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Artigo de método

Síntese de biocompatíveis cristal líquido de elastómero Espumas como andaimes celulares para cultura de células 3D espaciais

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DOI:

10.3791/55452

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11 de abril de 2017

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Neste artigo

Resumo

Este estudo apresenta uma metodologia para preparar 3D, andaimes, células do tipo espuma biodegradáveis ​​à base de elastómeros biocompatíveis cristal líquido de cadeia lateral (LCES). expericias de microscopia confocal demonstram que LCEs do tipo espuma para permitir a ligação de células, proliferação, e o alinhamento espontânea de mioblastos C2C12s.

Resumo

Aqui, nós apresentamos uma preparação passo-a-passo de um,, andaime célula semelhante a espuma biodegradáveis ​​3D. Estes suportes foram preparados por ligação cruzada bloco em estrela de co-polímeros caracterizam unidades de colesterol como grupos pendentes da cadeia lateral, resultando em esmética-A (SmA) elastómeros de cristais líquidos (LCES). andaimes do tipo espuma, preparados utilizando moldes de metal, apresentam microcanais interligados, tornando-as adequadas como suportes de cultura celular 3D. As propriedades combinadas da estrutura regular da espuma metica e do resultado elastómero num andaime célula 3D que promove a proliferação de células não só mais elevado em comparação com películas convencionais porosas de modelo, mas também uma melhor gestão de transporte de massa (isto é, nutrientes, gases, resíduos , etc). A natureza do molde de metal permite a manipulação fácil de formas de espuma (isto é, rolos ou películas) e para a preparação de andaimes de diferentes tamanhos de poros para diferentes estudos de células embora preservando a interconnected natureza porosa do molde. O processo de corrosão não afeta a química dos elastômeros, preservando a sua natureza biocompatível e biodegradável. Mostramos que essas LCEs esméticos, quando cultivadas por períodos de tempo extensos, permitem o estudo de construções de tecido clinicamente relevantes e complexos, promovendo o crescimento e proliferação de células.

Introdução

Existem vários exemplos de materiais sintéticos e biológicos biocompatíveis para aplicação em estudos de células e para a regeneração de tecidos com vista a fixação de células e proliferação de 1, 2, 3, 4, 5. Tem havido alguns exemplos de materiais biocompativeis, conhecidos como elastómeros de cristais líquidos (LCES), que poderiam responder aos estímulos externos com anisotrópica molecular encomendar 6, 7. LCEs são materiais estímulos-sensíveis q....

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Protocolo

NOTA: As etapas a seguir para a preparação do tipo espuma LCE 3D utilizando o copolímero em bloco em estrela 3-braço são mostrados na Figura 1. Para a caracterização de ressonância magnética nuclear (RMN), os espectros são registados em clorofórmio deuterado (CDCl3) à temperatura ambiente num instrumento Bruker DMX 400 MHz e internamente referenciadas picos residuais a 7,26. Transformação de Fourier espectro de infravermelho (FT-IV) são registados utilizando um Bruker Vector 33 FT-IR espectrómetro usando o modo de reflectância total atenuada. Para cada passo do seguinte protocolo, é importante usar roupas de proteção pessoal ....

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Resultados

Este relatório mostra o método de preparação de um LCE 3D poroso como um andaime para cultura de células utilizando um molde de metal de níquel. O 3D LCE obtido demonstra um complexa rede interligada canal que permite a infiltração de células fácil, bem como o transporte de massa mais adequado 27. Verificou-se que as células são capazes de penetrar completamente a rede de canais interligados e também é capaz de alinhar dentro do LCE. Aqui, uma espuma de metal de n.......

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Discussão

elastómeros líquidos cristalinos têm sido recentemente estudada como andaimes de células biocompatíveis, devido à sua capacidade de resposta estímulos. Eles têm provado ser plataformas ideais como andaimes celulares. No entanto, um factor importante a ter em mente quando preparar e projetar um novo andaime LCE é a porosidade. A incorporação de sólidos lixiviáveis 23 ou gases nem sempre resultar em porosidade homogénea ou poros totalmente interconectados. O uso de um modelo de metal que pode ser g.......

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Divulgações

Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

Os autores gostariam de agradecer Kent State University (bolsa de pesquisa colaborativa e apoio à Iniciativa Medicina Regenerativa na Universidade Estadual Kent - ReMedIKS) pelo apoio financeiro deste projecto.

....

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctiltrietoxissilanoAlfa AesarL16606Agente silanizante
2-bis(4-hidroxi-ciclohexil)propanoTCIB0928Reagente
2-clorohexanona Reagente Alfa AesarA18613
2-heptanona SolventeW254401Sigma Aldrich
 Sigma Aldrich278475Solvente
ácido 3-cloroperbenzóico, m-CPBASigma Aldrich273031 Reagente
4-dimetilaminopiridinaAlfa AesarA13016Reagente
4',6-diamidino-2-fenilindo, DAPI Mancha NuclearInvitrogenD1306
Ácido 5-hexinóico Alfa AesarB25132-06Reagente
Ácido acéticoVWR36289Solvente
AcetonaSigma Aldrich34850Álcool
Solvente 200 prova Grau ACS VWR71001-866Reagente
BenzenoAlfa AesarAA33290Solvente
ε-caprolactona AlfaAesar A10299-0EReagente
ClorofórmioVWRBDH1109Solvente
ColesterolSigma AldrichC8503Reagente
Óxido de cromo (VI)Sigma Aldrich232653Reagente
Iodeto de cobre (I)Strem Chemicals100211-060Reagente
D,L-Lactídeo Alfa AesarL09026Reagente
DiclorometanoSigma Aldrich320269Solvente
Diethyl ether Emd MilliporeEX0190Solvente
N,N-DimetilformamidaSigma Aldrich270547Solvente
Dulbecco' s meio Eagle modificado, DEME CORNING Cellgo10-013Cell Media
EtanolAlfa Aesar33361Solvente
Formaldeído SIGMA Life ScienceF8775Fixador
Fetal bovino sérum, FBS HyCloneSH30071.01de componente de mídia
, grau 415, qualitativo, crepeVWR28320Filtração
GlicerolSigmaAldrich G5516Nó central (3-braço)
Diisocianato de hexametileno, HDISigma Aldrich52649Reticulador
Cloreto de ferro(III) Alfa Aesar12357Agente de corrosão
Álcool isopropílicoVWRBDH1133 Solvente
MetanolAlfa AesarL13255
SolventeN,N'-diciclohexilcarbodiimidaAldrichD80002
SolventeN,N-DimetilformamidaSigma Aldrich270547 Solvente
Modelo de metal níquelAmerican ElementsNi-860Modelo de espuma
Neuroblastomas células (SH-SY5Y)ATCCCRL-2266Linha celular
Penicilina estreptomicina Thermo SCIENTIFIC15140122 Antibióticos
Polietilenoglicol 2000, PEGAlfa AesarB22181Reagente
Azida sódica VWR97064-646Reagente
Bicarbonato de sódioAMRESCO865Sal secante
Cloreto de sódioBDHBDH9286Sal secante
Fosfato de sódio dibásico heptahidratadoFisher ScientificS-374Sal secante
Fosfato de sódio monobásico monohidratadoSigma AldrichS9638Sal secante
Sulfato de sódioSigma Aldrich239313Sal de secagem
TetrahidrofuranoAlfa Aesar41819Solvente
Tiossulfato de sódioAMRESCO393Sal de secagem
Estanho (II) 2-etilhexanoatoAldrichS3252Reagente
ToluenoAlfa Aesar22903Solvente
TrietilaminaSigma Aldrich471283Reagente
TrypsinHyCloneSH30042.01Cell Detachment
Olympus FV1000
2-propanol Papel de filtro

Referências

  1. Khor, E., Lim, L. Y. Implantable applications of chitin and chitosan. Biomaterials. 24 (13), 2339-2349 (2003).
  2. Chung, H. J., Park, T. G. Surface engineered and drug releasing pre-fabricated scaffolds for tissue engineering. Adv. Drug Deliv. Rev. 59

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Reimpressões e permissões

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