Abstract
Leveren har en stor evne til at regenerere. Hepatocytter de parenchymale celler i leveren, kan regenerere på en af to måder: hepatocyte- eller biliær-driven leverregenerering. I hepatocyt-drevet lever regenerering er regenererende hepatocytter stammer fra allerede eksisterende hepatocytter, der henviser til, galde-drevet regeneration, er regenererende hepatocytter stammer fra biliære epithelceller (BECs). For hepatocyt-drevet lever regenerering, der er fremragende gnaver modeller, der har bidraget væsentligt til den nuværende forståelse af liver regenerering. Findes ingen sådan gnavermodel men for galde-drevne liver regenerering. Vi har for nylig rapporteret om en zebrafisk leverskade model, hvor BECs udstrakt give anledning til hepatocytter ved alvorlig hepatocyt tab. I denne model er hepatocytter specifikt ablateres af en farmakogenetiske midler. Her præsenterer vi i detaljer metoder til at ablatere hepatocytter og analysere BEC-drevne lever regenereringsproces.Denne hepatocyt-specifikke ablation model kan yderligere bruges til at opdage de underliggende molekylære og cellulære mekanismer galde-drevne liver regenerering. Endvidere kan anvendes disse metoder til kemiske screeninger til identifikation af små molekyler, som styrker eller undertrykker leverregenerering.
Introduction
Leveren er et meget regenerativ organ. Under leverregenerering, regenererende hepatocytter, de parenchymale celler i leveren, er afledt af allerede eksisterende hepatocytter (hepatocyt-driven leverregenerering) eller BECs (galde-driven leverregenerering) 1,2. Leverskader normalt fremkalder spredning af allerede eksisterende hepatocytter; men når hepatocytproliferation er kompromitteret, kan BECs bidrage til hepatocytter 2-4. Disse to former for leverregenerering er klinisk signifikant. Efter kirurgisk fjernelse af en del af den humane lever (f.eks på grund af levertumorer og levende lever donorer), hepatocytter i leveren resterende prolifererer at genvinde det tabte leveren masse. Derimod hos patienter med alvorlige leversygdomme, hepatocytproliferation er stærkt kompromitteret, så BECs eller lever progenitorceller (LPCs) synes at bidrage til regenererende hepatocytter 5,6. Gnaveren 2/3 partiel hepatektomi model, hvorhepatocytter formere at genvinde den tabte leveren masse, væsentligt har bidraget til den nuværende forståelse af hepatocyt-drevne liver regenerering 7,8. Der er imidlertid ingen gyldig gnaver model, hvor regenererende hepatocytter hovedsageligt afledt af BECs. Selv om flere gnaver lever toksin modeller førte til identifikation af galde-driven leverregenerering 2-4, seneste afstamningsceller opsporing undersøgelser i mus indikerer en minimal bidrag BECs til regenererende hepatocytter i disse modeller 9,10. Nogle af de gnaver leverskade modeller, herunder partiel hepatektomi 11-13 og acetaminophen-induceret leverskade 14,15, er blevet anvendt på zebrafisk og førte til identifikation af hidtil ukendte gener eller veje impliceret i leverregenerering. Imidlertid hepatocyt-drevet, men ikke BEC-drevet, forekommer leverregenerering i disse zebrafisk leverskader modeller. Derfor er en ny leverskade model, hvor BECs udstrakt bidrage til regenerating hepatocytter er nødvendig for en bedre forståelse af BEC-drevne liver regenerering.
De overordnede mål for hepatocyt ablation modellen beskrevet her, er (1) til at generere en leverskade model, hvor BECs udstrakt bidrage til regenererende hepatocytter, og (2) belyse de molekylære og cellulære mekanismer bag BEC-drevet liver regenerering. Vi antager, at alvoren af skaden bestemmer tilstanden af lever regenerering; Således har vi forudså, at galde-driven leverregenerering vil initiere ved alvorlig hepatocyt skade. For at teste denne hypotese, udviklede vi en zebrafisk leverskade model ved at generere en transgen linie, Tg (fabp10a: CFP-NTR) s931, at stærkt udtrykker bakteriel nitroreduktase (NTR) fusioneret med cyan fluorescerende protein (CFP) under hepatocyt-specifik fabp10a promotoren. Siden NTR omdanner ikke-toksisk prodrug, metronidazol (Mtz) til et cytotoksisk lægemiddel, det ablaterer kun den planlagte NTR-udtrykkende celler 16-18, i dette tilfælde, hepatocytterne. Ved at manipulere varighed Mtz behandling, kan omfanget af hepatocyt ablation styres. Ved hjælp af denne model, vi for nylig rapporteret, at efter alvorlige hepatocyt tab, BECs udstrakt give anledning til regenererende hepatocytter 19, som blev yderligere bekræftet af to andre uafhængige undersøgelser 20,21. Derfor, sammenlignet med den førnævnte gnaver og zebrafisk leverskader modeller, vores hepatocyt ablation model er mere fordelagtig til at studere BEC-drevet leverregenerering.
Denne protokol beskriver proceduren for at udføre liver regenerering eksperimenter ved hjælp af zebrafisk hepatocyt ablation model. Denne model vil være passende til at bestemme mekanismerne bag galde-drevet lever regenerering og til kemiske skærme at identificere små molekyler, der kan undertrykke eller forøge lever regenerering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Zebrafisk blevet rejst og opdrættet i henhold til standard procedure; eksperimenter blev godkendt af University of Pittsburgh Institutional Animal Care og brug Udvalg.
1. Fremstilling af Embryoner / larver
- At gennemføre tidsindstillede parringer, oprettet voksne mandlige og kvindelige Tg (fabp10a: CFP-NTR) s931 hemizygote eller homozygote fisk O / N og placere en skillevæg mellem dem. Fjern denne divider den følgende morgen, når parring er ønsket. Saml embryoner ved at belaste vandet ved hjælp af en fin plastik mesh si.
- Vend sien på hovedet og skyl masken overfladen med en fin strøm af æg vand dispenseres fra en squeeze flaske. Overfør 100 embryoner i en 100 mm petriskål med 25 ml af æg vand. Hold ikke mere end 100 embryoner pr petriskål og hæve dem ved 28 ° C.
- At hæmme pigmentering, tilføje phenylthiourea (PTU) ind i petriskåle før 10 timer efter befrugtningen (HPF), og hæve embryos / larver indtil 80 HPF. Slutkoncentrationen af PTU er 0,2 mM. ADVARSEL: PTU er giftigt. Anvendelse i overensstemmelse med passende retningslinjer for håndtering.
- Anesthetize larver ved tilsætning af 3-amino benzoesyreethylester (tricaine) ved en slutkoncentration på 0,016%, i petriskåle. Derefter, under anvendelse af et epifluorescensmikroskop, sortere CFP-positive larver. Brug larver med en lignende leverstørrelse og kassér dem med en mindre eller større leveren.
BEMÆRK: enhver CFP-positive larver, uanset intensitet, kan anvendes, fordi der ikke er nogen forskel i omfanget af hepatocyt ablation mellem hemizygote og homozygot larver. ADVARSEL: tricaine er giftigt. Anvendelse i overensstemmelse med passende retningslinjer for håndtering. - Fjerne ægget vand indeholdende tricaine og tilsæt æg vand suppleret med 0,2 mM PTU. Hold embryoner / larver ved 28 ° C.
2. Mtz Behandling
- Forbered frisk 10 mM Mtz løsning ved at opløse 0,171 g Mtz pulver i 100 ml æg vand suppleret med 0,2% DMSO og 0,2 mM PTU. For at opløse Mtz, blande opløsningen ved stuetemperatur under hurtig omrøring i 20-30 minutter. For at hjælpe opløse Mtz og styrke Mtz gennemtrængning ind i larverne, tilsæt DMSO ved udarbejdelsen Mtz. ADVARSEL: langvarig eksponering eller øget koncentration af Mtz er giftigt. Anvendelse i overensstemmelse med passende retningslinjer for håndtering.
- Adskil larver i kontrol- og forsøgsgrupper ved at overføre det ønskede antal larver i to forskellige 100 mm petriskål eller multi-brønds plade. For forsøgsgruppen, holder larverne i 10 mM Mtz opløsning; for kontrolgruppen, holde dem i æg vand indeholdende 0,2% DMSO.
- Dække pladerne eller petriskåle indeholdende Mtz løsning med aluminiumfolie for at forhindre foto-inaktivering af Mtz, og der inkuberes ved 28 ° C. Varigheden af Mtz behandling afhænger larvestadiet og den transgene linje.
- At observere lignende alvorlige hepatocyt ablation i
3. Analyse af Biliær drevet Liver Regeneration
- Ved slutningen af den periode ablation, fjern Mtz opløsningen fra pladerne. Vask Mtz-behandlede larver ved tilsætning af 25 ml vand æg. Swirl pladen 2-3 gange for at vaske larverne før kassere ægget vand. Gentag tre gange og derefter fordybe larverne endnu en gang i æg vand. At undgå hjerte ødem og larvernes død i Mtz-behandlede larver, tilføje en lavere koncentration af tricaine, ved en slutkoncentration på 0,008%, for at immobilisere larver.
- For lever analyse, undersøge leveren størrelse Mtz-behandlede larver under en epifluorescensmikroskop med den fælles fiskeripolitik filteret. Vurdere hepatocyt ablation niveauer baseret på det relative leverstørrelse: stor (ikke-ablateret; 0-10% larver), medium (delvist ablateres; 10-20%), og meget lille (fuldt ablateres; 80-90%).
- Fjern larverne med ikke-ablaterede eller delvist ablerede lever. Kun holde larver med en lille leveren, som er indikativ for alvorlig hepatocyt ablation. For lever analyse på regenerering 0 hr tidspunkt (R0h), høste larverne efter Mtz udvaskning og sortering fælles fiskeripolitik. Ellers holder sorteres larver i æg vand suppleret med 0,2 mM PTU indtil den er klar til høst.
- Overfør høstet larver i et 1,5 ml mikrocentrifugerør og erstatte æg vand med fiksering opløsning af 3% formaldehyd i PEM-puffer. Inkubér røret på en rotator O / N ved 4 ° C.
- Erstatte fiksering opløsning med 1 ml PBSDT og rotere røret med larver på rotator i 5 min.
- Overfør det faste larver i en 100 mm petriskål indeholdende PBSDT og ved hjælp af pincet, manuelt at fjerne æggeblomme og brystfinner under et dissektionsmikroskop. Overføre op tp 20 dissekeret larver i et 1,5 ml rør. <li> Erstat PBSDT opløsning med 1 ml blokeringsopløsning og rock røret på en rotator ved stuetemperatur i 2 timer.
- Erstat blokerende opløsning med 100 pi blokeringsopløsning indeholdende primære antistoffer. Langsomt klippe røret på en rotator O / N ved 4 ° C.
- Fjern det primære antistof-opløsning og vask med PBSDT 5 gange i 10 minutter hver gang. Derefter tilsættes 100 ul blokerende opløsning indeholdende sekundære antistoffer og rock det på en rotator ved stuetemperatur i 2 timer.
- Vask 5 gange med PBSDT i 10 min hver gang ved RT ved vuggende på en rotator.
- Orientere larverne sideværts på et objektglas og tilsæt en dråbe montering medier. Dække dem forsigtigt med et dækglas og forsegle låget glas med et søm poler. Nu, er den klar til konfokal mikroskopi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
MTZ behandling i 36 timer (A36h, A står for ablation) 3,5-5 dpf dramatisk reduceret leverstørrelse (figur 1B). Efter Mtz udvaskning, betragtes som begyndelsen på leveren regenerering (R), stærk fabp10a: CFP-NTR og fabp10a: dsRed udtryk genopstod inden for 30 timer (figur 1B). Den intrahepatisk galde netværk, som vurderet ved ekspression af Alcam som er til stede i membranen af BECs 22, oprindeligt kollapsede men blev genoprettet ved 54 timer efter udvaskning (R54h) (figur 1C). Disse data indikerer, at leveren regenerering og genvinding hurtigt forekomme i vores leverskade model.
Figur 2 viser, regenererende hepatocytter er afledt af BEC. Tg (Tp1: H2B-mCherry) S939 linje udtrykker et nukleart rødt fluorescerende protein under kontrol af et element indeholdende 12 RBP-Jĸ bindingssteder 23. Denne Notch Responsive element synes at drive genekspression udelukkende BECs i leveren 24; det er imidlertid muligt, at det driver genekspression i LPCs fordi Notch signalering er tæt forbundet med de LPCs 25. Derfor er denne transgene linje muliggør let påvisning af BEC, og sandsynligvis LPC, kerner. Endvidere den udvidede stabilitet af H2B-mCherry fusionsprotein tillader kortsigtet afstamning sporing. Mest H2B-mCherry + celler i regenererende lever på R0h udtrykte Hnf4α (figur 2A), som udtrykkes i hepatocytter, men ikke i BECs, i kontrolgruppen leveren. Hepatocytter, som vurderet af fabp10a: CFP-NTR udtryk på R48h stadig bevaret Tp1: H2B-mCherry ekspression (figur 2B, pile). Disse data viser BEC konvertering til hepatocytter upon alvorlig hepatocyt tab, som blev yderligere bekræftet af permanent afstamning sporing 19.
Figur 1. En zebrafisk leverskade model. (A) Ordning illustrerer perioder af Mtz behandling og lever regenerering. (B) 36 timers Mtz behandling stærkt reduceret lever- størrelse og fabp10a: fælles fiskeripolitik og fabp10a: dsRed fluorescens ved R0h; Men stærk fælles fiskeripolitik og dsRed fluorescens genopstod på R30h. Pile peger til leveren (li). (C) Konfokal projektion udsigt over hele leveren immunfarvet med anti-ALCAM antistoffer, mærket BECs. Den intrahepatisk galde netværk blev kollapsede på R0h men hurtigt genetableret på R54h. Stiplede regioner skitsere leveren. Scale barer:. 100 (B), 20 (C) um Klik her for at se en større version af dette tal.
_upload / 52785 / 52785fig2.jpg "/>
Figur 2. BECs giver anledning til hepatocytter upon alvorlig hepatocyt tab (A) Konfokal afbildningsregler i leveren viser Hnf4α (grøn) og Tp1:. H2B-mCherry (rød) ekspression på R0h. (B) Konfokale single-optisk sektion billeder, der viser fabp10a: CFP-NTR (grå) og Tp1: H2B-mCherry (rød) udtryk i leveren. mCherry ekspression blev afsløret af anti-mCherry immunfarvning. Bemærk den svage mCherry udtryk i kerner af FFP + hepatocytter (pile). Stærk mCherry + celler er BEC. Scale barer:. 20 pm Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Alvorlige, men ikke mild, hepatocyt ablation fremkalder galde-drevet leverregenerering. Derfor følgende Mtz behandling og udvaskning, er det vigtigt at undersøge leveren størrelse Mtz-behandlede larver, der kan vurderes ved iboende FFP fluorescens fra fabp10a: CFP-NTR transgen. Da en lille procentdel af Mtz-behandlede larver vil vise ikke-ablateret (0-5%) eller delvist ablated (10-20%) lever, er det vigtigt at sortere og kun analysere larver med en meget lille leveren, som indikerer alvorlig hepatocyt ablation.
Selv i vores protokol, behandlede vi zebrafisk larver med Mtz 3,5-5 dpf (en 36 timers behandlingsperiode), alternative stadier og varighed Mtz behandling er også mulige. F.eks larver behandlet mellem 5 og 6 dpf (en 24 hr behandlingsperiode) udviste også alvorlige hepatocyt ablation, svarende til den førnævnte 36 timers behandlingsperiode. To yderligere grupper uafhængigt genereretlignende fabp10a: NTR transgene linjer, og også rapporteret på processen med galde-drevne leverregenerering efter hepatocyt-specifik ablation. Hvorimod en gruppe behandlet larver med Mtz 6-7 dpf 21, en anden gjorde 3,5-4,5 dpf, nåede lignende konklusioner 20. Da hver fabp10a: NTR transgene linje kan udvise et andet niveau af NTR udtryk bør varigheden og dosering af Mtz behandling bestemmes separat for hver af de transgene linje anvendes. Det kan også være nyttigt at generere en transgen linje med en forbedret version af NTR-genet, hvori der indføres tre punktmutationer fører til en stigning i dets enzymatiske aktivitet 26. Denne mutant NTR vil resultere i en hurtigere ablation begivenhed end vildtype-NTR 26. Dette er særligt fordelagtigt når vildtype NTR kinetik kan begrænse muligheden for fuldstændig celle ablation på et ønsket tidspunkt.
Da hundredvis af larversamtidig kan undergå hepatocyt ablation, kan denne zebrafisk leverskade model anvendes på kemiske screeninger til identifikation af små molekyler, der kan undertrykke eller forøge biliær-driven leverregenerering. For eksempel ved anvendelse af denne model, Shin-gruppen ved Georgia Tech udført en kemisk skærm og fundet flere Wnt agonister og antagonister Notch, at den lettere leverregenerering 20. Vi udførte også en lille skala kemisk skærm og identificeret flere forbindelser, der kan undertrykke lever regenerering (SK, TYC, JS, og DS, som forberedelse).
Marker analyser i mennesker foreslog, at BECs kan bidrage til regenererede hepatocytter i den syge lever 5,6. Dr. Wanless 'gruppe nylig rapporteret, at en stor procentdel af parenkym i regression cirrose synes at være afledt fra LPCs / BECs i mennesker 27, hvilket indebærer betydningen af BEC-drevet leverregenerering ved cirrose regression. I betragtning af, at BEC hovedsageligtbidrage til de regenererende hepatocytter i zebrafisk leverskade model er beskrevet her, vil denne model være et uvurderligt værktøj til at bestemme de cellulære og molekylære mekanismer bag BEC-drevet liver regenerering. Forståelse sådanne mekanismer vil give betydelige indsigt i, hvordan at øge medfødte leverregenerering hos patienter med alvorlige leversygdomme. Endvidere, i kombination med kemiske skærme kan denne zebrafisk model være nyttig til at identificere en potentielt lægemiddel, der kan lette medfødte leverregenerering hos humane patienter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende finansielle interesser.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 3-amino benzoic acid ethyl ester (Tricaine) powder | Sigma-Aldrich | A5040 | Make 0.4% (15 mM) tricaine stock : Bring 0.4 g tricaine to 100 mL with egg water. Adjust to pH 7. |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D8418 | |
| Metronidazole | Sigma-Aldrich | M1547 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8532 | |
| Formaldehyde | Sigma-Aldrich | 252549 | |
| Calcium sulfate dihydrate | Sigma-Aldrich | C3771 | |
| N-Phenylthiourea (PTU) | Sigma-Aldrich | P7629 | |
| Mounting media (Vectashield) | Vector Laboratories | H-1000 | |
| 100 x 15 mm petri dish | Denville Scientific Inc. | M5300 | |
| clear nail polish | Fisher Scientific | 50949071 | |
| fine forceps | Fine Science Tools | 11251-20 | Dumont #5 |
| glass slide | Fisher Scientific | 12-544-1 | |
| glass coverslip | Fisher Scientific | 12-540-A and 12-542-A | 18 x 18 mm |
| zn-5 (mouse anti-Alcam) | ZIRC | zn-5 | 1:10 dilution |
| goat anti-Hnf4a | Santa Cruz | sc-6556 (C-19) | 1:50 dilution |
| rat anti-RFP | Allele Biotechnology | ACT-CM-MRRFP10 | 1:300 dilution |
| AlexaFluor 647 AffiniPure Donkey Anti-goat IgG (H+L) | Jackson laboratories | 705-605-147 | 1:500 dilution |
| AlexaFluor 647 AffiniPure Goat Anti-mouse IgG (H+L) | Invitrogen | A21240 | 1:500 dilution |
| Cy3 donkey anti-rat IgG | Jackson laboratories | 712-165-150 | 1:500 dilution |
| dissecting microscope | Leica Microsystems | S6F | |
| epifluorescence microscope | Leica Microsystems | M205FA | |
| confocal microscope | Carl Zeiss | LSM700 | |
| egg water | 0.3 g/L of sea salts ‘Instant Ocean’ and 0.5 mM CaSO4 in distilled water. |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10X PBS | 25.6 g Na2HPO4·7H2O, 80 g NaCl, 2 g KCl, 2 g KH2PO4. Bring to 1 L with distilled water. Adjust pH 7. Autoclave for 20 min at 121°C. | ||
| 1X PBSDT | 0.2% Triton X-100 and 0.2% DMSO in 1 X PBS. | ||
| PEM buffer | 30.2 g PIPES, 761 mg EGTA, 1 mM MgSO4. Bring to 1 L with distilled water. Adjust pH 7. | ||
| Blocking solution | Mix 1 ml of heat-inactivated horse serum with 9 ml of 1X PBSDT. |
References
- Riehle, K. J., Dan, Y. Y., Campbell, J. S., Fausto, N.
- Fausto, N., Campbell, J. S. The role of hepatocytes and oval cells in liver regeneration and repopulation. Mechanisms of Development. 120, 117-130 (2003).
- Duncan, A. W., Dorrell, C., Grompe, M. Stem Cells and Liver Regeneration. Gastroenterology. 137, 466-481 (2009).
- Michalopoulos, G. K. Liver regeneration: Alternative epithelial pathways. Int J Biochem Cell B. 43, 173-179 (2011).
- Falkowski, O., et al. Regeneration of hepatocyte 'buds' in cirrhosis from intrabiliary stem cells. Journal of hepatology. 39, 357-364 (2003).
- Yoon, S. M., et al. Epithelial Cell Adhesion Molecule (EpCAM) Marks Hepatocytes Newly Derived from Stem/Progenitor Cells in Humans. Hepatology. 53, 964-973 (2011).
- Michalopoulos, G. K.
- Michalopoulos, G. K. Liver Regeneration after Partial Hepatectomy Critical Analysis of Mechanistic Dilemmas. Am J Pathol. 176, 2-13 (2010).
- Yanger, K., et al. Adult hepatocytes are generated by self-duplication rather than stem cell differentiation. Cell stem cell. 15, 340-349 (2014).
- Schaub, J. R., Malato, Y., Gormond, C., Willenbring, H. Evidence against a Stem Cell Origin of New Hepatocytes in a Common Mouse Model of Chronic Liver Injury. Cell reports. 8, 933-939 (2014).
- Dovey, M., et al. Topoisomerase II alpha is required for embryonic development and liver regeneration in zebrafish. Molecular and cellular biology. 29, 3746-3753 (2009).
- Goessling, W., et al. APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development. Developmental Biology. 320, 161-174 (2008).
- Sadler, K. C., Krahn, K. N., Gaur, N. A., Ukomadu, C. Liver growth in the embryo and during liver regeneration in zebrafish requires the cell cycle regulator, uhrf1. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 1570-1575 (2007).
- Cox, A. G., et al. S-nitrosothiol signaling regulates liver development and improves outcome following toxic liver injury. Cell reports. 6, 56-69 (2014).
- North, T. E., et al. PGE2-regulated wnt signaling and N-acetylcysteine are synergistically hepatoprotective in zebrafish acetaminophen injury. Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 17315-17320 (2010).
- Curado, S., et al. Conditional targeted cell ablation in zebrafish: A new tool for regeneration studies. Developmental Dynamics. 236, 1025-1035 (2007).
- Pisharath, H., Rhee, J. M., Swanson, M. A., Leach, S. D., Parsons, M. J. Targeted ablation of beta cells in the embryonic zebrafish pancreas using E. coli nitroreductase. Mech Dev. 124, 218-229 (2007).
- Curado, S., Stainier, D. Y. R., Anderson, R. M. Nitroreductase-mediated cell/tissue ablation in zebrafish: a spatially and temporally controlled ablation method with applications in developmental and regeneration studies. Nat Protoc. 3, 948-954 (2008).
- Choi, T. Y., Ninov, N., Stainier, D. Y., Shin, D. Extensive conversion of hepatic biliary epithelial cells to hepatocytes after near total loss of hepatocytes in zebrafish. Gastroenterology. 146, 776-788 (2014).
- Huang, M., et al. Antagonistic interaction between Wnt and Notch activity modulates the regenerative capacity of a zebrafish fibrotic liver model. Hepatology. , (2014).
- He, J., Lu, H., Zou, Q., Luo, L. Regeneration of liver after extreme hepatocyte loss occurs mainly via biliary transdifferentiation in zebrafish. Gastroenterology. 146, 789-800 (2014).
- Sakaguchi, T. F., Sadler, K. C., Crosnier, C., Stainier, D. Y. Endothelial signals modulate hepatocyte apicobasal polarization in zebrafish. Curr Biol. 18, 1565-1571 (2008).
- Ninov, N., Borius, M., Stainier, D. Y. R. Different levels of Notch signaling regulate quiescence, renewal and differentiation in pancreatic endocrine progenitors. Development. 139, 1557-1567 (2012).
- Lorent, K., Moore, J. C., Siekmann, A. F., Lawson, N., Pack, M. Reiterative use of the notch signal during zebrafish intrahepatic biliary development. Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 239, 855-864 (2010).
- Itoh, T., Miyajima, A. Liver Regeneration by Stem/Progenitor Cells. Hepatology. 59, 1617-1626 (2014).
- Mathias, J. R., Zhang, Z., Saxena, M. T., Mumm, J. S. Enhanced cell-specific ablation in zebrafish using a triple mutant of Escherichia coli nitroreductase. Zebrafish. 11, 85-97 (2014).
- Stueck, A. E., Wanless, I. R. Regression of cirrhosis: The maturation sequence of buds arising from hepatocyte progenitor cells. Hepatology. 58, 235A (2013).
