Method Article

Isolar células-tronco de tecidos moles músculo-esqueléticas

DOI:

10.3791/2011

⸱

July 5th, 2010

 ,  , 
1Stem Cell Research Center, Childrens Hospital of Pittsburgh of UPMC, 2Department of Bioengineering, University of Pittsburgh, 3Department of Orthopedic Surgery, University of Pittsburgh, 4Department of Pathology, University of Pittsburgh, 5Department of Molecular Genetics & Biochemistry, University of Pittsburgh

In This Article

Summary

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Células adultas isolando-tronco de tecidos moles músculo-esqueléticas com base na velocidade da célula a adesão ao frasco.

Abstract

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Células-tronco adultas têm sido discutidas em relação à sua aplicação na medicina regenerativa. Células-tronco adultas têm gerado uma grande emoção para o tratamento de tecidos lesionados e doentes, devido à sua capacidade impressionante de se submeter multi-linhagem diferenciação celular e sua capacidade de auto-renovação. Mais importante ainda, essas qualidades fizeram-lhes vantajoso para uso em terapias de transplante autólogo de células. O protocolo atual irá introduzir os leitores à técnica preplate modificado onde os tecidos moles do sistema músculo-esquelético, por exemplo, tendão e músculo, são um

Protocol

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Em geral, o procedimento completo preplate modificada exige 1-2 dias de preparação, uma semana de realizar o procedimento técnico, 2-3 dias de identificação de células com imunocitoquímica, e um adicional de 2-3 semanas de tronco expansão da população celular. Os equipamentos necessários para a cultura de células-tronco são semelhantes ao de sistemas de célula de outra cultura, que inclui uma Centrífuga de bancada, incubadora de CO 2, câmara de fluxo laminar de cultura de tecidos e um microscópio invertido equipado com fluorescência e uma câmera digital. As células-tronco isoladas também podem ser clonados e pode ser armazenado a longo prazo em nitrogênio ....

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Discussion

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Foi reconhecido que alguns tecidos adultos contêm células-tronco múltiplas. Ao longo dos últimos anos de estudo, células-tronco têm sido detectadas nos tecidos moles músculo-esqueléticas, incluindo o músculo esquelético e tendão. Este protocolo atual detalhes de um procedimento, conhecido como a técnica preplate modificado, que tem sido utilizado com sucesso em nosso laboratório para isolar células-tronco adultas a partir de tendões e músculo esquelético. Usando a técnica preplate modificado descrito acima as células po.......

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Disclosures

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Não há conflitos de interesse declarados.

Acknowledgements

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Os autores são muito satisfeito com a Sra. Haiying Pan e Ian Mr. Bellayr por sua ajuda técnica sobre o isolamento de células para os filmes atuais e Kyle Sr. Holden eo Sr. Jonathan Lucas pela ajuda na edição de slide. Muito obrigado a seguinte lista de pessoas que estiveram envolvidas com o desenvolvimento das técnicas preplate modificado ao longo dos últimos anos: os drs. Burhan Gharaibeh, Baohong Cao, Deasy Bridget, Thomas R. Payne, Aiping Lu, Hairong Peng, Hideki Oshima, Bo Zeng, Xiaodong Mu, KIMIMASA Tobita, Ron Jankowski, Makato Ikezawa. Estamos gratos pela assistência técnica de James H. Cummins, Pruchnic Ryan, Feduska Joseph, C. Rebecca Schugar, Pan Haiying e ....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
DMEMInvitrogen#11995-073
FBSInvitrogen#10437-028
Soro de cavalo inativado por calorInvitrogen#26050-088
Extrato de embrião de pintinhoAccurate Chemical#CE650T-10
100U ml penicilina/estreptomicinaInvitrogen#15140-122
Dulbecco's PBSInvitrogen#14190-250
Solução salina tamponada de HankInvitrogen#24020-117
Colagenase tipo XI 0,2%(peso/vol)Sigma-Aldrich#C7657
Dispase2.4U mlInvitrogen#17105-041
Tripsina-EDTA0,5%(peso/vol) (10x; 5g litro de tripsina (1:250)Invitrogen#15400-054
Colágeno para frasco de revestimento: Colágeno tipo I derivado da pele de bezerro 0,1 g litroSigma-Aldrich#C-9791
DMSOSigma#D-2650

References

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  1. Gharaibeh, B. Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique. Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).
  2. Qu-Petersen, Z. Identificatio....

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Stem Cell IsolationMusculoskeletal TissueEnzymatic DigestionPreplate TechniqueCollagen Coated FlaskCell DissociationFlow CytometryImmunofluorescenceMicroscopyProliferation Medium

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