Name: Szybkie przewidywanie odpowiedzi na leki in vivo przy użyciu przeszczepów komórek białaczkowych w zarodkach danio pręgowanego (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T12:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 46 s
Description: Poznaj szybką metodę oceny odpowiedzi na leki w białaczce limfoblastycznej przy użyciu ksenoprzeszczepów w zarodkach danio pręgowanego. Protokół umożliwia precyzyjną analizę cytometrią przepływową w ciągu siedmiu dni.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, Niemiecka Fundacja Badawcza) w ramach Collaborative Research Center CRC1588, numer projektu 493872418 oraz Dr. Kleist Stiftung, Berlin, a także przez Deutsche José Carreras Leukämie Stiftung (R03/2016), Berliner Krebsgesellschaft (HEFF201633KK) i Niemieckie Konsorcjum Walki z Rakiem (DKTK, Joint Funding Call 2016). Dziękujemy Julii Köppke i Mareike Wolff za krytyczną lekturę rękopisu.

<ol><li>Fontana, C. M., Van Doan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+xenograft+as+a+tool+for+the+study+of+colorectal+cancer%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Zebrafish xenograft as a tool for the study of colorectal cancer: a review.</a> Cell Death Dis. 15, 1-12 (2024).</li>
<li>Sturtzel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Refined+high-content+imaging-based+phenotypic+drug+screening+in+zebrafish+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Precis+Oncol%22%5BJournal%5D)">Refined high-content imaging-based phenotypic drug screening in zebrafish xenografts.</a> NPJ Precis Oncol. 7 (1), 1-16 (2023).</li>
<li>Al-Hamaly, M. A., Turner, L. T., Rivera-Martinez, A., Rodriguez, A., Blackburn, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+cancer+avatars%3A+A+translational+platform+for+analyzing+tumor+heterogeneity+and+predicting+patient+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Zebrafish cancer avatars: A translational platform for analyzing tumor heterogeneity and predicting patient outcomes.</a> Int J Mol Sci. 24, 2288(2023).</li>
<li>Gamble, J. T., Elson, D. J., Greenwood, J. A., Tanguay, R. L., Kolluri, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+xenograft+models+for+investigating+cancer+and+cancer+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Biology%22%5BJournal%5D)">The zebrafish xenograft models for investigating cancer and cancer therapeutics.</a> Biology. 10 (4), 252(2021).</li>
<li>Costa, B., Estrada, M. F., Mendes, R. V., Fior, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+avatars+towards+personalized+medicine-A+comparative+review+between+avatar+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Zebrafish avatars towards personalized medicine-A comparative review between avatar models.</a> Cells. 9 (2), 293(2020).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+building+clinically+relevant+patient-derived+tumor+xenograft+models+for+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Model+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Progress in building clinically relevant patient-derived tumor xenograft models for cancer research.</a> Animal Model Exp Med. 6 (5), 381-398 (2023).</li>
<li>Xiao, J., Glasgow, E., Agarwal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+xenografts+for+drug+discovery+and+personalized+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Trend+Cancer%22%5BJournal%5D)">Zebrafish xenografts for drug discovery and personalized medicine.</a> Trend Cancer. 6 (7), 569-579 (2020).</li>
<li>Fazio, M., Ablain, J., Chuan, Y., Langenau, D. M., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+patient+avatars+in+cancer+biology+and+precision+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Zebrafish patient avatars in cancer biology and precision cancer therapy.</a> Nat Rev Cancer. 20 (5), 263-273 (2020).</li>
<li>Costa, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+avatar-test+forecasts+clinical+response+to+chemotherapy+in+patients+with+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Comm%22%5BJournal%5D)">Zebrafish avatar-test forecasts clinical response to chemotherapy in patients with colorectal cancer.</a> Nat Comm. 15 (1), 4771(2024).</li>
<li>Grissenberger, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+8+-+Preclinical+testing+of+CAR+T+cells+in+zebrafish+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Method+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Chapter 8 - Preclinical testing of CAR T cells in zebrafish xenografts.</a> Method Cell Biol. 167, 133-147 (2022).</li>
<li>Yan, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+imaging+of+T+cell+immunotherapy+responses+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Single-cell imaging of T cell immunotherapy responses in vivo.</a> J Exp Med. 218 (10), 20210314(2021).</li>
<li>Pascoal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+preclinical+embryonic+zebrafish+xenograft+model+to+investigate+CAR+T+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">A preclinical embryonic zebrafish xenograft model to investigate CAR T cells in vivo.</a> Cancers. 12 (3), 567(2020).</li>
<li>Pal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+in+vitro+maintenance+of+clonal+abundance+and+leukaemia-initiating+potential+in+acute+lymphoblastic+leukaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Long-term in vitro maintenance of clonal abundance and leukaemia-initiating potential in acute lymphoblastic leukaemia.</a> Leukemia. 30 (8), 1691-1700 (2016).</li>
<li>Beneduce, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blinatumomab+in+children+and+adolescents+with+relapsed%2Frefractory+B+cell+precursor+acute+lymphoblastic+leukemia%3A+A+real-life+multicenter+retrospective+study+in+seven+AIEOP+%28Associazione+Italiana+di+Ematologia+e+Oncologia+Pediatrica%29+Centers%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Blinatumomab in children and adolescents with relapsed/refractory B cell precursor acute lymphoblastic leukemia: A real-life multicenter retrospective study in seven AIEOP (Associazione Italiana di Ematologia e Oncologia Pediatrica) Centers.</a> Cancers. 14 (2), 426(2022).</li>
<li>Xie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-course+blinatumomab+for+refractory%2Frelapse+precursor+B+acute+lymphoblastic+leukemia+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Short-course blinatumomab for refractory/relapse precursor B acute lymphoblastic leukemia in children.</a> Front Pediatr. 11, 1187607(2023).</li>
<li>Mengxuan, S., Fen, Z., Runming, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+treatments+for+pediatric+relapsed+or+refractory+acute+B-cell+lineage+lymphoblastic+leukemia%3A+Precision+medicine+era%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Novel treatments for pediatric relapsed or refractory acute B-cell lineage lymphoblastic leukemia: Precision medicine era.</a> Front Pediatr. 10, 923419(2022).</li>
<li>Howe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).</li>
<li>Lee, H. C., Lin, C. Y., Tsai, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%2C+an+in+vivo+platform+to+screen+drugs+and+proteins+for+biomedical+use%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceuticals%22%5BJournal%5D)">Zebrafish, an in vivo platform to screen drugs and proteins for biomedical use.</a> Pharmaceuticals. 14 (6), 500(2021).</li>
<li>Santoriello, C., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hooked%21+Modeling+human+disease+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Investigation%22%5BJournal%5D)">Hooked! Modeling human disease in zebrafish.</a> J Clin Investigation. 122 (7), 2337-2343 (2012).</li>
<li>Miao, K. Z., Kim, G. Y., Meara, G. K., Qin, X., Feng, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tipping+the+scales+with+zebrafish+to+understand+adaptive+tumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Tipping the scales with zebrafish to understand adaptive tumor immunity.</a> Front Cell Dev Biol. 9, 660969(2021).</li>
<li>Gauert, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast%2C+in+vivo+model+for+drug-response+prediction+in+patients+with+B-cell+precursor+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Fast, in vivo model for drug-response prediction in patients with B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia.</a> Cancers. 12 (7), 1883(2020).</li>
<li>Ellett, F., Pase, L., Hayman, J. W., Andrianopoulos, A., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mpeg1+promoter+transgenes+direct+macrophage-lineage+expression+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Mpeg1 promoter transgenes direct macrophage-lineage expression in zebrafish.</a> Blood. 117 (4), e49-e56 (2011).</li>
<li>Pase, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil-delivered+myeloperoxidase+dampens+the+hydrogen+peroxide+burst+after+tissue+wounding+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil-delivered myeloperoxidase dampens the hydrogen peroxide burst after tissue wounding in zebrafish.</a> Current Biol. 22 (19), 1818-1824 (2012).</li>
<li>Wijk, R. C. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanistic+and+quantitative+understanding+of+pharmacokinetics+in+Zebrafish+larvae+through+nanoscale+blood+sampling+and+metabolite+modeling+of+paracetamol%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Mechanistic and quantitative understanding of pharmacokinetics in Zebrafish larvae through nanoscale blood sampling and metabolite modeling of paracetamol.</a> J Pharmacol Exp Ther. 371 (1), 15-24 (2019).</li>
<li>Lázaro-Navarro, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibiting+casein+kinase+2+sensitizes+acute+lymphoblastic+leukemia+cells+to+venetoclax+via+MCL1+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Advances%22%5BJournal%5D)">Inhibiting casein kinase 2 sensitizes acute lymphoblastic leukemia cells to venetoclax via MCL1 degradation.</a> Blood Advances. 5 (24), 5501(2021).</li>
<li>Rhodes, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+of+pu.1+and+gata1+determines+myelo-erythroid+progenitor+cell+fate+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Interplay of pu.1 and gata1 determines myelo-erythroid progenitor cell fate in zebrafish.</a> Developmental Cell. 8 (1), 97-108 (2005).</li>
<li>Zakaria, Z. Z., Eisa-Beygi, S., Benslimane, F. M., Ramchandran, R., Yalcin, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+microinjection+of+Morpholino+antisense+oligonucleotides+and+mRNA+into+zebrafish+embryos+to+elucidate+specific+gene+function+in+heart+dvelopment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Design and microinjection of Morpholino antisense oligonucleotides and mRNA into zebrafish embryos to elucidate specific gene function in heart dvelopment.</a> J Vis Exp. (186), e63324(2022).</li>
<li>ZFIN: Zebrafish Book: Contents. , 
 <a target="_blank" href="https://zfin.org/zf_info/zfbook/cont.html">https://zfin.org/zf_info/zfbook/cont.html</a> (2025).</li>
<li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev Dyn. 203 (3), 253-310 (1995).</li>
<li>Hasegawa, E. H., Gist H Farr, I. I. I., Maves, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+pronase+versus+manual+dechorionation+of+zebrafish+embryos+for+small+molecule+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Comparison of pronase versus manual dechorionation of zebrafish embryos for small molecule treatments.</a> J Dev Biol. 11 (2), 16(2023).</li>
<li>Wattrus, S. J., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+safe+harbor%3A+the+hematopoietic+stem+cell+niche+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Adv%22%5BJournal%5D)">Stem cell safe harbor: the hematopoietic stem cell niche in zebrafish.</a> Blood Adv. 2 (21), 3063-3069 (2018).</li>
<li>Harvie, E. A., Huttenlocher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils+in+host+defense%3A+new+insights+from+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukocyte+Biol%22%5BJournal%5D)">Neutrophils in host defense: new insights from zebrafish.</a> J Leukocyte Biol. 98 (4), 523-537 (2015).</li>
<li>Page, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+evolutionarily+conserved+program+of+B-cell+development+and+activation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">An evolutionarily conserved program of B-cell development and activation in zebrafish.</a> Blood. 122 (8), e1-e11 (2013).</li>
<li>Nguyen-Chi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TNF+signaling+and+macrophages+govern+fin+regeneration+in+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">TNF signaling and macrophages govern fin regeneration in zebrafish larvae.</a> Cell Death Dis. 8 (8), e2979-e2979 (2017).</li>
<li>Rosowski, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+macrophage+versus+neutrophil+contributions+to+innate+immunity+using+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Models+Mech%22%5BJournal%5D)">Determining macrophage versus neutrophil contributions to innate immunity using larval zebrafish.</a> Dis Models Mech. 13 (1), dmm041889(2020).</li>
<li>Rebelo de Almeida, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+xenografts+as+a+fast+screening+platform+for+bevacizumab+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Comm+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish xenografts as a fast screening platform for bevacizumab cancer therapy.</a> Comm Biol. 3 (1), 1-13 (2020).</li>
<li>Pringle, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+xenograft+platform-A+novel+tool+for+modeling+KSHV-associated+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">The zebrafish xenograft platform-A novel tool for modeling KSHV-associated diseases.</a> Viruses. 12 (1), 12(2020).</li>
<li>Pype, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incubation+at+32.5+%C2%B0C+and+above+causes+malformations+in+the+zebrafish+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Incubation at 32.5 °C and above causes malformations in the zebrafish embryo.</a> Reprod Toxicol. 56, 56-63 (2015).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+virus+%28AAV%29-based+gene+therapy+for+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell+Int%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated virus (AAV)-based gene therapy for glioblastoma.</a> Cancer Cell Int. 21 (1), 76(2021).</li>
<li>Siebert, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rhabdomyosarcoma+xenotransplants+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Pediat+Blood+Cancer%22%5BJournal%5D)">Rhabdomyosarcoma xenotransplants in zebrafish embryos.</a> Pediat Blood Cancer. 70 (1), e30053(2023).</li>
<li>van Bree, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+orthotopic+medulloblastoma+zebrafish+model+for+rapid+drug+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncol%22%5BJournal%5D)">Development of an orthotopic medulloblastoma zebrafish model for rapid drug testing.</a> Neuro-Oncol. noae210, (2024).</li>
</ol>

Wszyscy autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Zarodki danio pręgowanego stają się coraz bardziej popularnym modelem ksenoprzeszczepu do badań przesiewowych leków i badań nad rakiem ze względu na ich wysoką przepustowość i opłacalność. Te ksenoprzeszczepy są obiecujące jako kluczowy filar medycyny translacyjnej, wspomagający badania przedkliniczne i podejmowanie decyzji 9,21. Jednak modele ksenoprzeszczepów danio pręgowanego do ekspansji i leczenia komórek białaczki u ludzi pozostają niedostatecznie reprezent...

Enotransplantacja danio pręgowanego stała się kluczowym modelem in vivo dla zrozumienia patogenezy raka i przewidywania reakcji na leki1,2,3,4,5. Modele zwierzęce mają kluczowe znaczenie dla przedklinicznych testów leków, a model danio pręgowanego oferuje znaczące korzyści w porównaniu z innymi systemami in vivo, w tym wysoką przepustowość i opłacalność6,7,8. Model ten może również pomóc w spersonalizowanym przewidywaniu odpowiedzi na leczenie, w tym terapii ukierunkowanych molekularnie i terapii komórkami CAR-T9,10,11,12.
BCP-ALL może szczególnie skorzystać z ksenoprzeszczepu danio pręgowanego, ponieważ rozszerzanie pierwotnych komórek pacjenta w hodowli pozostaje wyzwaniem13. Istnieje niezaprzeczalne zapotrzebowanie na nowatorskie metody leczenia w ALL. Pomimo wysokiego wskaźnika remisji wynoszącego 80%-85% u dzieci z BCP-ALL, wskaźniki długoterminowego przeżycia u pacjentów z nawrotową lub oporną na leczenie chorobą wahają się tylko między około 30%-60%14,15,16. W takich przypadkach testowanie leków z wykorzystaniem proponowanej linii można zintegrować z warunkami klinicznymi w celu określenia optymalnej terapii specyficznej dla pacjenta14,15. To spersonalizowane podejście może mieć kluczowe znaczenie w przypadku wielorakiej oporności na leki, znacznie zmniejszając obciążenie pacjentów związane z leczeniem poprzez unikanie nieskutecznych lub nieoptymalnych leków o poważnych skutkach ubocznych.
Kilka cech sprawia, że ksenografacja embrionów danio pręgowanego jest odpowiednim modelem. Podobieństwa genetyczne między ludźmi a danio pręgowanym - 70% homologii genetycznej i 84% wspólnych genów związanych z chorobą - wspierają badania interakcji gen-lek17. Wykorzystanie transgenicznego zarodka gospodarza może zatem ujawnić predyspozycje genetyczne wpływające na wrażliwość na leki18. Alternatywnie, komórki ze specyficznymi modyfikacjami genetycznymi mogą być przeszczepiane w celu oceny, czy wrażliwość lub oporność na lek są zgodne z wynikami in vitro. Ksenoprzeszczepy zarodków danio pręgowanego dostarczają również informacji na temat potencjalnych skutków ogólnoustrojowych leków. Chociaż rozwój narządów w zarodkach w wieku 2-3 dni nie jest w pełni dojrzały, narządy są prawidłowo zlokalizowane i częściowo dzielą skład komórkowy ze swoimi dorosłymi odpowiednikami19.
Dalsze zalety tego modelu obejmują to, że do wszczepienia potrzebnych jest tylko kilka komórek rakowych, utrzymanie zarodków gospodarza jest proste, ponieważ nie jest wymagane karmienie w ciągu pierwszych 5 dni życia, a sukces wstrzyknięcia można szybko ocenić dzięki przezroczystości i rozmiarowi zarodków. Unikalną cechą jest to, że na tym etapie rozwoju aktywna jest tylko odporność wrodzona, co ułatwia skuteczne wszczepienie20. W opisanym tutaj protokole ZefiX (patrz podsumowanie w Rysunek 1), niedobór odporności jest dodatkowo wzmacniany przez tłumienie wrodzonego układu odpornościowego w ciągu pierwszych 4 dni życia za pomocą stabilnych oligonukleotydów antysensownych Morpholino ukierunkowanych na spi1 i csf3r, które blokują różnicowanie makrofagów i neutrofili21,22,23.
Ten protokół również różni się od poprzednich protokołów ksenotransplantacji danio pręgowanego, które zostały opracowane głównie dla przeszczepów guzów litych i zazwyczaj wykorzystują metody oceny odpowiedzi leków oparte na obrazowaniu całościowym. ZefiX jest zoptymalizowany pod kątem płynnych komórek nowotworowych, takich jak komórki BCP-ALL, i jest z powodzeniem stosowany do namnażania świeżego lub świeżo mrożonego materiału pacjenta21. ZefiX może być również dostosowany do przylegających komórek nowotworowych poprzez dobór odpowiednich enzymów do dysocjacji tkanek.
Kolejną ważną zaletą jest dalsza analiza za pomocą cytometrii przepływowej, która oferuje kilka korzyści: (i) duża liczba przeszczepionych komórek może być szybko przetworzona, co pozwala na solidną analizę statystyczną na poziomie pojedynczej komórki, (ii) szybkość proliferacji i żywotność mogą być oceniane jednocześnie w pojedynczych komórkach, oraz (iii) cytometry przepływowe są powszechnie dostępne w warunkach badań klinicznych, Umożliwia ocenę odpowiedzi przeszczepionych komórek na działanie leku na poziomie pojedynczej komórki w ciągu kilku godzin. Aby zapewnić odtwarzalność, protokół ten zapewnia ustandaryzowany proces od przygotowania, przez przeszczep, aż po analizę cytometrii przepływowej, co pozwala na przewidywanie odpowiedzi na lek we WSZYSTKICH komórkach w ciągu tygodnia.

<table><tbody><tr><td>szalka Petriego&nbsp; (10 cm)</td><td>Greiner</td><td>P7237</td><td></td></tr><tr><td>7-AAD roztwór do barwienia żywotności&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>00-6993-50</td><td></td></tr><tr><td>Agaroza (LE, gatunek analityczny)</td><td>Biozym&nbsp;</td><td></td><td></td>840004</tr><tr><td>Wtryskiwacz ciśnienia powietrza</td><td>Narishige</td><td>IM400</td><td>&nbsp; z zewnętrznym zasilaniem</td></tr><tr><td>gazem Alexa Fluor&nbsp; 488 przeciwciało anty-ludzkie CD19&nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>302219</td><td></td></tr><tr><td>Annexin bufor wiążący</td><td>Biolegend</td><td>422201</td><td>Lub zobacz roztwory do przygotowania</td></tr><tr><td>APC annexin V&nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>640941</td><td></td></tr><tr><td>Kapilary (10 cm, OD 1,0 mm, z włóknami)</td><td>WPIINC</td><td>TW100F-4</td><td>1,0 OD; 0,75 ID</td></tr><tr><td>Kolba do hodowli komórkowych (T-175)</td><td>Sarstedt</td><td>83,39,12,002</td><td></td></tr><tr><td>CellTrace Fioletowy&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>C34557</td><td></td></tr><tr><td>Sulfoxide dimetylu (DMSO)</td><td>Roth</td><td>A994.1</td><td></td></tr><tr><td>Dyspaza II&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4693-1g</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>AppliChem GmbH</td><td>A3778</td><td></td></tr><tr><td>Probówki Eppendorf (1,5 ml)</td><td>Probówka Eppendorf</td><td>30120086</td><td></td></tr><tr><td>FACS (polistyrenowa okrągła rurka dolna z nasadką sitkową, 5 ml)</td><td>Probówki Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>Falcon (50 ml)</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Surowica cielęca płodu (FCS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C8056</td><td></td></tr><tr><td>Filtr o drobnych oczkach&nbsp;( 10 &mikro; m)</td><td>PluriStrainer</td><td>435001050</td><td></td></tr><tr><td>Filtr o drobnych oczkach&nbsp;( 20 &mikro; m)</td><td>PluriStrainer</td><td>431002040</td><td></td></tr><tr><td>cytometr przepływowy&nbsp;</td><td>Becton Dickinson</td><td>BD LSRFortessa X-20</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescencyjny mikroskop stereoskopowy</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluorescencyjny mikroskop stereoskopowy z kamerą</td><td>Kamera Leica</td><td>M165 FC</td><td>: DFC7000</td></tr><tr><td>T Hank' s Zrównoważony roztwór soli (HBSS, bez wapnia i magnezu)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>88284</td><td></td></tr><tr><td>Forma wtryskowa (Danio pręgowany MI/Zestaw do przeszczepów)</td><td>World Precision Instruments&nbsp;</td><td>Z-MOLDS</td> Igły iniekcyjne (bez filamentu)Instrumenty biomedyczne <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>VZIPbl-20-10-55</td><td>Pipeta iniekcyjna danio pręgowanego,, OD: 20&mu; m &plusmn; 1, TL: ~ 10mm, PL: 55mm, Szkło: BM100T-10P</td></tr><tr><td>Makrowirówka</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikrowirówka</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Morpholino (csf3r)</td><td>Gene Tools LLC</td><td>csf3r (GAAGCACAAGCGA GACGGATGCCA)</td><td></td></tr><tr><td>Morpholino (spi1)</td><td>Gene Tools LLC</td><td>spi1(GATATACTGATAC TCCATTGGTGGT)</td><td></td></tr><tr><td>Papaina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3125</td><td></td></tr><tr><td>Penicylina-Streptomycyna (Penstrep; 10.000&nbsp; U/ml)</td><td>Płytki Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>(4-dołkowe)</td><td>Greiner Bio one&nbsp;</td><td>657160</td><td></td></tr><tr><td>Płytki (96-dołkowe)</td><td>Greiner Bio one&nbsp;</td><td>657180</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium</td><td>Gibco</td><td>21875-034</td><td></td></tr><tr><td>Tricaine&nbsp; (MS-222)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E10521-50G</td><td>Metanosulfenian aminobenzoesanu ety-3</td></tr></tbody></table>

szybkie przewidywanie odpowiedzi na leki in vivo przy użyciu przeszczepów komórek białaczkowych w zarodkach danio pręgowanego

Rapid in vivo Drug Response Prediction Using Leukemia Cell Grafts in Zebrafish Embryos

Ksenotransplantacja danio pręgowanego jest kluczową techniką do badania patogenezy ludzkiego raka i przewidywania indywidualnych reakcji na leki. Niniejszy dokument przedstawia uproszczony protokół (ZefiX) do rozszerzania próbek pacjentów z ostrą białaczką limfoblastyczną (BCP-ALL) z pierwotnymi prekursorami komórek B (BCP-ALL) lub unieśmiertelnionych linii komórkowych w przejściowo immunosupresyjnych zarodkach danio pręgowanego, wykorzystując cytometrię przepływową do analizy odpowiedzi na leczenie pojedynczych komórek o wysokiej rozdzielczości. W porównaniu z wszczepieniami guzów litych, komórki białaczkowe czerpią znaczne korzyści z opartej na oligonukleotydach supresji makrofagów i neutrofili za pomocą antysensownych oligonukleotydów podczas testu. Analiza cytometrii przepływowej zdysocjowanych komórek przeszczepu umożliwia precyzyjną ocenę liczby komórek, szybkości proliferacji i żywotności po leczeniu w przeliczeniu na komórkę. Podejście to zostało zweryfikowane przy użyciu celowanych środków terapeutycznych, takich jak wenetoklaks i dazatynib, a wyniki leczenia porównano z dokumentacją kliniczną powiązanych próbek pacjentów i tradycyjnymi kontrolnymi hodowlami 2D. Warto zauważyć, że protokół jest gotowy w ciągu 7 dni, zgodnie z harmonogramem podejmowania decyzji klinicznych. Metodologię można dostosować do testowania wybranych leków w różnych typach nowotworów, w tym guzach litych, wspierając w ten sposób spersonalizowane strategie terapeutyczne. Należy jednak rozważyć ograniczenie liczby leków, które można ocenić, prawdopodobnie ze względu na ograniczenia farmakokinetyczne w zarodkach danio pręgowanego.

Szczegółową ocenę naukową protokołu ZefiX, obejmującą ksenoprzeszczepy oraz leczenie preparatami farmakologicznymi świeżo zamrożonych, pierwotnych próbek komórek BCP-ALL, można znaleźć w wcześniej opublikowanej pracy21. Zgoda na wykorzystanie próbek pacjentów w badaniach do przedklinicznych testów leków została udzielona przez lokalne komisje etyki badań medycznych w ramach badań uzupełniających do badania ALL-REZ BFM 2002 (NCT00114348) oraz rejestru i biobanku ALL-REZ BFM (EA2/055/12), a także pr...

Ten protokół zawiera instrukcje krok po kroku dotyczące generowania i rozwiązywania problemów z ludzkimi ksenoprzeszczepami ostrej białaczki limfoblastycznej (ALL) z linii komórkowych i świeżego materiału pacjenta w przejściowo immunosupresyjnych zarodkach danio pręgowanego, wraz z wytycznymi dotyczącymi oceny odpowiedzi na lek za pomocą cytometrii przepływowej. Rurociąg eksperymentalny może być również dostosowany do guzów litych.

Szybkie przewidywanie odpowiedzi na leki in vivo przy użyciu przeszczepów komórek białaczkowych w zarodkach danio pręgowanego

Zebrafish xenotransplantation is a pivotal technique for investigating human cancer pathogenesis and predicting individual drug responses. This document ...

Opracowaliśmy szybki, siedmiodniowy przepływ pracy, aby sprawdzić, jak komórki nowotworowe reagują na leki przy użyciu zarodków danio pręgowanego. Będąc blisko onkologii dziecięcej, mamy dostęp do rzadkich próbek nowotworów i zaczęliśmy od białaczki prekursorowej z komórek B, ale teraz przyjmujemy protokół dla litych guzów dziecięcych, aby sprawdzić, czy test zadziała również w warunkach klinicznych. Możemy z powodzeniem hodować komórki białaczkowe pochodzące od pacjentów w zarodkach danio pręgowanego, co czyni je wspaniałym modelem przedklinicznym.Jednak farmakokinetyka może być trudna, ponieważ niektóre leki mają trudności z przekraczaniem barier biologicznych, dlatego upewniamy się, że testujemy penetrację przed rozpoczęciem eksperymentów. Nasze podejście jest wyjątkowe, ponieważ blokuje wrodzone różnicowanie komórek odpornościowych, co pomaga komórkom przeszczepu białaczki lepiej przetrwać. Ponadto używamy cytometrii przepływowej do pomiaru żywotności i proliferacji pojedynczych komórek w przeszczepionych komórkach w pulach 10 ryb gospodarzy.Dzięki temu mamy bardzo precyzyjne dane dotyczące reakcji na leki i dużą moc statystyczną. Na początek rozpuść 1% agarozy w 100 mililitrach pożywki E3 w kuchence mikrofalowej. Na płytkę do przeszczepu wlej około 20 mililitrów pożywki do 10-centymetrowej szalki Petriego, wypełniając ją do połowy.Delikatnie zakręć płytką, aby równomiernie rozprowadzić płyn. W przypadku płytek iniekcyjnych morpholino umieść formę wtryskową na płynnej agarozie na dwóch szalkach Petriego, upewniając się, że nie tworzą się pęcherzyki. Przechyl pokrywki, aby przykryć naczynia i pozostaw je w temperaturze pokojowej, aż agaroza zastygnie.Gdy agaroza zastygnie, przechowuj płytki do góry nogami w temperaturze czterech stopni Celsjusza w szczelnie zamkniętej plastikowej torbie. Następnie wygeneruj igły z 10-centymetrowych naczyń włosowatych za pomocą ściągacza do igieł. Odłam końcówki igieł, aby uzyskać szacunkową średnicę 10 mikrometrów.Aby wstrzyknąć morfolino, należy przenieść partie 100 zapłodnionych jaj danio pręgowanego z minimalną ilością płynu do wcześniej przygotowanej płytki iniekcyjnej. Ostrożnie wyrównaj zarodki w rowkach płytki. Wstrzyknąć jeden nanolitr 50-mikromolowej mieszanki morfolinosów spi1 i csf3r do komórki lub worka z żółtkiem tuż pod komórką w fazie jednokomórkowej.Wstrzyknięte jaja wysiadywać w temperaturze 28 stopni Celsjusza przez noc. Trzeciego dnia, aby zainicjować dechorionację, za pomocą pipety Pasteura usuń z naczynia wszystkie martwe zarodki, które nie wykazują bicia serca ani ruchu, wydają się nieprzezroczyste lub mają nieregularne kształty. Za pomocą dwóch precyzyjnych kleszczyków ściśnij kosmówkę, aby utrzymać ją na miejscu.Ściśnij w pobliżu końcówki kleszczy, jednocześnie zabezpieczając zarodek drugim zestawem kleszczy. Ostrożnie rozsuń kosmówkę, aby uwolnić zarodek. Inkubuj zarodki z odciętą chorągiewką w temperaturze 28 stopni Celsjusza przez noc.Na początek przygotuj dwie 10-centymetrowe szalki Petriego wypełnione pożywką E3 uzupełnioną penicyliną, streptomycyną lub E3/P/S. Umieść naczynia w temperaturze 28 stopni Celsjusza na 30 minut, aby się podgrzały. Po fluorescencyjnym znakowaniu komórek za pomocą CellTrace Violet lub CTV, odwiruj komórki BCP-ALL.Następnie dodaj PBS, aby osiągnąć pożądane stężenie komórek i utrzymuj je na lodzie. Załaduj cztery mikrolitry zawiesiny komórkowej do igły transplantacyjnej za pomocą końcówki mikroładowarki. Dodać trikainę do szalki Petriego z podłożem E3/P/S i zarodkami ryb, aby osiągnąć końcowe stężenie czterech gramów na litr w celu znieczulenia zarodków przez co najmniej dwie minuty przed wstrzyknięciem.Następnie przenieś 15 do 20 zarodków z odkorkążką do naczynia iniekcyjnego pokrytego agarozą i usuń nadmiar płynu, aby zapobiec ślizganiu się zarodków. Ułóż zarodki na naczyniu do wstrzykiwań. Wprowadzając igłę pod kątem 45 stopni od kierunku grzbietowego, wstrzyknąć około 1 000 komórek BCP-ALL CTV-dodatnich do jamy osierdzia.Po wstrzyknięciu od 15 do 20 zarodków przenieś je na wstępnie podgrzaną szalkę Petriego wypełnioną pożywką E3/P/S. Inkubować zarówno przeszczepione zarodki, jak i nieprzeszczepione grupy kontrolne w temperaturze 28 stopni Celsjusza przez jedną do trzech godzin. Pod fluorescencyjnym mikroskopem stereoskopowym przebadaj zarodki, aby potwierdzić pomyślne wszczepienie i upewnić się, że żółtko jest nienaruszone.Dodaj 100 mikrolitrów pożywki E3/P/S i 0,5% DMSO do każdego dołka na płytce 96-dołkowej. Za pomocą szklanej pipety Pasteura pobrać wszczepiony zarodek z jak najmniejszą ilością pożywki E3. Przechyl pipetę, aby zarodek opadł na dno końcówki pipety i uwolnij go do studzienki za pomocą sił kapilarnych.Napełnić 24 studzienki z 96-dołkowej płytki 100 mikrolitrami roztworu kontrolnego pojazdu lub dwukrotnie stężonych roztworów wenetoklaksu. Utrzymuj zarodki w temperaturze 35 stopni Celsjusza przez 72 godziny, włączając w to zarodki nieprzeszczepione jako kontrolę. Pod koniec trzeciego dnia należy wyjąć z inkubatora 96-dołkową płytkę zawierającą wszczepione zarodki danio pręgowanego.Przebadaj płytkę za pomocą mikroskopii stereoskopowej, aby zidentyfikować i wybrać zdrowe zarodki danio pręgowanego. Losowo zbierz 10 zarodków gospodarza z każdego stanu w 1,5-mililitrowej probówce mikrowirówkowej, co idealnie daje dwie probówki na warunek. Usuń jak najwięcej płynu z każdej tubki.Dodaj 500 mikrolitrów HBSS bez wapnia i magnezu do każdej probówki. Mechanicznie rozdzielić zarodki i przeszczepione komórki przez rozcieranie za pomocą końcówki mikropipety o pojemności 200 mikrolitrów, pipetując w górę iw dół około 15 razy. Odwirować probówki o masie 350 g przez pięć minut w temperaturze pokojowej, aby osadzać fragmenty tkanki.Przygotuj probówki FACS z nasadką filtra siatkowego o drobnych oczkach o grubości 35 mikrometrów, zawierającą dwa mililitry PBS na warunek. Następnie ponownie zawiesić osad w 500 mikrolitrach mieszanki enzymatycznej i inkubować przez 15 minut w temperaturze pokojowej. Podczas inkubacji pipetować mieszaninę w górę i w dół co pięć minut, używając tej samej końcówki pipety do każdej probówki, aby uniknąć utraty tkanki.Przenieś zdysocjowane komórki do nasadki filtra siatkowego o drobnych oczkach o grubości 35 mikrometrów w probówkach FACS. Odwirować probówkę o masie 350 g przez pięć minut. Przeprowadź analizę cytometrii przepływowej, aby ocenić całkowitą liczbę przeszczepionych komórek.Rozpocznij analizę danych od komórek hodowlanych 3dpi barwionych CTV i CD19. Utwórz wykres punktowy za pomocą CD19 i CTV, aby upewnić się, że sygnał nakłada się na siebie i potwierdzić obecność podwójnie barwionych komórek rakowych. Następnie utwórz wykres punktowy z FSC-A i SSC-A, aby odróżnić nienaruszone komórki od zanieczyszczeń.Następnie użyj nienaruszonej populacji komórek, aby utworzyć nowy wykres z SSC-A i SSC-H w celu identyfikacji pojedynczych komórek. Utwórz wykres punktowy z 7AAD i aneksyną V, używając populacji pojedynczych komórek, aby rozróżnić komórki na cztery populacje. Otwórz plik wszczepionego danio pręgowanego.Oddziel ludzkie komórki przeszczepu od komórek gospodarza za pomocą wykresu kropkowego z CTV i CD19. Zidentyfikuj i wyizoluj podwójnie dodatnie komórki przeszczepu CTV, CD19. Skopiuj i zastosuj tę samą strategię bramkowania, którą opisano dla komórek hodowlanych 3 dpi do populacji komórek przeszczepu.Połącz wszystkie ujemne populacje komórek aneksyny V i 7AAD w histogram z wartościami CTV na osi x. Oblicz średnią geometryczną dla wszystkich pięciu próbek, aby określić tempo proliferacji. Dane z cytometrii przepływowej wykazały, że świeże pojedyncze komórki BCP-ALL wszczepione w zarodki danio pręgowanego miały 95,2% żywotności po trzech dniach, 1,5 razy wyższą niż 61,9% żywotności komórek hodowanych w naczyniu.Intensywność fluorescencji CTV zarówno w warunkach in vivo, jak i in vitro zmniejszyła się podobnie w ciągu trzech dni, co wskazuje na porównywalne tempo podziału komórek. Nienaruszone komórki przeszczepu na zarodek po trzech dniach oznaczono ilościowo w każdej puli, co wskazuje na konsekwentne wszczepianie.

rapid-vivo-drug-response-prediction-using-leukemia-cell-grafts

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

Testy transplantacji komórek z rozcieńczeniem ograniczającym są stosowane do określania częstości występowania komórek propagujących nowotwór. Niniejszy protokół opisuje metodę generowania syngeneicznych rybek zebrafish, u których rozwija się białaczka z oznakowaniem fluorescencyjnym, oraz szczegółowo wyjaśnia, jak izolować i transplantować te komórki białaczkowe z rozcieńczeniem ograniczającym do jamy otrzewnej dorosłych rybek zebrafish.

Kwantyfikacja częstotliwości komórek propagujących guz za pomocą transplantacji komórek w rozcieńczeniu ograniczającym u syngeneicznych rybek zebrafish

Tutaj prezentujemy protokół przeszczepu komórek mięśni szkieletowych danio pręgowanego i embrionalnego mięsaka prążkowanokomórkowego (ERMS) do dorosłego homozygotycznego mutanta rag2E450fs z obniżoną odpornością. Protokół ten pozwala na sprawną analizę regeneracji i przemian złośliwych komórek mięśniowych.

Normalny i złośliwy przeszczep komórek mięśniowych dorosłym danio pręgowanym z obniżoną odpornością

Ta metoda wykorzystuje embriony danio pręgowanego do skutecznego testowania inwazyjnej zdolności komórek rakowych do naczyń krwionośnych. Fluorescencyjne komórki rakowe są wstrzykiwane do zatoki przedsercowej lub woreczka żółtkowego rozwijających się zarodków. Inwazję naczyniową i wynaczynienie komórek rakowych ocenia się za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej obszaru ogonowego od 24 do 96 godzin później.

Badanie inwazyjnej zdolności naczyniowej komórek nowotworowych u danio pręgowanego (Danio rerio)

Przeszczepianie komórek nowotworowych jest ważnym narzędziem do identyfikacji mechanizmów nowotworowych i odpowiedzi terapeutycznych. Obecne techniki opierają się na zwierzętach niekompetentnych immunologicznie. W tym miejscu opisujemy metodę przeszczepiania komórek nowotworowych danio pręgowanego do zarodków kompetentnych immunologicznie w celu długoterminowej analizy zachowania komórek nowotworowych i odpowiedzi na leki in vivo.

Przeszczepianie pediatrycznych guzów mózgu danio pręgowanego do gospodarzy kompetentnych immunologicznie w celu długoterminowego badania zachowania komórek nowotworowych i odpowiedzi na leki

Zarodki danio pręgowanego są używane do oceny toksyczności związków chemicznych. Rozwijają się zewnętrznie i są wrażliwe na chemikalia, co pozwala na wykrycie subtelnych zmian fenotypowych. Eksperyment wymaga jedynie niewielkiej ilości związku, który jest bezpośrednio dodawany do płytki zawierającej zarodki, dzięki czemu system testowy jest wydajny i opłacalny.

Szybka ocena toksyczności związków chemicznych z wykorzystaniem zarodków danio pręgowanego

Ten protokół opisuje procedury optymalizacyjne w opartym na wirusie, dwufluorescencyjnie znakowanym modelem ksenoprzeszczepu guza, wykorzystującym larwy danio pręgowanego jako gospodarzy. Ten heterogeniczny model ksenoprzeszczepu naśladuje skład tkankowy mikrośrodowiska raka trzustki in vivo i służy jako bardziej precyzyjne narzędzie do oceny reakcji leków w spersonalizowanych modelach zPDX (ksenoprzeszczep pobrany od pacjentów z danio pręgowanego).

Heterogeniczny model ksenoprzeszczepu raka trzustki uzyskany od pacjenta z wykorzystaniem larw danio pręgowanego jako gospodarzy do porównawczej oceny leków

Celem tej metody jest wygenerowanie in vivo modelu angiogenezy guza poprzez ksenografowanie komórek nowotworowych ssaków do zarodka danio pręgowanego, który ma fluorescencyjnie znakowane naczynia krwionośne. Obrazując ksenoprzeszczep i związane z nim naczynia, można uzyskać ilościowy pomiar odpowiedzi angiogennej.

Obrazowanie in vivo i kwantyfikacja odpowiedzi angiogennej gospodarza w ksenoprzeszczepach guza danio pręgowanego

Modele ksenoprzeszczepów danio pręgowanego pozwalają na wysokoprzepustowe badania przesiewowe leków i obrazowanie fluorescencyjne ludzkich komórek nowotworowych w mikrośrodowisku in vivo. Opracowaliśmy przepływ pracy do zautomatyzowanych badań przesiewowych leków na dużą skalę na próbkach białaczki pobranych od pacjentów u danio pręgowanego przy użyciu zautomatyzowanego urządzenia do obrazowania wyposażonego w mikroskop fluorescencyjny.

Badania przesiewowe leków w ksenoprzeszczepach nowotworowych pochodzących od pacjenta pręgowanego

Tutaj udostępniamy protokół krok po kroku, z poradami dotyczącymi generowania ksenoprzeszczepów i wytycznymi do analizy zachowania guza, immunofluorescencji całego montażu i kwantyfikacji obrazowania konfokalnego.

Generowanie ksenoprzeszczepów larw danio pręgowanego i analiza zachowania guza

Opisujemy protokół ksenotransplantacji do żółtka przezroczystych zarodków danio pręgowanego, który jest zoptymalizowany za pomocą prostej, szybkiej metody oceny poziomu. Analizy po wstrzyknięciu obejmują przeżycie i ocenę obciążenia chorobowego ksenoprzeszczepionymi komórkami za pomocą cytometrii przepływowej.

Prosta, szybka i skuteczna metoda analizy ksenotransplantacji guza w przezroczystych zarodkach danio pręgowanego

Użyliśmy barwienia proliferacji komórek, aby zidentyfikować komórki w stanie spoczynku w modelu T-ostrej białaczki limfoblastycznej u danio pręgowanego. Barwnik jest zatrzymywany w komórkach niedzielących się i redukowany podczas proliferacji komórek, co umożliwia selekcję uśpionych komórek do dalszego badania. Protokół ten zapewnia funkcjonalne narzędzie do badania samoodnowy w kontekście spoczynku komórkowego.

Identyfikacja komórek w stanie spoczynku w modelu ostrej białaczki limfoblastycznej limfoblastycznej limfocytów T danio pręgowanego za pomocą barwienia proliferacji komórek

Poznaj szybką metodę oceny odpowiedzi na leki w białaczce limfoblastycznej przy użyciu ksenoprzeszczepów w zarodkach danio pręgowanego. Protokół umożliwia precyzyjną analizę cytometrią przepływową w ciągu siedmiu dni.

Szybkie przewidywanie odpowiedzi na leki in vivo przy użyciu przeszczepów komórek białaczkowych w zarodkach danio pręgowanego

Przeglądaj więcej filmów