prawej żyły nerkowej. Zszyj mięsień i skórę warstwa po warstwie i zakończ znieczulenie wziewne.

Zapewnij znieczulenie pooperacyjne za pomocą podskórnej morfiny w dawce 5 mg/kg co cztery godziny Obserwuj szczura do przebudzenia i karmić go w temperaturze 25 plus minus dwa stopnie Celsjusza i wilgotności 50 plus minus 10%Konieczne są lampy grzewcze dla zwierząt. W tym modelu zwierzęcym szczury zostały losowo podzielone na pięć grup według niedokrwienia przez 15 minut, I 15 grupa, 30 minut, I 30 grupa, 45 minut, I 45 grupa, 60 minut, I 60 i grupa pozorowana z 10 szczurami w każdej grupie. Ich przeżywalność w każdej grupie obserwowano 14 dni po operacji.

Wszystkie szczury przeżyły w grupie I 15, I 30 i pozorowanej. Osiem osób przeżyło 14 dni w grupie I 45, a tylko dwie przeżyły w grupie I 60. Wyniki sugerowały, że szczury mogły tolerować fazę bezwątrobową przez maksymalnie 45 minut.

Podczas eksperymentu Biosystems wykorzystano do rejestracji zmian częstości akcji serca i ciśnienia krwi, intubacji prawej tętnicy szyjnej wewnętrznej przed i po fazie zniewatania. Odkryliśmy, że częstość akcji serca i średnie ciśnienie tętnicze, MAP szczurów, zmieniły się dramatycznie po podwiązaniu naczyń krwionośnych. Po podwiązaniu widoczne było niedokrwienie wątroby, przekrwienie i obrzęk jelit, żylaki żołądka i splenomegalia.

80 szczurów zostało losowo podzielonych na osiem grup, w tym niedokrwienie przez 45 minut, T0, reperfuzja przez sześć godzin, T6, 12 godzin, T12, 24 godziny, T24, 48 godzin, T48, 72 godziny, T72, siedem dni, T7, w ciągu 14 dni, T14, odpowiednio. Nerki, trzustka, jelito cienkie, serce i tkanki płucne zostały pobrane i zabarwione HE po uśmierceniu szczurów. Z wyjątkiem serca, oceny patologiczne podano odpowiednio zgodnie z referencjami.

Wyniki pokazały, że czas maksymalnego uszkodzenia narządów pozawątrobowych był różny. Było to od sześciu do 24 godzin po operacji w przypadku trzustki i od 24 do 48 godzin w przypadku płuc. Przewód pokarmowy i nerki zostały najpoważniej uszkodzone po 45 minutach niedokrwienia.

Nie stwierdzono widocznych nieprawidłowości błony śluzowej jelit 24 godziny po operacji, a nerki wróciły do zdrowia po 48 godzinach. Jeśli chodzi o serce, wraz z upływem czasu po reperfuzji stwierdzono miejscową narkozę komórek mięśnia sercowego, fragmentację i rozpuszczanie komórek, naciek komórek zapalnych oraz miejscowe rozszerzenie naczyń krwionośnych i przekrwienie w tkance w ciągu 24 do 48 godzin po operacji. Pobrano surowicę, a poziomy AlAT, AspAT, kreatyniny i amylazy wykryto za pomocą automatycznego analizatora biochemicznego.

Wszystkie wskaźniki osiągały szczyt po 24 do 48 godzinach, w przeciwieństwie do zmian patologicznych. Chociaż poziomy były w zasadzie normalne 48 godzin po operacji, patologiczne uszkodzenia nadal trwały. Podsumowując, model u szczurów jest prosty i łatwiejszy w użyciu bez mikrochirurgii i stanowi podstawę do podstawowych badań nad uszkodzeniem niedokrwienno-reperfuzyjnym narządów pozawątrobowych po niedokrwieniu wątroby.