Único Drosophila Dissection omatídeo e Imagem

Resumo

O fator limitante no uso do adulto Drosophila Olho para estudar neurodegeneração e biologia celular é a imagem difícil de processos intracelulares. Descrevemos a dissecação de omatídeos única para gerar uma boa-fé de cultura de células neuronais primários, que podem ser sujeitos a tratamento medicamentoso e avançados de imagem.

Resumo

A mosca da fruta Drosophila melanogaster fez contribuições inestimáveis ​​para pesquisa em neurociência e tem sido amplamente utilizado como modelo para doenças neurodegenerativas por causa de sua genética poderosa ^1. O olho da mosca em particular, tem sido o órgão de escolha para a pesquisa neurodegeneração, sendo a parte mais acessível e de vida dispensáveis ​​do sistema nervoso Drosophila. No entanto, a ressalva importante de olhos intactos é a dificuldade, por causa da intensa autofluorescência do pigmento, em eventos intracelulares de imagem, como a autofagia dinâmica ^2, que são fundamentais para a compreensão da neurodegeneração.

Temos utilizado recentemente a dissecção ea cultura de omatídeos única ³ que tem sido essencial para a nossa compreensão das disfunções autofágica em um modelo de voar (DRPLA) ³ de Dentatorubro-Pallidoluysian ^{Atrofia, 4.}

Temos agora um relatório de descrição abrangente dessa técnica (Fig. 1), adaptado de estudos eletrofisiológicos ^5, que é provável expandir dramaticamente a possibilidade de voar por modelos neurodegeneração. Este método pode ser adaptado a imagem ao vivo de eventos subcelulares e para monitorar a administração da droga eficaz para células fotorreceptoras (Fig. 2). Se usado em combinação com técnicas de mosaico ^6-8, as respostas das células geneticamente diferentes podem ser testadas em paralelo (Fig. 2).

Protocolo

1. Dissecção da retina Drosophila

1. Preencher um poço de uma lâmina de vidro 3-Bem com tampão fosfato salina (PBS 1X), e depois anestesiar voa de CO _2. Os machos e as fêmeas podem ser utilizados para este experimento.
2. Uma vez que as moscas são anestesiados, pegar uma única mosca usando uma pinça e solte-o no prato pequeno de PBS.
3. De acordo com um escopo de dissecação, aperte a tromba com uma pinça, e depois retirar a cabeça do corpo, cortando o pescoço com um segundo conjunto de fórceps.
4. Segurando a cabeça voar a partir do proboscis, cortado pela metade ao longo da linha média esquerda / direita a cabeça voar....

Discussão

A dissecção omatídeo única apresentada aqui permite a coleta de informações mais profundas sobre os processos biológicos celulares, como neurodegeneração, quando modelada no olho Drosophila. Os neurônios fotorreceptores são mais facilmente acessível do que outros neurônios e eles citoplasma é particularmente grande, e, portanto, adequado para estudar a dinâmica da vesícula, nas células mesma usada eficientemente em muitos modelos para quantificar neurodegeneração in vivo. O aspecto crítico da dissecção.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Nome do reagente	Companhia	Número de catálogo	Comentários (opcional)
Dispenser CO2 portáteis	Flystuff	59-150	Recargas também está disponível
DUMONT Tweezer n º 5	AGAR Scientific	T5034
3-Bem lâmina de vidro	EMS	71561-01
Micro tesoura	VWR	HAMMHSB516-09
Médio Schneider	VWR	733-1663
Lyso Tracker Red DND-99	Invitrogen	L7528
Slides Superfrost	VWR	631-0108
Vectashield com DAPI	Vector Labs	H-1200
Lamínulas	VWR	631-1336