Aqui descrito é uma técnica na qual lipopolissacárido é injectado na glândula mamaria de rato lactante através do bocal para simular a mastite, uma condição geralmente causada por infecção bacteriana. Resultados lipopolissacarídeos injeção em maior fator nuclear kappa B (NF-kB) de sinalização, visualizado através de imagem de bioluminescência de um rato repórter NF-kB luciferase.
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Artigo de método
Injeção intraductal de LPS como um modelo do rato de Mastite: Sinalização visualizada através de uma NF-kB Reporter transgênico
Neste artigo
Resumo
Resumo
Os modelos animais de doenças humanas são necessárias a fim de estudar rigorosamente as fases de progressão da doença e os mecanismos associados, e, finalmente, como modelos pré-clínicos para testar intervenções. Nestes métodos, é descrita uma técnica na qual os lipopolissacáridos (LPS) é injectado na glândula mamaria de rato lactante através do bocal, de forma eficaz a mastite modelagem, ou a inflamação, da glândula. Isto resulta de infecção simulados em maior fator nuclear kappa B (NF-kB) de sinalização, como visualizado através de imagem de bioluminescência de um rato repórter NF-kB luciferase 1.
Nosso objetivo final no desenvolvimento desses métodos foi estudar a inflamação associada com mastite na glândula lactantes, que muitas vezes inclui vermelhidão, inchaço, e infiltração de células imunes 2,3. Por isso, estavam completamente cientes de que a incisão ou a qualquer tipo de ferimento da pele, do mamilo ou da glândula de modo a introduzir os LPS poderianão ser utilizado nos nossos métodos desde que a abordagem provavelmente confundir a leitura de inflamação. Nós também desejou um método simples e direto que não exige feitos especialmente desenhados à mão pipetas ou o uso de micromanipuladores para manter essas ferramentas especializadas no lugar. Assim, determinou-se a utilizar uma seringa de insulina comercialmente disponíveis e para injectar o agente dentro do ducto mamário de um mamilo intacta. Este método foi bem sucedida e permitiu-nos estudar a inflamação associada com a injecção de LPS, sem quaisquer efeitos adicionais sobrepostos pelo processo de injecção. Além disso, este método também utilizado um NF-kB luciferase repórter transgénico do rato e bioluminescentes tecnologia de imagem para mostrar visualmente e quantitativamente aumentar a sinalização de NF-kB na glândula LPS injectada 4.
Estes métodos são de interesse para pesquisadores de várias disciplinas que desejam doença modelo dentro da glândula mamária em lactação, em última análise, a técnicaaqui descrita pode ser utilizada para a injecção de um certo número de substâncias, e não está limitado a apenas a LPS.
Protocolo
Todos os experimentos com animais foram aprovados pelo Animal Care Vanderbilt University Institucional e Comitê de uso.
1. Preparando Ratos transgênicos
- Ratinhos fêmea, positivo para o (N-kB F-G-L uciferase FP) repórter NGL transgene (descrito anteriormente 1) são utilizadas para este procedimento. Quando as fêmeas são pelo menos 6 semanas de idade, eles acasalar com um macho tipo FVB selvagem. Harem criação podem ser utilizadas (até 4 fêmeas em uma gaiola com um macho). (Nota: ratos da estirpe FVB foram utilizados para o estudo ratos mais escuras, tais como da estirpe C57BL6 podem também ser usados,....
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Discussão
Aqui nós utilizamos um rato transgênico repórter NF-kB e uma técnica de injeção otimizado à mastite modelo, inflamação do tecido da mama mais comumente causada por infecção bacteriana. O passo mais importante neste processo é a injeção intraductal si.
Na prática, é normalmente aparente se a injecção intraductal tem sido bem sucedida. A injecção dos agentes (LPS ou PBS) deve sentir-se fluido e não deve haver pouca ou nenhuma resistência, como a seringa é esvaziado. A armadilha mais comum é o .......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pelo NIH concessão CA113734 concedido a F Yull e do Departamento de Assuntos de Veteranos (TS Blackwell).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Nome do reagente | Companhia | Número de catálogo | Comentários |
| Lipopolissacárido de Escherichia coli (LPS) | Sigma | L 2880 | sorotipo 055: B5 |
| PBS | Mediatech, Inc. | 46-013 CM- | |
| 31 seringa de insulina Calibre | Becton Dickinson | 328438 | Agulha curta |
| Fórceps | Instrumentos de Precisão mundo | 15908 | |
| Dissecando escopo | Leica | M3Z | |
| Terrell isoflurano, USP | MINRAD INC para Rx Elite | NDC 66794-011-25 | |
| IVIS 200 sistema de imagem | Caliper (anteriormente Xenogen) | N / A | |
| Seringa de injecção de luciferina | Becton Dickinson | 309597 | 1cc; 26G5 / 8 |
| D-luciferina Firefly, monohidrato de sal de sódio (Substrato luciferina) | Química e Biologia Biosynth | L-8240 | Diluir a 10 mg / ml |
Referências
- Everhart, M. B., Han, W., Sherrill, T. P., Arutiunov, M., Polosukhin, V. V., Burke, J. R., Sadikot, R. T., Christman, J. W., Yull, F. E., Blackwell, T. S. Duration and intensity of NF-κB activity determine the severity of endotoxin-induced acute lung injury. The Journal of Immunology. 176, 4995-5005 (2006).
- Notebaert, S., Carlsen, H., Janssen, D., Vandenabeele, P., Blomhoff, R., Meyer, E.
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Reimpressões e permissões
