Decifrando Pathways Axonal dos Grupos geneticamente definidos de neurônios no tubo Neural Utilizando Pintainho In ovo Eletroporação

Summary

Este vídeo demonstra como visualizar caminhos axonal de grupos geneticamente definido de neurônios na medula espinhal utilizando pinto embrionárias In ovo Eletroporação de genes repórter sob o controle de elementos específicos enhancer.

Abstract

Emprego de elementos enhancer para dirigir a expressão de genes repórter em neurônios é um paradigma amplamente utilizado para rastreamento de projeção axonal. Para rastreamento de projeção axonal de interneurônios da coluna vertebral nos vertebrados, os genes de células germinativas alvo repórter rendimento rotulagem bilateralmente simétrica. Portanto, é difícil distinguir entre o ipsi-e contra-lateralmente axônios de projeção. Eletroporação unilateral dentro do tubo neural pinto fornece um meio útil para restringir a expressão de um gene repórter para um lado do sistema nervoso central, e seguir a projeção axonal em ambos os lados

Protocol

I. Eletroporação

Manipulação de ovos

1. Coloque os ovos em um conjunto de incubadora umidificada a 37-38 ° C, de preferência uma incubadora com um bandejas de balanço.
2. Embrião são electroporated após cerca de 66 horas de incubação, quando atingiram Hamburger & Hamilton estágio (HH) 18-20. Nesta fase, a cabeça encontra-se em ângulos retos com o tronco (condição chamada de flexão cervical) e um vasto conjunto de vasos extra-embrionárias do sangue, como o anterior, posterior, direita e esquerda veias vitelina deve ser visto. Esta é uma fase ótima para enhancer-dependente expressão específica ^1,3,4. É importante moni....

Discussion

Eletroporação de DNA plasmídeo no embrião de galinha evolui como uma poderosa técnica para na expressão ectópica vivo. A combinação de enhancers específico, e eletroporação pinto fornece uma ferramenta rápida e eficiente para decifrar caminhos axonal de um grupo geneticamente definido de neurônios ^1,3,5. Utilizando o Cre / LoxP e os sistemas de amplificação Gal4/UAS pode aumentar a intensidade e duração da expressão. A imagem que surge é de uma divergência complexo de pistas axonal que surge a partir subpopul.......