Implantacja kaniuli wewnątrzczaszkowej do seryjnych infuzji limfocytów T lokoregionalnego receptora chimerycznego antygenu (CAR) u myszy

Protokół ten replikuje system cewnika dokomorowego stosowany w trwających badaniach klinicznych w celu przetestowania lokalnego regionalnego dostarczania terapii limfocytami T CAR skierowanej przeciwko nowotworom ośrodkowego układu nerwowego. Główną zaletą tej techniki jest możliwość podania wielu powtarzanych dawek lokalnej terapii regionalnymi komórkami T CAR bez wykonywania wielu inwazyjnych zabiegów chirurgicznych. System ten może być wykorzystany do badania różnych środków terapeutycznych w różnych miejscach porodu, a tym samym może zapewnić wgląd w niezliczone obszary badawcze w neurobiologii.

Na początek połóż znieczuloną mysz z ogoloną głową na stole operacyjnym i delikatnie otwórz dolną część ramienia stereotaktycznego za pomocą szpatułki. Włóż kaniulę za pomocą kleszczyków i zabezpiecz ją, dokręcając na ramieniu, aż połowa do dwóch trzecich białej plastikowej części i pięć milimetrów kaniuli będą wystawać z dna otworu. Włóż i zabezpiecz górne zęby myszy w belce zgryzowej aparatu stereotaktycznego.

Pociągnij stożek nosowy do przodu i dokręć go, upewniając się, że mysz wdycha izofluran. Następnie zamontuj mysz na rozgrzanym aparacie stereotaktycznym za pomocą nauszników lub nauszników, unikając nadmiernego nacisku. Zdezynfekuj miejsce operacji i wykonaj cięcie równoległe do czaszki, jak opisano w rękopisie.

Użyj wacików z bawełnianą końcówką, aby odepchnąć powięź. Zidentyfikuj punkty orientacyjne, bregmę i lambdę na czaszce odpowiadające przednim i tylnym znakom, w których spotykają się płytki czaszkowe. Aby stworzyć powierzchnię do mocowania akrylu, delikatnie wykonaj kilka nacięć w poprzek czaszki za pomocą skalpela.

Za pomocą ramienia stereotaktycznego zlokalizuj kaniulę w interesującym Cię punkcie orientacyjnym. Podnieś końcówkę kaniuli o jeden do dwóch milimetrów ponad powierzchnię czaszki i przejdź do żądanych współrzędnych. Używając igły o rozmiarze 18 lub wiertarki chirurgicznej, wykonaj dwa otwory na w odsłoniętej czaszce z dala od miejsca, w którym wchodzi kaniula, zapewniając wystarczająco dużo miejsca na kaniulę.

Przekręć wiertło przez otwór na, aż przymocuje się do czaszki. Za pomocą śrubokręta z płaską końcówką włóż i dokręć dwie w otworach. Następnie delikatnie pociągnij do góry, aby upewnić się, że jest dobrze dokręcona.

Aby wprowadzić kaniulę, utwórz otwór w czaszce w określonych współrzędnych za pomocą igły o rozmiarze 18 lub wiertła chirurgicznego. Za pomocą ramienia stereotaktycznego opuść kaniulę do żądanej współrzędnej DV. Mając około 0,3 grama żywicy akrylowej w proszku i 10 do 15 kropli płynu na porcelanowej 12-dołkowej płytce, załaduj przygotowany lepki biały materiał do jednomililitrowej strzykawki.

Pokryj czaszkę i wypełnij przestrzenie wokół kaniuli i przykręć. Poluzuj na ramieniu stereotaktycznym, gdy cement jest elastyczny. Delikatnie użyj szpatułki, aby zwolnić kaniulę z uchwytu w dolnym otworze i schuj ramię stereotaktyczne z dala od myszy.

Po wyschnięciu cementu włóż atrapę kaniuli do kaniuli prowadzącej i obróć zgodnie z ruchem wskazówek zegara, aby ją mocno zabezpieczyć. Po zakończeniu procedury umieść mysz z powrotem w ogrzanej klatce domowej w celu odzyskania sprawności. Aby przygotować kaniulę zabiegową, należy włożyć jej górną część do rurki PKG.

Następnie napełnij strzykawkę leczniczą zawiesiną limfocytów T CAR i wprowadź ją przez drugi koniec rurki PKG, zakrywając górną część kaniuli zabiegowej. Po znieczuleniu myszy przymocuj kaniulę prowadzącą do podstawy za pomocą kleszczy. Odkręć i wyjmij atrapę kaniuli, umożliwiając dostęp do kaniuli prowadzącej.

Podawaj limfocyty T CAR przez jedną minutę i przytrzymaj kaniulę leczniczą na miejscu przez dodatkową minutę. Po wyjęciu kaniuli zabiegowej należy mocno przykręcić atrapę kaniuli. Następnie podawaj meloksykam podskórnie w celu kontroli bólu.

Terapia limfocytami T CAR ukierunkowana na GPC2 spowodowała znaczną regresję guza w rdzeniaku zarodkowym i znacznie wydłużyła przeżycie w modelu rozlanego glejaka w linii środkowej wzgórza. Podczas wprowadzania kaniuli prowadzącej do miejsca wewnątrznowotworowego ważne jest, aby zrozumieć, że współrzędne grzbietowo-brzuszne mogą być bardziej powierzchowne niż wstrzyknięcie guza, aby uwzględnić długość projekcji manekina i kaniuli terapeutycznej.