Photoswitching intravital e acompanhamento de Dendra2 marcado células tumorais através da janela de imagem mamária é uma técnica que nos permite a imagem do comportamento metastático das células tumorais em microambientes tumorais escolhido em detrimento de uma escala temporal de dias.
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Artigo de método
Dendra2 Photoswitching através da janela de imagem mamária
Neste artigo
Resumo
Resumo
Na última década, microscopia, intravital de tumores de mama em camundongos e ratos com uma única célula de resolução
Protocolo
1. Geração de tumores fluorescentes usando a injeção de células tumorais mamárias no teclado de gordura:
- Crescer uma linhagem de células expressando Dendra2 proteínas (como um marcador citoplasmático) para 40-80% confluência.
- Enxaguar pratos, pelo menos, 3 vezes com PBS w / o Ca 2 + ou Mg 2 +.
- Adicionar 3 ml de tripsina por 10 centímetros prato e incubar a 37 ° C até que a maioria das células separar e em seguida, bateu o prato contra uma superfície plana para agitá-lo.
- Lave bem todas as células fora do prato, e use um raspador (policial de borracha) para coletar matriz também. Adicione a 5 ml de PBS. Tom....
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Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pelo Departamento de Defesa dos EUA (BC075554 a BG e BC061403 para DK), National Institutes of Health EUA (U54GM064346 para JVR; CA100324 ao JC, JES e JW; CA77522 para JES, U54CA126511 ao JC e BG). Agradecemos a D. Entenberg para ajudar com microscopia, M. Rottenkolber para ajudar na fabricação de caixa de imagem e J. Pollard (Albert Einstein College of Medicine) para o anticorpo F4/80.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| PBS sem Ca, Mg | GIBCO, by Life Technologies | 14190-144 | |
| Tripsina | GIBCO, by Life Technologies | 25300 | |
| HBSS | GIBCO, by Life Technologies | 14025 | |
| Meio DMEM (células MDA-MB-231) | GIBCO, by Life Technologies | 11965 | |
| Isoflurano (Aerrane) | Baxter Internationl Inc. | # NDC 10019-773-40 | |
| Camundongo SCID | Instituto Nacional do Câncer | N/A | |
| Placas de cultura | BD Biosciences | 353003 | Pedido personalizado |
| Lâmina circular de 8 mm | Scientific, Inc. | 8CIR-1-FIS |
Referências
- Farina, K. L., Wyckoff, J. B., Rivera, J., Lee, H., Segall, J. E., Condeelis, J. S., Jones, J. G. Cell motility of tumor cells visualized in living intact primary tumors using green fluorescent protein. Cancer Res. 58, 2528-2532 (1998).
- Naumov, G. N., Wilson, S. M., MacDonald, I., Schmidt, E. E., Morris, V. L., Groom, A. C., Hoffman, R. M., Chambers, A. F.
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Reimpressões e permissões
