Este protocolo mostra como retrogradamente rótulo células ganglionares da retina, e como posteriormente fazer uma lesão por esmagamento do nervo óptico, a fim de analisar a sobrevivência das células ganglionares da retina e apoptose. É um modelo de doença experimental para diferentes tipos de neuropatia óptica, incluindo glaucoma.
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Artigo de método
Nervo Óptico um modelo murino de lesão por esmagamento Estudo de Sobrevivência de células da retina Gânglio
Neste artigo
Resumo
Resumo
Lesão do nervo óptico pode levar à degeneração axonal, seguido de uma morte gradual de células ganglionares da retina (RGCs), o que resulta em perda de visão irreversível. Exemplos de tais doenças em humanos incluem neuropatia óptica traumática e degeneração do nervo óptico no glaucoma. É caracterizada por alterações típicas na cabeça do nervo óptico, degeneração progressiva do nervo óptico e perda de células ganglionares da retina, se não controlada, levando à perda de visão e cegueira.
O esmagamento do nervo óptico (ONC) modelo do rato é um modelo de lesão importante doença experimental de neuropatia óptica traumática, glaucoma, etc Neste modelo, a lesão por esmagamento do nervo óptico leva a gradual da retina apoptose de células ganglionares. Este modelo de doença pode ser usado para estudar os processos gerais e aos mecanismos de morte neuronal e sobrevivência, que é essencial para o desenvolvimento de medidas terapêuticas. Além disso, as abordagens farmacológica e molecular pode ser utilizada neste modelo para identificar e testar o potencial terapêutico reagentes para tratar diferentes tipos de neuropatia óptica.
Aqui, fornecemos uma demonstração passo a passo (I) rotulagem de base retrógrada das células ganglionares da retina (RGCs) no dia 1, (II) lesão por esmagamento do nervo óptico no dia 4, (III) Colheita da retina e analisar a sobrevivência RGC no dia 11, e (IV) Resultado Representante.
Protocolo
Todos os equipamentos e reagentes utilizados são estéreis. Todos os experimentos com animais foram aprovados pelo Animal Care e Use Committee (ACUC) no NEI / NIH (animal protocolo de estudo NEI-570), e foram realizados de acordo com as diretrizes do NIH e regulamentos.
1. Rotulagem de base retrógrada de células ganglionares da retina (RGCs) no dia 1
O objetivo deste procedimento é a rotular as células ganglionares da retina retrogradamente pela injeção de um corante traçador neural no colículo superior dos camundongos três dias antes da lesão do nervo óptico esmagamento. O corante será retrogradamente tomadas pe....
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Discussão
O nervo óptico modelo de lesão por esmagamento murino é útil para estudar o processo de morte RGC e sobrevivência. Este modelo é também muitas vezes utilizado para investigar os efeitos de diferentes reagentes e genes na apoptose RGC e sobrevivência. Uma vantagem deste modelo é que ele tem um alto grau de reprodutibilidade, com variações mínimas.
No entanto, cuidados especiais são necessários vários passos neste modelo. Em primeiro lugar, ao fazer a lesão por esmagamento do nervo óptico, é e.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Nossa pesquisa é apoiada pelo Programa de Pesquisa Intramural do, NIH National Eye Institute.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Aparelho estereotáxico | ASI Instruments | SAS-4100 | |
| Microscópio de dissecação | World Precision Instruments, Inc. | PZMIV-BS | |
| Porta-lâmina de bisturi | Fine Science Tools | 10003-12 | |
| Lâminas de bisturi nº 15 | Fine Science Tools | 10015-00 | |
| Micromotor com broca | Fine Science Tools | 18000-17 | |
| Agulha de sutura | Fine Science Tools | 12050-03 | |
| Tesoura de mola | Fine Science Tools | 16144-13 | |
| Pinzas Dumont nº 5 | Fine Science Tools | 11252-50 | |
| Seringa Hamilton | Hamilton Co | 88400 | |
| Espumas de gaze | Office Depot | 674889 | |
| Fluorocromo | Sigma-Aldrich | 39286 | |
| Álcool | Sigma-Aldrich | 459844 | 70% |
| H2O2 | Sigma-Aldrich | H3410 | 3% |
Referências
- Yoles, E. GM1 reduces injury-induced metabolic deficits and degeneration in the rat optic nerve. Investigative ophthalmology & visual science. 33, 3586-3591 (1992).
- Fisher, J. Vaccination for neuroprotecti....
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Reimpressões e permissões
