Este vídeo mostra um procedimento para isolar protoplastos intactos a partir de tecidos de 14 dias de idade, mudas de Arabidopsis. Dado que o protoplastos isolados permanecem intactos por pelo menos 96h e são isoladas de mudas, em vez de um mês de idade plantas maduras, esse procedimento agiliza ensaios exigindo protoplastos intactos.
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Artigo de método
Isolamento de Protoplastos de tecidos de 14 dias de idade, mudas de Arabidopsis thaliana
Neste artigo
Resumo
Resumo
Protoplastos são células vegetais que tiveram suas paredes celulares enzimaticamente removido. Isolamento de protoplastos a partir de tecidos diferentes de plantas foi relatada pela primeira vez mais de 40 anos atrás
Protocolo
Parte 1. Preparação de meio sólido para o crescimento das plantas.
Normalmente, as plantas de cultura concentrada Murasige e Skoog (MS) suplementado com 1% de sacarose e ágar 0,7%. Ele contém todos os ingredientes necessários para manter as plantas saudáveis.
Para preparar 1L de MS, pH 5,7 mídia
- Adicionar 2,15 g de MS pó em 800 ml de água em 1,5 2.0L garrafa autoclavável.
- Colocar uma barra de agitação dentro da garrafa e dissolver o pó MS por meio de agitação médio em uma placa de agitação.
- Agitando, adicione, gota a gota, KOH 1N para ajustar o pH do meio MS para....
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Discussão
Para garantir o alto rendimento de protoplastos intactos é muito importante para start-up com as plantas saudáveis. Use filtro esterilizar soluções para isolar protoplastos. Lembre-se que protoplastos são frágeis. Portanto, quando você está lidando com protoplastos, não se misturam, pipeta ou vortex-os vigorosamente, uma vez que vai de freio-los. Em vez disso, misture protoplastos girando lentamente ou com fita do tubo de centrifugação. O procedimento descrito rendimento de protoplastos intactos que são viáveis para p.......
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Divulgações
A patente provisória que descreve este procedimento para a sua utilização em análises funcionais de genes de plantas foram arquivados com Cornell Centro para a Empresa de Tecnologia e Comercialização (CCTEC), junho de 2008. Docket 50341/015001: Vatamaniuk, OK, e Zhai, Z. Método para rápida análise funcional de genes da planta.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pela Estação Experimental Agrícola da Universidade de Cornell (CUAES) NYC-125433 escotilha Grant e Cornell Start-Up Grant concedido a OKV
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Mistura de Sais Basais de Murashige e Skoog (MS) | Sigma-Aldrich | M5524 | |
| Ágar | Sigma-Aldrich | A1296 | |
| Placas de Petri (100x15 mm) | Krackeler Scientific, Inc. | 82-4001 | |
| Cellulase (Onozuka R‐10) | Research Products International Corp. | C32200 | |
| Macerozyme (R10) | Research Products International Corp. | M22010 | |
| Pano de pano de algodão cru | Fisher Scientific | 06-665-29 | |
| LabRotator | Fisher Scientific | 1167152Q | |
| Centrífuga Allegra X‐15R | VWR international | 392932 | |
| Microscópio Axioskop 2 Plus | Carl Zeiss, Inc. |
Referências
- Cocking, E. C. A Method for the Isolation of Plant Protoplasts and Vacuoles. Nature. 187, 962-963 (1960).
- Chen, S., Halkier, B. A. Characterization of glucosinolate uptake by leaf protoplasts of Brassica napus. J Biol Chem. 275, 22955-22960 (2000).
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Reimpressões e permissões
