Este vídeo demonstra o uso de In vivo Imagem de bioluminescência para estudar as respostas imune após o implante do tecido do coração Engineered (EHT) em ratos.
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Artigo de método
Imagem bioluminescência para avaliação das respostas imune após o implante do tecido do coração Engineered (EHT)
Neste artigo
Resumo
Resumo
Várias técnicas de engenharia de tecido cardíaco foram perseguidos nas últimas décadas, incluindo estratégias de andaimes utilizando materiais nativa ou bioartificial andaime, aprisionamento de miócitos cardíacos em hidrogéis, tais como fibrina ou colágeno e empilhamento de monocamadas miócitos 1. Esses conceitos visem a restauração de comprometimento da função cardíaca (por exemplo, após infarto do miocárdio) ou como modelos experimentais (por exemplo, toxicologia preditiva e triagem substância ou modelagem de doença). Monitoramento preciso de sobrevivência das células após o implante do tecido do coração engenharia (EHT) tornou-se possível usando in-vivo de imagem de bioluminescência (BLI) técnicas de 2. Aqui, descrevemos a geração de fibrina baseado EHT de uma linhagem de ratos transgênicos com expressão ubíqua de firefly luciferase (ROSA / luciferase-LEW Tg; 3). Implantação é realizada no omento maior de linhagens de ratos diferentes para avaliar a resposta imune do organismo receptor após a implantação EHT. Comparação dos resultados gerados pelo BLI e Enzyme Linked Immuno Technique spot (ELISPOT) confirmam a usabilidade de BLI para a avaliação das respostas imunes.
Protocolo
1. EHT Geração e Cultura Condições
Fabricação de fibrina baseado EHT foi realizada conforme já descrito 4. Em resumo, para gerar fibrina baseado EHT para fins de implantação, um master mix foi preparado contendo células isoladas de ROSA neonatal / luciferase-LEW corações de ratos transgênicos, fibrinogênio bovino e Matrigel. Moldes de fundição de agarose foram preparadas utilizando espaçadores Teflon colocado em pratos bem 6-cultura. Após a solidificação da agarose, espaçadores foram retirados e racks pós silicone foram colocados em placas de cultura com posts atingindo os moldes. Para gerar EHT, a Mastermix foi brevemente mistur....
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Discussão
Antes da implementação clínica da tecnologia EHT para reparação cardíaca, questões fundamentais, como a imunogenicidade de ambos os componentes celulares e da matriz ou sobrevida do enxerto após o implante devem ser avaliados em modelos experimentais. In-vivo de imagem de bioluminescência representa uma nova técnica útil para a sobrevivência da célula de acompanhamento após o transplante . Nós gerado com sucesso fibrina baseado EHT contendo luciferase positivo (luc +) células do coração pela adaptação de um pro.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Sonja Schrepfer, Lenard Conradi e Arne Hansen recebeu financiamento da Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1, CO 858/1-1, HA 3423/3-1). O trabalho também foi suportado por concessões da União Européia para Thomas Eschenhagen (EUGeneHeart e Angioscaff).
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Materiais
- LEW-Tg (Gt (ROSA) 26Sor-luc) 11Jmsk ratos (NBPR número de ratos 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/)
- Fibrinogênio bovino (solução estoque: 200 mg / ml, mais aprotinina 5 mg / ml em NaCl fibrinogênio 0,9%, Sigma F4753)
- Matrigel (BD Bioscience 356235)
- DMEM (Biochrome F0415)
- Soro de cavalo (Gibco 26050)
- Penicilina estreptomicina / (Gibco 15140)
- Insulina (Sigma-Aldrich I9278)
- Aprotinina (Sigma Aldrich A1153)
- d-luciferina (Biosynth L-8220)
- Imunoenzimático spot (ELISpot) placas de ensaio (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99)
Referências
- Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. Engineering myocardial tissue. Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).
- van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart. Tr....
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Reimpressões e permissões
