Este artigo descreve um método para a visualização de artérias cerebrais de rato através de uma janela craniana via craniectomia temporal, a fim de visualizar partes proximais da artéria cerebral média ( Figura 1). Este método versátil, pode ser combinada com várias técnicas de administração de fármacos para medir a reactividade da artéria cerebral In vivo.
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Artigo de método
Utilizando uma janela craniana para Visualizar a artéria cerebral média Durante endotelina 1 Induzida por oclusão da artéria cerebral média
Neste artigo
Resumo
Resumo
Criação de uma janela craniana é um método que permite a visualização directa das estruturas sobre a superfície cortical do cérebro 1-3. Esta técnica pode ser realizada em diversos locais do cérebro de rato que se sobrepõem, mas é mais facilmente realizado através da criação de uma craniectomia sobre os ossos de fácil acesso frontal ou parietal. Mais frequentemente, temos usado esta técnica, em combinação com o modelo de oclusão endotelina-1 na artéria cerebral média de AVC isquémico para quantificar as alterações no diâmetro dos vasos da artéria cerebral média, que ocorrem com a injecção de endotelina-1 para o parênquima cerebral adjacente ao MCA proximal 4, 5. A fim de visualizar a porção proximal da MCA, durante endotelina -1 induzida MCAO, usamos uma técnica para criar uma janela craniana no osso temporal na face lateral do crânio de rato (Figura 1). Artérias cerebrais pode ser visualizada quer com a dura intacta ou com a dura-máter e incisa RetraCTED. Mais comumente, deixamos a dura intacta durante a visualização desde a endotelina-1 induzida por MCAO envolve a entrega do péptido vasoconstritor para o parênquima cerebral. Isto evita a necessidade de incisão na dura directamente sobre os vasos visualizado para a entrega da droga. Este protocolo irá descrever como criar uma janela craniana para visualizar artérias cerebrais de uma forma faseada, bem como a forma de evitar muitas das armadilhas potenciais referentes a este método.
Protocolo
Este protocolo foi aprovado pelo Animal Care Institucional e Comitê de Uso (IACUC) da Universidade da Flórida e está em conformidade com o "Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório" (oitava edição, a National Academy of Sciences, 2011).
Materiais
- Animais: Oito semanas de idade, macho, Sprague Dawley (Farms Charles River, Wilmington, MA, EUA) pesando 250-300 g no momento da cirurgia.
- Anestesia
- Sistema de anestesia por inalação (VetEquip Inc., Pleasanton, CA, EUA)
- Anestésico isoflurano (Baxter Farmacêutica, em Deerfield, Illinois, EUA)
- Estereotáxico sistema....
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Resultados
As imagens fixas tiradas do programa de vídeo captada que a mudança de diâmetro da artéria cerebral após a injecção de ET-1 pode ser facilmente observado utilizando esta técnica janela craniana (Figura 2). Poucos minutos após a injeção de ET-1, o navio começará a se contrair. Eventualmente, os vasos será difícil de visualizar o tecido cerebral e irá tornar-se clara. Após cerca de 20 min os efeitos de ET-1 irá diminuir e os vasos começará a dilatar gradualmente voltando ao diâmetro de linha de base, após.......
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Discussão
Em resumo, esta técnica de preparação de janela craniana é muito versátil uma vez que podem ser alterados para satisfazer as necessidades das várias experiências com pequenas modificações, 4, 5. Por exemplo, conseguimos monitorado o fluxo sanguíneo cerebral em ramos específicos MCA usando a dopplerfluxometria a laser para se concentrar diretamente em uma artéria cerebral visualizado através de uma janela de crânio (Meca AP 2009 e 2011). Além disso, uma preparação semelhante com a incisão dura pode ser utiliza.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado por doações do American Heart Association Maior filial Sudeste (09GRNT2060421), a Associação Médica Americana, e da Universidade da Flórida Clínica e Translacional Science Institute. Adam Meca é um NIH / NINDS, companheiro NRSA predoctoral (F30 NS-060335). Robert Regenhardt recebeu apoio comunhão predoctoral da Universidade da Flórida Programa de Formação Multidisciplinar em Hipertensão (T32 HL-083810).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Nome do reagente | Companhia | Número de catálogo | Comentários (opcional) |
| Sistema de anestesia por inalação | VetEquip Inc., Pleasanton, CA, EUA | 901806 | |
| Anestésico isoflurano | Pharmaceutics Baxter, Deerfield, IL, EUA | 1001936060 | |
| Sistema estereotáxico de pequenos animais | David Kopf Instruments, Tujunga, CA, EUA | 900 | |
| Não-ruptura barras de ouvido de ratos, | David Kopf Instruments, Tujunga, CA, EUA | 957 | |
| Rat gás suporte da cabeça anestesia | David Kopf Instruments, Tujunga, CA, EUA | 1929 | |
| BAT-12 termômetro microssonda | Precisão mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA | BAT-12 | |
| T / BOMBA, manta térmica | Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, NY, EUA | T / BOMBA, TP600 | |
| Metzenbaum Tesoura | Precisão mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA | 501254 | |
| Iris fórceps | Precisão mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA | 15915 | |
| Afastadores bulldog braçadeira | Precisão mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA | 14119-G | |
| Seringa de 10 ul de 26 gaugue | Precisão mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA | SGE010RNS | |
| Bovie, kit cautério alta temperatura | Precisão mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA | 500392 | |
| Dente rato fórceps 0,12 | Stotz | E1811 | |
| Broca Micromotor | Stoelting,Wood Dale, IL, EUA | 51449 | |
| 0,8 broca de perfuração milímetros rodada | Roboz Surgical Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, EUA | RS-6280C-1 | |
| STORZ Bonn sutura fórceps | Bausch e Lomb, Inc., Rochester, NY, EUA | ||
| Nylon de sutura, de tamanho 3,0 | Oasis, Mettawa, IL, EUA | MV-663 | |
| Cotonetes | Fisher Scientific, Pittsburg, PA, EUA | 22-029-488 | |
| Puralube pomada | Fisher Scientific, Pittsburg, PA, EUA | NC0138063 | |
| Elétrica de cortar cabelo | Oster, Providence, RI, EUA | 78005-301 | |
| ET-1 diluído a 80 μ M de concentração em PBS | American Peptide, Sunnyvale, CA, EUA | 88-1-10A | |
| Clorexidina, 2% | Agrilabs, St. Joseph, MO, EUA | 1040, Rev. 6-06, NAC n º: 10580322 | |
| Microscópio cirúrgico | Seiler Instrumento e Manufatura, St. Louis, MO, EUA | Evolução XR6 | |
| Sony Handycam | Sony, Minato, Tokyo, Japão | HDR-SR12 | |
| Iluminador de fibra óptica | TechniQuip Corp, Livermore, CA, EUA | FO1-150 | |
| VLC Media Player | (Paris, França) | ||
| Image J software | EUA National Institutes of Health, Bethesda, MA, EUA |
Referências
- Levasseur, J. E., Wei, E. P., Raper, A. J., Kontos, A. A., Patterson, J. L. Detailed description of a cranial window technique for acute and chronic experiments. Stroke. 6, 308-317 (1975).
- Baumbach, G. L., Dobrin, P. B., Hart, M. N., Heistad, D. D. Mechanics of cerebral arterioles in hype....
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Reimpressões e permissões
