Name: Uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne narządów poprzez symulację zmian hemodynamicznych w modelu przeszczepu wątroby szczura (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 7 s
Description: Poznaj model uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego narządów poprzez symulację zmian hemodynamicznych w przeszczepie wątroby szczura. Ta metoda pozwala badać wpływ fazy bezwątrobowej na narządy pozawątrobowe.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Chcielibyśmy podziękować za przydatne sugestie udzielone przez dr Wen-tao Li i dr Ji-hua Wu z Drugiego Szpitala Stowarzyszonego Uniwersytetu Medycznego w Guangxi. Autorzy pragną podziękować naszym kolegom z zespołu za przydatne uwagi i dyskusje. Autorzy pragną również podziękować anonimowym recenzentom i redaktorom JoVE za ich uwagi. Szczególne podziękowania należą się rodzicom dr Yuana za ich nieustanne wsparcie i zachętę. Prace były wspierane przez Ningbo Natural Science Foundation (2014A610248).

Komisja Etyki Zwierząt zatwierdziła eksperyment Uniwersytetu Medycznego Guangxi (No20190920). Wszystkie zwierzęta zostały dostarczone przez Centrum Eksperymentów na Zwierzętach Uniwersytetu Medycznego Guangxi. Użyliśmy samców szczurów Sprague Dawley z filtrem SPF (200-250 g, 10-12 tygodni), trzymanych w temperaturze pokojowej 25 ± 2°C i wilgotności 50 ± 10%. Karmienie zostało przerwane na 24 godziny przed operacją; Nie zabrakło jednak wody.
UWAGA: Jeden operator może wykonywać wszystkie operacje bez podstawy mikrochirurgii lub mikroskopu operacyjnego.
1. Operacja
<ol>
	<li>Po zważeniu znieczulij szczury izofluranem (5%) za pomocą urządzenia do znieczulania zwierząt.</li>
	<li>Po 1-2 minutach delikatnie zaciśnij palce u nóg szczura pęsetą. Jeśli szczur nie reaguje po uszczypnięciu, wszedł w stan znieczulenia. Użyj maści weterynaryjnej na oczy, aby zapobiec wysuszeniu. Używaj lamp grzewczych dla zwierząt, aby utrzymać temperaturę ciała szczurów na poziomie 37-38 °C.</li>
	<li>Po dezynfekcji jamy brzusznej (roztwór jodu powidonu) przymocuj szczura na stole do sekcji zwierząt. Wykonaj środkowe nacięcie 3 cm poniżej wyrostka mieczykowatego za pomocą kleszczy i nożyczek.</li>
	<li>Otwórz jamę brzuszną, odsłoń wątrobę za pomocą retraktora i zmobilizuj więzadło wątrobowo-żołądkowe. Użyj bawełnianych wacików, aby delikatnie odwrócić środkowy płat wątroby i obrócić go do góry, aby odsłonić wątrobę porta. Zidentyfikuj CBD, PV i HA.</li>
	<li>Wypchnij jelito cienkie w kierunku lewej dolnej jamy brzusznej za pomocą bawełnianych wacików, przykryj je mokrą gazą i przenieś żyłę główną wewnątrzwątrobową do prawej żyły nerkowej.</li>
	<li>Odizoluj żyłę wrotną, tętnicę wątrobową i żyłę główną dolną powyżej prawej żyły nerkowej za pomocą soczewki wewnątrzgałkowej i kleszczy oznaczonych jedwabną nicią 3-0, z których każdy ma węzeł poślizgowy.</li>
	<li>Rozetnij skórę lewej i prawej kończyny dolnej i odsłoń żyłę udową za pomocą kleszczy okulistycznych. Powoli wstrzyknąć heparynę drobnocząsteczkową 625 j.m./kg przez żyłę udową w celu heparynizacji całego organizmu.</li>
	<li>Podwiązać żyłę wrotną, tętnicę wątrobową i żyłę główną dolną powyżej prawej żyły nerkowej za pomocą szwów nr 3-0, trwających 45 minut (<silna klasa = "xfig">Ryc. 1). Wymień jelito cienkie w jamie brzusznej i przykryj je gazą. W tych okresach należy zmniejszyć znieczulenie wziewne.</li>
	<li>Po 45 minutach uwolnij żyłę wrotną, tętnicę wątrobową i żyłę główną dolną powyżej prawej żyły nerkowej.</li>
	<li>Zszyj mięsień i skórę, warstwa po warstwie, i zakończ znieczulenie wziewne. Zapewnić analgezję pooperacyjną za pomocą podskórnej morfiny w dawce 5 mg/kg co 4 godziny.</li>
	<li>Obserwuj szczura, aż się obudzi i karmić go w temperaturze 25 ± 2 °C i wilgotności 50 ± 10%. Niezbędne są lampy grzewcze dla zwierząt.</li>
</ol>

<ol><li>Dar, W. A., Sullivan, E., Byon, J. S., Eltzschig, H., Ju, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischaemia+reperfusion+injury+in+liver+transplantation%3A+Cellular+and+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+International%22%5BJournal%5D)">Ischaemia reperfusion injury in liver transplantation: Cellular and molecular mechanisms.</a> Liver International. 39 (5), 788-801 (2019).</li>
<li>Qiao, P. F., Yao, L., Zhang, X. C., Li, G. D., Wu, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+pretreatment+improves+stem+cell+repair+following+ischemia-reperfusion+injury+via+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Heat shock pretreatment improves stem cell repair following ischemia-reperfusion injury via autophagy.</a> World Journal of Gastroenterology. 21 (45), 12822-12834 (2015).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+YAP+attenuates+hepatic+damage+and+fibrosis+in+liver+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Activation of YAP attenuates hepatic damage and fibrosis in liver ischemia-reperfusion injury.</a> Journal of Hepatology. 71 (4), 719-730 (2019).</li>
<li>Hirao, H., Dery, K. J., Kageyama, S., Nakamura, K., Kupiec-Weglinski, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+Oxygenase-1+in+liver+transplant+ischemia-reperfusion+injury%3A+From+bench-to-bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Heme Oxygenase-1 in liver transplant ischemia-reperfusion injury: From bench-to-bedside.</a> Free Radical Biology and Medicine. 157, 75-82 (2020).</li>
<li>Motiño, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+of+hepatocyte+cyclooxygenase-2+expression+against+liver+ischemia-reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Protective role of hepatocyte cyclooxygenase-2 expression against liver ischemia-reperfusion injury in mice.</a> Hepatology. 70 (2), 650-665 (2019).</li>
<li>Guo, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+search+for+a+magic+bullet+to+fight+multiple+organ+failure+secondary+to+ischemia%2Freperfusion+injury+and+abdominal+compartment+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">The search for a magic bullet to fight multiple organ failure secondary to ischemia/reperfusion injury and abdominal compartment syndrome.</a> Journal of Surgical Research. 184 (2), 792-793 (2013).</li>
<li>Elham, M., Mahmoudi, M., Nassiri-Toosi, M., Baghfalaki, T., Zeraati, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post+liver+transplantation+survival+and+related+prognostic+factors+among+adult+recipients+in+tehran+liver+transplant+center%3B+2002-2019%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Iranian+Medicine%22%5BJournal%5D)">Post liver transplantation survival and related prognostic factors among adult recipients in tehran liver transplant center; 2002-2019.</a> Archives of Iranian Medicine. 1 (23), 326-334 (2020).</li>
<li>Kim, E. H., Ko, J. S., Gwak, M. S., Lee, S. K., Kim, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+clinical+significance+of+hyperfibrinolysis+during+living+donor+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Coagulation+and+Fibrinolysis%22%5BJournal%5D)">Incidence and clinical significance of hyperfibrinolysis during living donor liver transplantation.</a> Blood Coagulation and Fibrinolysis. 29 (3), 322-326 (2018).</li>
<li>Czigány, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+research+practice+in+rat+orthotopic+and+partial+orthotopic+liver+transplantation%3A+a+review%2C+recommendation%2C+and+publication+guide%5BTitle%5D)+AND+%22European+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Improving research practice in rat orthotopic and partial orthotopic liver transplantation: a review, recommendation, and publication guide.</a> European Surgical Research. 55 (1-2), 119-138 (2015).</li>
<li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Technique+using+cuff+for+portal+vein+anastomosis+and+biliary+drainage%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage.</a> Transplantation. 28 (1), 47-50 (1979).</li>
<li>Zimmermann, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat+and+some+studies+of+the+immunologic+responses+to+fully+allogeneic+liver+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Techniques for orthotopic liver transplantation in the rat and some studies of the immunologic responses to fully allogeneic liver grafts.</a> Transplantation Proceedings. 11 (1), 571-577 (1979).</li>
<li>Miyata, M., Fischer, J. H., Fuhs, M., Isselhard, W., Kasai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Cuff+technique+for+three+vascular+anastomoses%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A simple method for orthotopic liver transplantation in the rat. Cuff technique for three vascular anastomoses.</a> Transplantation. 30 (5), 335-338 (1980).</li>
<li>Kamada, N. A., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+experience+with+five+hundred+thirty+liver+transplants+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat.</a> Surgery. 93 (1), 64-69 (1983).</li>
<li>Yang, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+orthotopic+liver+transplantation+using+a+novel+magnetic+anastomosis+technique+for+suprahepatic+vena+cava+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A rat model of orthotopic liver transplantation using a novel magnetic anastomosis technique for suprahepatic vena cava reconstruction.</a> Journal of Visualized Experiments. 19 (133), e56933(2018).</li>
<li>Liu, L. X., He, C., Huang, T., Gu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+new+technique+for+reconstruction+of+hepatic+artery+during+liver+transplantation+in+sprague-dawley+rat%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of a new technique for reconstruction of hepatic artery during liver transplantation in sprague-dawley rat.</a> PLoS One. 10 (12), 0145662(2015).</li>
<li>Paller, M. S., Hoidal, J. R., Ferris, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+free+radicals+in+ischemic+acute+renal+failure+In+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Oxygen free radicals in ischemic acute renal failure In the rat.</a> Journal of Clinical Investigation. 74 (4), 1156-1164 (1984).</li>
<li>Schmidt, J., Lewandrowsi, K., Warshaw, A. L., Compton, C. C., Rattner, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometric+characteristics+and+homogeneity+of+a+new+model+of+acute+pancreatitis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pancreatology%22%5BJournal%5D)">Morphometric characteristics and homogeneity of a new model of acute pancreatitis in the rat.</a> International Journal of Pancreatology. 12 (1), 41-51 (1992).</li>
<li>Chui, C. J., McArdle, A. H., Brown, R., Scott, H. J., Gurd, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+mucosal+lesion+in+low-flow+states.+I.+A+morphological%2C+hemodynamic%2C+and+metabolic+reappraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Intestinal mucosal lesion in low-flow states. I. A morphological, hemodynamic, and metabolic reappraisal.</a> Archives of Surgery. 101 (4), 478-483 (1970).</li>
<li>Kozian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-lung+ventilation+induces+hyperfusion+and+alveolar+damage+in+the+ventilated+lung%3Aan+experimental+study%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">One-lung ventilation induces hyperfusion and alveolar damage in the ventilated lung:an experimental study.</a> British Journal of Anaesthesia. 100 (4), 549-559 (2008).</li>
<li>Shimada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heavy+water+%28D2O%29+containing+preservation+solution+reduces+hepatic+cold+preservation+and+reperfusion+injury+in+an+isolated+perfused+rat+liver+%28IPRL%29+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Heavy water (D2O) containing preservation solution reduces hepatic cold preservation and reperfusion injury in an isolated perfused rat liver (IPRL) model.</a> Journal of Clinical Medicine. 8 (11), 1818(2019).</li>
<li>Nakamura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sirtuin+1+attenuates+inflammation+and+hepatocellular+damage+in+liver+transplant+ischemia%2Freperfusion%3A+from+mouse+to+human%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Sirtuin 1 attenuates inflammation and hepatocellular damage in liver transplant ischemia/reperfusion: from mouse to human.</a> Liver Transplantation. 23 (10), 1282-1293 (2017).</li>
<li>Blaire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+Considerations+of+Hilar+Cholangiocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Oncology+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Surgical Considerations of Hilar Cholangiocarcinoma.</a> Surgical Oncology Clinics of North America. 28 (4), 601-617 (2019).</li>
</ol>

Autorzy tego manuskryptu nie mają do ujawnienia konfliktu interesów.

OLT u szczurów jest idealnym modelem do badania konserwacji narządów w transplantacji wątroby, IRI, odrzuceniu przeszczepu, tolerancji immunologicznej, patologii i farmakologii transplantacji, homotransplantacji i ksenotransplantacji. Obecnie jest szeroko stosowany w eksperymentalnych badaniach transplantacji wątroby.
Podczas badań pilotażowych najpierw podaliśmy pentobarbital sodu w znieczuleniu dootrzewnowym i stwierdziliśmy, że prowadzi to do wysokiej śmiertelności pooperacyjnej i krótkiej ...

Uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne (IRI) jest częstym powikłaniem po przeszczepie wątroby. IRI wątroby jest procesem patologicznym obejmującym uszkodzenie komórek za pośrednictwem niedokrwienia i nieprawidłowe pogorszenie reperfuzji wątroby. IRI wątroby i miejscową wrodzoną odpowiedź immunologiczną można podzielić na IRI gorące i zimne, w zależności od różnic w środowisku klinicznym1. Gorący IRI jest wywoływany przez uszkodzenie komórek macierzystych, zwykle w wyniku przeszczepu wątroby, wstrząsu i urazu2. Zimny IRI jest powikłaniem przeszczepu wątroby spowodowanym przez komórki śródbłonka i krążenie obwodowe3. Doniesienia kliniczne wykazały, że IRI wątroby jest związana z 10% wczesnych niewydolności narządów i może zwiększać częstość występowania ostrego i przewlekłego odrzucenia4,5. Ponadto, IRI wątroby może również wywoływać zespoły dysfunkcji wielonarządowej lub zespół ogólnoustrojowej odpowiedzi zapalnej, z wysoką śmiertelnością6. Pacjenci z zajęciem narządów pozawątrobowych zwykle pozostają dłużej w szpitalu, wydają więcej pieniędzy i mają gorsze rokowania7. Rozwój powikłań jest ściśle związany z długością fazy bezwątrobowej przeszczepu wątroby8.
Ortotopowy przeszczep wątroby (OLT) u szczurów został po raz pierwszy opisany przez amerykańskiego profesora Lee w 1973 roku. Eksperymentalna operacja symulowała etapy klinicznego przeszczepu wątroby oraz zespolenie naczyń krwionośnych i przewodu żółciowego wspólnego (CBD) przy użyciu metody szwów. Procedura jest trudna i czasochłonna, a wskaźnik sukcesu niski9. W 1979 roku Kamada i wsp. dokonali znaczącej poprawy OLT u szczurów, twórczo stosując "metodę dwóch mankietów" do zespolenia żyły wrotnej w celu kontrolowania fazy bezwątrobowej w ciągu 26 minut10. W tym samym roku Zimmermann zaproponował "metodę pojedynczego stentu żółciowego". Na podstawie pracy Lee Zimmermann użył rurki polietylenowej do bezpośredniego zespolenia CBD dawcy i biorcy, uprościł rekonstrukcję CBD i zachował funkcję zwieracza, a metoda ta stała się standardem w rekonstrukcji dróg żółciowych w modelach OLT11. W 1980 roku Miyata i wsp. zaproponowali "metodę trzech mankietów", w której żyła wrotna (PV), żyła nadwątrobowa (SVC) i żyła główna wewnątrzwątrobowa (IVC) były zespolene metodą mankietową. Istnieje jednak ryzyko zniekształcenia kaniuli w przypadku tej metody, co może prowadzić do niedrożności refluksu żyły głównej dolnej12. W 1983 r. zaproponowano "metodę dwóch mankietów" przy użyciu metody mankietowej do zespolenia PV i IVC, ale przyjmując metodę szwów dla SVC13. Metoda ta została przyjęta przez naukowców na całym świecie w celu ustalenia modeli OLT. Od tego czasu etapy zespolenia mankietu zostały ulepszone, aby skrócić fazę zniewatania i poprawić przeżywalność szczurów14. Podobnie, ulepszone metody są stosowane w praktyce klinicznej w celu skrócenia fazy anhepatycznej15. Jednak podstawowe badania nad IRI po przeszczepieniu wątroby wykazały, że wskaźnik przeżycia jest odwrotnie proporcjonalny do stopnia uszkodzenia narządów pozawątrobowych. Dlatego konieczne są dalsze badania, a także prosty i powtarzalny model zwierzęcy, który symuluje IRI po przeszczepie wątroby.
Opierając się na definicji fazy bezwątrobowej, przeprowadziliśmy symulację zmian hemodynamicznych w transplantacji wątroby, skutkujących IRI narządów pozawątrobowych u szczurów. W niniejszym artykule przedstawiamy szczegółowy opis, jak zbudować zwierzęcy model fazy anhepatycznej (niedokrwienie wątroby) u szczurów, aby ułatwić podstawowe badania nad IRI po przeszczepieniu wątroby.

<table><tbody><tr><td>4% roztwór paraformaldehydu</td><td>Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd</td><td>P804536</td><td></td></tr><tr><td>piec do suszenia powietrzem</td><td>Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd.</td><td>BPG</td><td></td></tr><tr><td>Aminotransferaza alaninowa (ALT) Zestaw</td><td>Elabscience Biotechnology Co., Ltd</td><td>E-BC-K235-S</td><td></td></tr><tr><td>amoniak</td><td>Sinopharm Chemical Reagents Co., Ltd</td><td>10002118</td><td></td></tr> zestaw <tr><td>amylazy</td><td>Elabscience Biotechnology Co., Ltd</td><td>E-BC-K005-M</td><td></td></tr><tr><td>bezwodny etanol</td><td>Sinopharm Chemical Reagents Co., Ltd</td><td>100092183</td><td></td></tr><tr><td>Zwierzę Aparat anestezjologiczny</td><td>Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd</td><td>R640</td><td></td></tr><tr><td>zestaw aminotransferazy asparaginianowej (AST)</td><td>Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.</td>Automatyczny analizator biochemiczny <td>S03040</td><td></td></tr><tr><td>.</td><td>SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd.</td><td>2400</td><td></td></tr><tr><td>Biosystems (gdy jest to konieczne)</td> <td>Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd.</td><td>BL-420F</td><td></td></tr><tr><td>Wirówka</td><td>Baiyang Medical Instrument Co., Ltd.</td>Szkło nakrywkowe <td>BY-600A</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd</td><td>10212432C</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw kreatyniny</td><td>Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.</td><td>S03076</td><td></td></tr><tr><td>maszyna do odwadniania</td><td>Węgry 3DHISTECH Co., Ltd</td> Maszyna do zatapiania <td>Donatello Series 2</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd.</td>Maszyna do zamrażania <td>KH-BL1</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td><td>JB-L5</td><td></td></tr><tr><td>roztwór barwnika hematoksyliny-eozyny</td><td>Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd</td><td>G1005</td><td></td></tr><tr><td>wysokowydajny wosk parafinowy</td><td>Shanghai huayong parafina wax co., Ltd</td><td>Q / YSQN40-91</td><td></td></tr><tr><td>Kwas solny</td><td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td><td>10011018</td><td></td></tr><tr><td>kleszczyki do soczewek wewnątrzgałkowych (IOL)</td><td>Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd.</td><td>JTZRN</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Shenzhen Ruiwode Life Technology Co., Ltd</td><td>&mdash;</td><td></td></tr><tr><td>mikro nożyczki (kiedy to konieczne)</td> <td>Szanghajska fabryka instrumentów chirurgicznych</td><td>WA1010</td><td></td></tr><tr><td>uchwyty na igły</td><td>Fabryka instrumentów chirurgicznych w Szanghaju</td><td>J32010</td><td></td></tr><tr><td>neutralna guma</td><td>Shanghai Huashen Healing Equipment Co., Ltd.</td><td>&mdash;</td><td></td></tr><tr><td>normalny mikroskop optyczny</td><td>Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd</td> Kleszcze okulistyczne <td>Nikon Eclipse CI</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Fabryka instrumentów chirurgicznych w Szanghaju</td><td>Proste</td>kleszcze okulistyczne <td>J3CO30</td></tr><tr><td></td><td>Fabryka instrumentów chirurgicznych w Szanghaju</td> Nożyczki do <td>gięcia</td>okulistycznego <td>JD1060</td></tr><tr><td></td><td>Fabryka instrumentów chirurgicznych w Szanghaju</td><td>J1E0</td><td></td></tr><tr><td>krajalnica patologiczna</td><td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td><td>Pipety RM2016</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd.</td><td></td><td></td>7010101008</tr><tr><td>zwijaczy</td><td>Beijing Jinuotai Technology Development Co., Ltd.</td><td>Skaner JNT-KXQ</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Węgry 3DHISTECH Co., Ltd</td><td>Pannoramic 250</td><td></td></tr><tr><td>slajd</td><td>Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd</td><td>G6004</td><td></td></tr><tr><td>ksylen</td><td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td><td>1330-20-7</td><td></td></tr></tbody></table>

uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne narządów poprzez symulację zmian hemodynamicznych w modelu przeszczepu wątroby szczura

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

Ortotopowy przeszczep wątroby (OLT) u szczurów to wypróbowany i sprawdzony model zwierzęcy używany do badań przedoperacyjnych, śródoperacyjnych i pooperacyjnych, w tym do uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego (IRI) narządów pozawątrobowych. Model ten wymaga licznych eksperymentów i urządzeń. Czas trwania fazy bezwątrobowej jest ściśle związany z czasem do rozwoju IRI po przeszczepie. W tym eksperymencie wykorzystaliśmy zmiany hemodynamiczne do wywołania uszkodzenia narządów pozawątrobowych u szczurów i określiliśmy maksymalny czas tolerancji. Czas do najcięższego uszkodzenia narządu był różny dla różnych narządów. Metoda ta może być łatwo powtórzona i może być również wykorzystana do badania IRI narządów pozawątrobowych po przeszczepieniu wątroby.

Tolerancja szczurów na niedokrwienie wątroby 
W tym modelu zwierzęcym miejsca, w których podczas operacji podwiązano naczynia krwionośne, przedstawiono na Rysunku 1. Szczury randomly podzielono na 5 grup: niedokrwienie przez 15 minut (grupa I15), 30 minut (grupa I30), 45 minut (grupa I45), 60 minut (grupa I60) oraz grupę pozorowaną (sham), po 10 szczurów w każdej grupie. Wskaźnik przeżywalności każdej grupy obserwowano 14 dni po operacji. Wszystkie szczury przeżyły w grup...

Ten artykuł zawiera szczegółowy opis, jak zbudować zwierzęcy model fazy anhepatycznej (niedokrwienie wątroby) u szczurów, aby ułatwić podstawowe badania nad uszkodzeniem niedokrwienno-reperfuzyjnym po przeszczepie wątroby.

Uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne narządów poprzez symulację zmian hemodynamicznych w modelu przeszczepu wątroby szczura

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...

Uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne narządu poprzez symulację zmian hemodynamicznych w modelu przeszczepu wątroby szczura. Uraz niedokrwienno-reperfuzyjny jest częstym zastosowaniem po przeszczepie wątroby. Pacjenci z zajęciem narządów pozawątrobowych zwykle dłużej pozostają w szpitalu, wydają więcej i mają gorsze rokowania.Rozwój powikłań jest ściśle związany z długością fazy bezwątrobowej przeszczepu wątroby. Jednak podstawowe badania nad uszkodzeniem niedokrwienno-reperfuzyjnym po przeszczepie wątroby wykazały, że wskaźnik przeżycia po przeszczepieniu wątroby jest odwrotnie proporcjonalny do stopnia uszkodzenia narządów pozahaptowych. Opierając się na definicji fazy bezhaptycznej, przeprowadziliśmy symulację zmiany hemodynamicznej w transplantacji wątroby skutkującej uszkodzeniem niedokrwienno-reperfuzyjnym narządów pozahaptycznych.Przedmiotem niniejszej pracy jest szczegółowy opis sposobu budowy zwierzęcego modelu fazy anhaptycznej u szczurów, podstawowe badania nad uszkodzeniem niedokrwienno-reperfuzyjnym po przeszczepieniu wątroby. Dr Yuan Yuan jest odpowiedzialny za wszystkie operacje wideo na zwierzętach. Dwa kleszcze okulistyczne, proste i zginające oraz soczewka międzygałkowa, kleszcze IOL, nożyczki okulistyczne, jeden do dwóch retraktorów, waciki, szwy chirurgiczne 3-0, gaza jodoformowa, igły do szycia, Biosystems w razie potrzeby i soczewka międzygałkowa, kleszcze IOL służą do oddzielania naczyń krwionośnych z powodu okrągłych głów.Maszyna do znieczulania zwierząt, maszyna do odwadniania, maszyna do zatapiania, patologiczna krajalnica, maszyna do zamrażania, krajalnica do tkanek, piec do suszenia powietrza, neuronowy mikroskop optyczny, skaner, enfluran do znieczulenia ogólnego, 4% roztwór paraformaldehydu, dowolny wodny etanol, ksylen, wysokowydajny wosk parafinowy, roztwór barwnika hematoksylino-eozyny, kwas solny, amoniak, szkiełko nakrywkowe, neutralna guma i odczynniki do barwienia oraz materiały eksploatacyjne. Pipety, wirówka, automatyczny analizator biochemiczny, aminotransferaza alaninowa, zestaw ALT, asparaginian, aminotransferaza, zestaw AST, zestaw kreatyniny. Po zważeniu szczury są znieczulane izofluranem przez maszynę do znieczulania zwierząt.Po dezynfekcji jamy brzusznej wykonaj środkowe nacięcie trzy centymetry poniżej wyrostka mieczykowatego za pomocą kleszczy i nożyczek. Otwórz jamę brzuszną, odsłoń wątrobę za pomocą retraktora i zmobilizuj więzadło wątrobowo-żołądkowe. Użyj bawełnianych wacików, aby delikatnie odwrócić środkowy płat wątroby i obrócić go do góry, aby odsłonić porta habitis.Zidentyfikuj przewód żółciowy, żyłę wrotną i tętnicę wątrobową. Popchnij jelito cienkie w kierunku lewej dolnej jamy brzusznej za pomocą bawełnianych zamiany i przesuń żyłę główną dolną do prawej żyły nerkowej, odizoluj żyłę wrotną, tętnicę wątrobową i żyłę główną dolną powyżej prawej żyły nerkowej za pomocą soczewki wewnątrzgałkowej, IOL, kleszczy oznaczonych jedwabną nicią 3-0, każdy z węzłem poślizgowym. Rozciąć skórę lewej i prawej kończyny dolnej i odsłonić żyłę udową za pomocą kleszczy okulistycznych.Powoli wstrzyknąć heparynę drobnocząsteczkową 625 j.m./kg przez żyłę udową w celu heparynizacji całego organizmu. Podwiązać żyłę wrotną, tętnicę wątrobową i żyłę główną dolną powyżej prawej żyły nerkowej za pomocą szwów o numerze 3-0, trwających 45 minut. Wymień jelito cienkie w jamie brzusznej i przykryj je gazą.W tych okresach znieczulenie wziewne jest zmniejszone. Po 45 minutach uwolnij żyłę wrotną, tętnicę wątrobową i żyłę główną dolną powyżej prawej żyły nerkowej. Zszyj mięsień i skórę warstwa po warstwie i zakończ znieczulenie wziewne.Zapewnij znieczulenie pooperacyjne za pomocą podskórnej morfiny w dawce 5 mg/kg co cztery godziny Obserwuj szczura do przebudzenia i karmić go w temperaturze 25 plus minus dwa stopnie Celsjusza i wilgotności 50 plus minus 10%Konieczne są lampy grzewcze dla zwierząt. W tym modelu zwierzęcym szczury zostały losowo podzielone na pięć grup według niedokrwienia przez 15 minut, I 15 grupa, 30 minut, I 30 grupa, 45 minut, I 45 grupa, 60 minut, I 60 i grupa pozorowana z 10 szczurami w każdej grupie. Ich przeżywalność w każdej grupie obserwowano 14 dni po operacji.Wszystkie szczury przeżyły w grupie I 15, I 30 i pozorowanej. Osiem osób przeżyło 14 dni w grupie I 45, a tylko dwie przeżyły w grupie I 60. Wyniki sugerowały, że szczury mogły tolerować fazę bezwątrobową przez maksymalnie 45 minut.Podczas eksperymentu Biosystems wykorzystano do rejestracji zmian częstości akcji serca i ciśnienia krwi, intubacji prawej tętnicy szyjnej wewnętrznej przed i po fazie zniewatania. Odkryliśmy, że częstość akcji serca i średnie ciśnienie tętnicze, MAP szczurów, zmieniły się dramatycznie po podwiązaniu naczyń krwionośnych. Po podwiązaniu widoczne było niedokrwienie wątroby, przekrwienie i obrzęk jelit, żylaki żołądka i splenomegalia.80 szczurów zostało losowo podzielonych na osiem grup, w tym niedokrwienie przez 45 minut, T0, reperfuzja przez sześć godzin, T6, 12 godzin, T12, 24 godziny, T24, 48 godzin, T48, 72 godziny, T72, siedem dni, T7, w ciągu 14 dni, T14, odpowiednio. Nerki, trzustka, jelito cienkie, serce i tkanki płucne zostały pobrane i zabarwione HE po uśmierceniu szczurów. Z wyjątkiem serca, oceny patologiczne podano odpowiednio zgodnie z referencjami.Wyniki pokazały, że czas maksymalnego uszkodzenia narządów pozawątrobowych był różny. Było to od sześciu do 24 godzin po operacji w przypadku trzustki i od 24 do 48 godzin w przypadku płuc. Przewód pokarmowy i nerki zostały najpoważniej uszkodzone po 45 minutach niedokrwienia.Nie stwierdzono widocznych nieprawidłowości błony śluzowej jelit 24 godziny po operacji, a nerki wróciły do zdrowia po 48 godzinach. Jeśli chodzi o serce, wraz z upływem czasu po reperfuzji stwierdzono miejscową narkozę komórek mięśnia sercowego, fragmentację i rozpuszczanie komórek, naciek komórek zapalnych oraz miejscowe rozszerzenie naczyń krwionośnych i przekrwienie w tkance w ciągu 24 do 48 godzin po operacji. Pobrano surowicę, a poziomy AlAT, AspAT, kreatyniny i amylazy wykryto za pomocą automatycznego analizatora biochemicznego.Wszystkie wskaźniki osiągały szczyt po 24 do 48 godzinach, w przeciwieństwie do zmian patologicznych. Chociaż poziomy były w zasadzie normalne 48 godzin po operacji, patologiczne uszkodzenia nadal trwały. Podsumowując, model u szczurów jest prosty i łatwiejszy w użyciu bez mikrochirurgii i stanowi podstawę do podstawowych badań nad uszkodzeniem niedokrwienno-reperfuzyjnym narządów pozawątrobowych po niedokrwieniu wątroby.

organ-ischemia-reperfusion-injury-simulating-hemodynamic-changes-rat

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Przedstawiamy łatwą do wdrożenia modyfikację klasycznej techniki dwóch mankietów stosowanej w ortotopowym przeszczepieniu wątroby u szczura.

Ortotopowa transplantacja wątroby u szczurów

Ortotopowe przeszczepienie wątroby u szczurów jest niezbędnym modelem eksperymentalnym w badaniach biomedycznych. W niniejszym materiale przedstawiamy procedury chirurgiczne ortotopowego przeszczepienia wątroby szczura z rekonstrukcją tętnicy wątrobowej z wykorzystaniem 50% częściowego graftu.

Procedury chirurgiczne w szczurzym modelu częściowego ortotopowego przeszczepu wątroby z rekonstrukcją tętnicy wątrobowej

Izolowane serce szczura jest trwałym modelem uszkodzenia reperfuzyjnego niedokrwiennego. W tym miejscu opisujemy proces pobierania bijącego serca od szczura poprzez kaniulację aorty in situ, perfuzję Langendorffa serca, symulowane uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne i barwienie zawału, aby potwierdzić zakres urazu niedokrwiennego.

Indukcja i ocena uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego w sercach szczurów z perfuzją Langendorffa

Unikalny model zacisku wnękowego wątroby szczura został opracowany do badania wpływu cząsteczek farmakologicznych na łagodzenie uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego. Model ten obejmuje bezpośrednią kaniulację dopływu wrotnego do niedokrwionego segmentu wątroby przez odgałęzienie żyły wrotnej, co pozwala na bezpośrednie dostarczenie wątrobowe.

Metoda bezpośredniego segmentalnego dostarczania dowątrobowego przy użyciu modelu klamry Hilar wątroby szczura

Celem tego badania jest modyfikacja modelu ortotopowego przeszczepu wątroby u szczurów, aby lepiej reprezentowała przeszczep wątroby u człowieka i poprawiła przeżywalność biorców. Przedstawiona metoda przywraca dopływ tętniczy wątrobowej poprzez połączenie wspólnej tętnicy wątrobowej wątroby dawcy z właściwą tętnicą wątrobową biorcy.

Zmniejszone powikłania po ponownym połączeniu tętnic w szczurzym modelu ortotopowego przeszczepu wątroby

Tutaj prezentujemy optymalizacje modelu przeszczepu płuc szczurów, które służą poprawie wyników. Zapewniamy przewodnik po rozmiarach mankietów w oparciu o masę ciała, strategię pomiaru w celu ustalenia 4. przestrzeni międzyżebrowej oraz metody zamykania ran i pobierania płynu BAL (płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe) i tkanek.

Model przeszczepu płuc szczura uszkodzenia cieplnego niedokrwienia/reperfuzji: optymalizacje w celu poprawy wyników

W tym protokole opisany jest model ortotopowego przeszczepu wątroby u świń po statycznym przechowywaniu narządów dawcy w chłodni przez 20 godzin bez użycia bypassu żylno-żylnego podczas wszczepienia. Podejście to wykorzystuje uproszczoną technikę chirurgiczną z minimalizacją fazy bezwątrobowej oraz zaawansowanym zarządzaniem objętością i wazopresorem.

Przeszczepienie wątroby świni bez bypassu żylno-żylnego jako model dawcy o rozszerzonych kryteriach

Opisany tutaj protokół heterotopowego pomocniczego przeszczepu wątroby u szczurów stanowi praktyczne narzędzie badawcze do badania mechanizmów odrzucania alloprzeszczepu wątrobowego. Model ten pomaga złagodzić przeszkody chirurgiczne i stres zwierząt związany z ortotopowym przeszczepem wątroby u szczurów.

Heterotopowy pomocniczy model przeszczepu szczura całej wątroby z wykorzystaniem hepaticoureterostomii do badań odrzucenia przeszczepu allogenicznego

Ten artykuł wprowadza ustandaryzowaną procedurę kontrolowanego, odwracalnego malperfuzji narządów trzewnych w modelach szczurzych. Celem jest wywołanie tych stanów nieprawidłowej perfuzji z wysokim stopniem pewności metodologicznej i kontroli, przy jednoczesnym zachowaniu prostoty technicznej i odporności na błędy.

Kontrolowane odwracalne niedokrwienie tętnic trzewnych, przekrwienie żył i połączona malperfuzja poprzez laparotomię w linii środkowej u szczurów

Darmowy transfer tkanek jest szeroko stosowany w chirurgii rekonstrukcyjnej w celu przywrócenia formy i funkcji po resekcji onkologicznej i urazu. Wstępne przygotowanie tej tkanki przed operacją może poprawić wyniki. W tym artykule opisano płat mięśniowo-skórny poprzeczny mięśnia prostego brzucha (TRAM) in situ u szczurów jako sposób na przetestowanie strategii kondycjonowania wstępnego.

In situ Płat mięśniowo-skórny mięśnia prostego brzucha: szczurzy model uszkodzenia reperfuzyjnego niedokrwienia mięśni i skóry

Poznaj model uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego narządów poprzez symulację zmian hemodynamicznych w przeszczepie wątroby szczura. Ta metoda pozwala badać wpływ fazy bezwątrobowej na narządy pozawątrobowe.

Uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne narządów poprzez symulację zmian hemodynamicznych w modelu przeszczepu wątroby szczura

Przeglądaj więcej filmów