Summary
Denne protokol fokuserer på kvantitativ analyse af neuronal dendritiske arborization kompleksitet (NDAC) i Drosophila, som kan bruges til undersøgelser af dendritiske morfogenese.
Abstract
Dendritter er de forgrenede fremspring af en neuron, og dendritiske morfologi afspejler synaptic organisation under udviklingen af nervesystemet. Drosophila larve neuronal dendritiske arborization (da) er en ideel model for at studere morfogenese af neurale dendritter og genfunktion i udviklingen af nervesystemet. Der er fire klasser af da neuroner. Klasse IV er den mest komplekse med en forgrening mønster, der dækker næsten hele området af larve kroppen væggen. Vi har tidligere karakteriseret effekten af silencing Drosophila ortholog af SOX5 på klasse IV neuronal dendritiske arborization kompleksitet (NDAC) ved hjælp af fire parametre: længden af dendritter, overfladearealet af dendrit dækning, de samlede antal filialer, og den forgrening struktur. Denne protokol udgør arbejdsgangen NDAC kvantitativ analyse, bestående af larve dissektion, Konfokal mikroskopi og billede analyse procedurer ved hjælp af ImageJ software. Yderligere indblik i da neuronal udvikling og dens underliggende mekanismer vil forbedre forståelsen af neuronal funktion og give et fingerpeg om de grundlæggende årsager til neurologiske og nervesystemets udvikling.
Introduction
Dendritter, som er de forgrenede projektioner af en neuron, dækker det område, der omfatter de neuron sensoriske og synaptic input fra andre neuroner1,2. Dendritter er en vigtig komponent i synapse dannelse og spille en kritisk rolle i integration af synaptic indgange, samt formerings elektrokemiske stimulering i en neuron. Dendritiske arborization (da) er en proces, hvorved neuroner danner nye dendritiske træer og grene til at oprette nye synapser. Udvikling og morfologi af da, såsom filialtæthed og gruppering mønstre, skyldes en multi-step biologiske processer og er stærkt korreleret til neuronal funktion. Målet med denne protokol er at tilvejebringe en metode til kvantitativ analyse af neuronal dendritric arborization kompleksitet i Drosophila.
Kompleksiteten af dendritter bestemmer synaptic typer, tilslutningsmuligheder og indgange fra partner neuroner. Forgrening mønstre og tætheden af dendritter er involveret i behandlingen af de signaler, der konvergerer på dendritiske felt3,4. Dendritter har fleksibilitet for justering i udvikling. For eksempel, har synaptic signalering en effekt på dendrit organisation i den somatosensoriske neuron under den udviklingsmæssige fase og i den modne nervesystem5. Etablering af neuronal connectivity afhængig af morfogenese og modning af dendritter. Misdannelse af dendritter er forbundet med nedsat neuronal funktion. Undersøgelser har vist, at abnormitet af da neuron morfogenese kan bidrage til etiologies af flere neurodegenerative sygdomme, herunder Alzheimers sygdom (AD), Parkinsons sygdom (PD), Huntington's chorea (HD), og Lou Gehrig sygdom / Amyotrofisk lateral sklerose (ALS)6,7,8. Synaptic ændringer vises i den tidlige fase af annonce, i koncert med forfald og forringelse af neuron funktion7,8. Detaljerne i hvordan dendrit patologi bidrager til patogenesen i disse neurodegenerative sygdomme er imidlertid fortsat undvigende.
Udviklingen af dendritter er reguleret af gener, der koder et komplekst netværk af tilsynsmyndigheder, som familien Wnt proteiner9,10, transkriptionsfaktorer og ligander på celle overfladen receptorer11,12 . Drosophila da neuroner består af fire klasser (klasse I, II III, IV), af hvilken klasse IV da neuroner har de mest komplekse forgrening mønstre og er blevet ansat som et stærkt eksperimenterende system for bedre forståelse morfogenese13, 14. Under tidlige morfogenese, overekspression og/eller RNAi hæmning af gener i klasse IV da neuroner resulterer i ændringer i forgrening mønstre og dendrit beskæring13. Det er vigtigt at udvikle en praktisk metode til kvantitativ analyse af de neuronale dendritiske arborization.
Vi har tidligere vist, at hæmning af Drosophila ortholog af SOX5, Sox102F, førte til kortere dendritter da neuroner og reduceret kompleksitet i klasse IV da neuroner15. Vi præsenterer her, af proceduren med kvantitativ analyse for neuronal dendritiske arborization kompleksitet (NDAC) i Drosophila. Denne protokol, tilpasset fra den tidligere beskrevne metode, giver en kortfattet metode til at analyse udviklingen af da sensoriske neuroner. Det illustrerer robust billede mærkning og da neuron i den tredje instar larve kroppen væggen16,17,18,19. Det er en værdifuld protokol for forskere, der ønsker at undersøge NDAC og udviklingsmæssige forskelle i vivo.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. eksperimentel forberedelse
- Forbered de følgende reagenser: Dulbeccos fosfatbufferet saltopløsning (PBS); Triton X-100; 0,2% PBST (PBS + 0,2% Triton X-100); 32% PARAFORMALDEHYD (PFA), fortyndet til 4% før brug; silikoneelastomer base og hærder; antifade montering medium (f.eks, forlænge guld); og Fingernegl polish.
- Forberede følgende udstyr: dissektion mikroskop, to skarpe pincet og en saks til microdissection, en række stifter til microdissection, en petriskål dissektion parabol, objektglas og coverslips, en Konfokal mikroskop, og en computer med Fiji ImageJ software installeret.
2. larver samling
- Mate UAS-Sox102F-RNAi fluer med UAS-normal god landbrugspraksis, ppk-GAL4 eller W1118 vildtype fluer, henholdsvis. Kultur fluer i standardbetingelser ved 25 ° C.
- ~ 5-6 dage, indsamler tredje instar larver af UAS-Sox102F-RNAi / ppk-GAL4, UAS-normal god landbrugspraksis eller UAS-normal god landbrugspraksis og ppk-GAL4 / + kontrol omhyggeligt med pincet til dissektion.
3. dissektion af larver
Bemærk: Alle procedurerne i dette afsnit drives under et mikroskop for microdissection. Forstørrelsen er op til efterforskerne. Prøv at justere til den optimale syn visning. ~ 4-6 X forstørrelse anbefales.
- Placer en larve på en dissektion parabol lavet af silikoneelastomer base og en vævskultur petriskål.
- PIN larve munden krog for at tillade den dorsale side til ansigt, og derefter pin halen af larve. Læg den dorsale side i midten så meget som muligt at afsløre midterlinjen, som vil være åben-up markør.
- Tilføje 200 µL af PBS til larve til at bevare kroppen fugt.
- Gøre et klip med en saks langs svinekroppens midterlinje mellem de to tracheas fra caudale til rostralt. Gør et lille snit på hver af de fire hjørner af larve kroppen.
- Placer en pin på hver af de fire hjørner af kroppen, så kroppen ligger fladt.
- Fix larve kroppen væggen i 4% PFA i 25 min ved stuetemperatur.
- Vaske i PBST i 5 min. Gentag to gange mere.
- Fjerne benene fra vævet. Derefter overføre vævet diaset et glas, dække med antifade montering medium, og monter med en cover slip. Air tørre i 1 h og forsegle kanterne med Fingernegl polish.
4. billedbehandling forarbejdning
Bemærk: Billeder taget ved hjælp af en omvendt Konfokal mikroskop system. Brugeren kan fotografere Prøven ved hjælp af en 20 X mål (anbefales).
- Fange Z-serie billeder. Åbn dialogboksen "Fange Z-serien" i Konfokal mikroskop software. Bestemme intervallet for fanger Z serie billeder.
- Klik på knappen "Top og bund". Bestemme den øverste og nederste position og input værdier til "bunden:" og "Top:" bokse. Sætte "Skridt" i "Fange Z-serien" dialogboksen som 0,5 µm. Klik på "Kør nu" knappen for at erhverve Z-serie billeder.
- Gem de fremkomne billeder som *.tiff eller *.nd2-filer.
- Gemme diasene i et mørkt indehaveren ved 4 ° C efter billeddannelse.
5. dendrit evaluering
Bemærk: Normal god landbrugspraksis protein var co-overexpressed i UAS-normal god landbrugspraksis og ppk-GAL4 flyver i da neuroner for normal god landbrugspraksis fluorescens imaging analyse. Længde, filialer og struktur af da neuroner i de tredje instar larver var kvantificeret. Analyseparametre omfatter længden af dendritter (µm), areal (µm2), antallet af filialer og forgrening struktur (%). Figur 1 viser analyseparametrene i detaljer.
-
Længden af dendritter
Bemærk: Længden af dendritter er summen af alle dendritter mærket i tracer plugin.- Setup og køre Fiji ImageJ (https://fiji.sc/)20 software. Derefter opdeles billeder i separate kanaler, hvis der er flere kanaler af billeder.
NOTE: Billedet i denne protokol har kun én kanal af normal god landbrugspraksis. - Kør "billede | Stakke | Z projekt"at få en Z projektion; et nyt vindue vises med navnet "Z-projektion." Klik på "max intensitet" for projektion type og organisere tal mellem start skive og stop skive alt efter individuelle præferencer. Klik på "OK". En Z-projektion billede vises præsenterer dendrit projektion klart.
- Spore neurites.
- Vælg "Plugins | Segmentering | Simple Neurites Tracer"i vinduet til at spore dendritter. Find neuron soma, og klik derefter på et punkt på en dendrit startende fra cellen organ og et andet punkt på spidsen af denne dendrit.
Bemærk: Programmet vil forbinde de to punkter med en blå streg. - Tryk på "Y" i vinduet plug-in, hvis stien er klart; dendrit stien spores indtil slutpunkterne for den valgte sti i de synlige billeder. Klik på "stien" på vinduet samme plugin; målgruppen er afsluttet (figur 2).
Bemærk: Nogle dendritter endte længere væk fra udgangspunktet, hvor vejen var opdelt i mindre segmenter. Segmenterne blev kombineret til at give en komplet sti til tracer.
- Vælg "Plugins | Segmentering | Simple Neurites Tracer"i vinduet til at spore dendritter. Find neuron soma, og klik derefter på et punkt på en dendrit startende fra cellen organ og et andet punkt på spidsen af denne dendrit.
- Efter en sti er fuldført, gå tilbage til et nyt punkt, hvor grenene. Den nye sti kan bygges på; boksen "Alle stier" vindue vil vise længde værdier af alle stier (figur 3). Gem filen sporing, og fortsætte med ufærdige spor som vist i figur 2.
- Eksportere data dendrit længde ved at klikke på, "fil | Eksporter som *.cvs"i vinduet 'Plugin'. Derefter opsummere alle sti længder, og eksportere data til en data analyse/regneark software. (Figur 3).
- Setup og køre Fiji ImageJ (https://fiji.sc/)20 software. Derefter opdeles billeder i separate kanaler, hvis der er flere kanaler af billeder.
-
Areal af da neuroner
- Vælg værktøjet frihånds tegning i vinduet 'Fiji ImageJ'. Spore stien, og forbind slutpunkterne. Vælg menuen 'Analysere' "sæt målinger | Område." Klik på "foranstaltning" fra menuen 'Analysere'. Resultatet vises i en ny boks med værdi for området markeret (figur 4). Kopiere det til data analyse software.
-
Samlede antal af grene og forgrening struktur af da neuroner
- Beregn det samlede antal grene ved at åbne "Analyse" og derefter "Render | Analysere Skeletonized stier"i vinduet plugin for sporing (figur 5).
Bemærk: Strukturen af arbor er summen af niveauer af grene. Stien var defineret mellem cellen kroppen og dendrit tips, og én sti kan omfatte flere grene, som de primære Dorne er dendritter fra neuron cellen kroppen. De sekundære Dorne er grene fra primære og så videre med tertiær, kvaternære og kvinært Dorne. Struktur af dendrit forgrening er adskilt afhængigt niveauer af grene. For eksempel, er den primære % antallet af filialer opdelt af antallet af filialer, og så videre.
- Beregn det samlede antal grene ved at åbne "Analyse" og derefter "Render | Analysere Skeletonized stier"i vinduet plugin for sporing (figur 5).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Dendritter da neuroner var mærket af co-overekspression normal god landbrugspraksis (UAS-normal god landbrugspraksis, ppk-GAL4) i da neurale soma og dendritiske Dorne til normal god landbrugspraksis fluorescens imaging analyse. Morfologi af da neuron dendritter var afbildet af en inverteret Konfokal mikroskop (figur 2).
Dendritter da neuroner blev sporet ved hjælp af Fiji ImageJ software. Filen blev brugt til at estimere dendrit længde (figur 3). Hæmning af Sox102F i da neuroner (N = 21) (UAS-Sox102F-RNAi/ppk-GAL4; UAS-GFP) førte til en betydelig reduktion i antallet af dendritter og en kortere filial længde med en enklere struktur i forhold til kontrol (N = 20) (UAS-normal god landbrugspraksis; ppk-GAL4 / +) i den tredje instar larver (figur 6). Specifikt, fluer, hvor Sox102F blev bragt til stilhed udstillet en reduktion i gennemsnitlige dendrit længde til 127 µm i forhold til 249 µm i kontrolelementer (p = 0,02), og havde en mindre gennemsnitlig arbor areal 552,476 µm2 i forhold til 847,571 µm2 i kontrol (p = 0,04). Derudover hæmning af Sox102F resulterede i et mindre antal grene og en enklere forgrening struktur af Dorne med samlede grene af 17 (17.3 ± 6.7), sammenlignet med 28 (28.4 ± 9,5) i kontrolelementer (p = 0,04). Student t-test blev udført for at sammenligne forskelle mellem grupperne, og betydning var indstillet til 0,05.
Figur 1 : Skemaer af dendrit analyseparametre af Drosophila da neuron. Panelet (A) er den originale billede af en da neuron. (B) dendrit længde var gennemsnittet af alle dendrit længder i alle målte da neuroner. (C) da neuron dendrit areal blev manuelt defineret af ImageJ freehand værktøj. (D) denne skematiske viser, hvordan du tælle det samlede antal grene og analysere forgrening struktur af en da neuron. 1: primære arbor. 2: sekundær arbor. 3: tertiære arbor. 4: kvaternære arbor. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2 : Repræsentant sporing af en da neuron dendritter. En da neuron var afbildet med en Konfokal fluorescens mikroskop system. (A) den første sporing blev lavet med et startpunkt fra cellen organ og en dendrit endepunkt ved hjælp af værktøjet plugin/segmentering. Den blå linje (hvid pil) repræsenterer stien defineret. Efter at klikke på "ja" (rød pil), skifter linjen farve fra blå til rød. (B) at klikke på "Finish sti" det vises lilla (C). (A-C) Viser processen med at opspore en enkelt dendrit; (D) den komplette spores billede. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3 : Måling af vektoriserede stier. Billedet til venstre viser hvordan man kan måle spor stier efter løb den "analyse | Måle stier." Eksportere sti længde værdier til en regnearksfil og beregne summen af længden. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4 : Et eksempel på definere dendrit areal manuelt. En defineret billede blev opnået ved hjælp af værktøjet frihånd i menuen ImageJ vindue (vist med rød pil). Sæt målinger ved at vælge området. Kør funktionen "Foranstaltning" for at få området vist i det røde felt. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5 : Et eksempel på analyse af forgrening. Kør "Analysis_Render | Analysere Skeletonized stier"i vinduet"Segmentering"plugin. De gengivne stier og deres antal var opnået ved at vælge "Render alle stier | Få Resumé." Stien var defineret mellem cellen kroppen og dendrit tips, og én sti kan omfatte flere grene; for eksempel, var de primære Dorne dendritter fra neuron cellen kroppen; de sekundære Dorne var grene fra primære og så videre med tertiær, kvaternære og kvinært Dorne. Struktur af dendrit forgrening var adskilt afhængigt niveauer af grene. For eksempel, var primære % antallet af filialer opdelt af antallet af filialer, og så videre. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 6 : Repræsentative resultater af hæmning af Sox102F i da neuroner. Hæmning af Sox102F i da neuroner (UAS-Sox102F-RNAi/UAS-normal god landbrugspraksis, ppk-GAL4) førte til betydeligt reduceret dendrit længde og kortere forgrening med enklere struktur i den tredje instar larve i forhold til kontrol. Forskelle mellem Sox102F-RNAi fluer (UAS-Sox102F-RNAi/UAS-normal god landbrugspraksis; ppk-GAL4, N = 21) og kontrol (UAS-normal god landbrugspraksis; ppk-GAL4 / +, N = 20) fluer var på (A) dendrit længde (B) arbor areal (C) samlede antallet af filialer og (D, E ) forgrening struktur af da neuroner. Student T-test var perfomed for statistisk analyse. * Angiver Statistisk signifikans (p < 0,05). Fejllinjer er gennemsnit ± standardafvigelse. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Dendritter, der innerverer epidermis er regionerne input af neuroner, og deres morfologier bestemmer, hvordan oplysninger er modtaget og behandlet af individuelle neuroner. Udvikling dendrit morfologi afspejler gen graduering af dendrit organisation. Drosophila larve da neuron i det perifere nervesystem er en vigtig model til at studere dendrit udvikling på grund af: 1) til funktionel lighed med pattedyr11,12; 2) fire klasse udmærkelser baseret på dendrit struktur11,12; og 3) de genetiske faktorer, der regulerer morfogenese. I denne protokol præsenterer vi workflow fra larver forberedelse til billedanalyse af Drosophila da neuroner. Metoderne, der beskriver de fire vigtige parametre til at analysere dendritter i da neuroner i detaljer, som er længden af dendritter, areal, det samlede antal grene og forgrening struktur. Den kritiske trin var at fjerne så mange væv fra larve kroppen væggen som muligt til fuldt udsætte da neuroner til billedbehandling og analyser. Der kan være nogle korte grene afskære på grund af det begrænsede antal Z-projektion billeder. Da denne metode er den relativ måling af dendritter længde i forhold til kontrollen, tages et stort antal billeder for hver gruppe af da neuroner til at øge områderne dækning af Z-projektion billeder.
Drosophila klasse IV da neuroner har været genstand for forskning vedrørende dendrit arbor morfologi15,21,22,23. Morfogenese af dendritiske arbor udvikling kan forstyrres af tab eller gevinst på genfunktion, viser, at da neuron udvikling er følsomme over for genetiske ændringer24. Genetiske undersøgelser er det vigtigt at analysere morfologi præcist for at forstå dens indvirkning på da neuroner. Klasse IV da neuroner er kompleks, men stadig tilgængelig for høj kvalitet billeddannelse fordi de er placeret lige under semi-transparent kroppen væggen og gren, næsten udelukkende i to dimensionelle rum. Den dynamiske normal god landbrugspraksis fluorescens mærket da neuroner (ppk-GAL4; UAS-GFP) give en let visualiseret model til at undersøge neuronal udvikling. Retning af morfologi ændring varierer, dorne kan blive overbranched eller forenklet. Her, vi kategoriseret disse morfologiske ændringer af kvantitative parametre, fx dendrit længde, areal, det samlede antal grene og da neuroner forgrening struktur. Resultaterne afspejler svar i Sox102F udtryk om regulering neuronal udvikling, som vist i denne undersøgelse.
Vores protokol blev brugt til at vise de morfologiske ændringer af klasse IV da neuroner i fluer i som Drosophila ortholog af SOX5, Sox102F, var tavshed, der angiver en funktionel rolle for SOX5 i dendrit udvikling og morfogenese. Wnt proteiner er en familie af udskilles glykoproteiner, der har været impliceret i reguleringen dendrit morphogeneis. Wnt2 og Wnt7b fremme da og neuronal kompleksitet9,10. I Wnt kanoniske pathway, er denne aktivering efterfulgt af aktivering af GSK3β, en Serin-Threonin kinase, som igen aktiverer β-catenin medieret transskription10,25. Vi har tidligere fundet at hæmning af SOX5 i menneskelige SH-SY5Y neuroblastoma celler resulterede i en betydelig undertrykkelse af Wnt signaling aktivitet og reguleret udtryk for en række Wnt gener herunder en overekspression af GSK3β 15. Øget udtryk for GSK3β har været forbundet med hallmark egenskaber af annonce, herunder hukommelsestab, β-amyloid plager og unormal hyperphosphorylation af tau26. Hæmning af SOX5 øget GSK3β udtryk, som kunne tyde på en funktionel sammenhæng mellem SOX5 og GSK3β.
Klasse IV da neuroner har de mest komplekse dendrites af alle sensoriske neuroner. I denne protokol, har vi udviklet en metode til at analysere kompleksitet arbor og grene til abstrakte egenskaber af klasse IV da neuroner i Drosophila baseret på konventionelt tilgængelige plugins og software. Billeder, der blev taget fra en Konfokal mikroskop blev analyseret, og plugin segmenteringen af en enkel neurite tracer forudsat et ideelt værktøj til at spore dendrit grene27,28. Desuden giver denne kvantificering metode for den detaljerede analyse af dendrit kompleksitet ved at fremlægge nøgletal for forskellige niveauer af forgrener sig fra soma til de fjernere dendrit. Desuden kan denne metode bruges til at analysere andre klasser af da neuroner. For eksempel, klasse da neuroner udvide sekundære dendritter til den ene side af kroppen væggen; klasse II har bifurcating grene symmetrisk; og klasse III da neuroner har mere kompleksitet af forgrening og pigge. I sammendrag, har vi givet en protokol af billedbehandling og analyse af klasse IV da neuroner for neuronal dendrit analyser i Drosophila.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Vi vil gerne takke William A. Eimer for tænkelig teknisk bistand. Dette arbejde blev støttet af kur Alzheimers fond [til R.E.T], det nationale Institut for sundhed [R01AG014713 og R01MH60009 til R.E.T; R03AR063271 og R15EB019704 til A.L.], og National Science Foundation [NSF1455613 til A.L.].
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Phosphate buffered saline(PBS) | Gibco Life Sciences | 10010-023 | |
| TritonX-100 | Fisher Scientific | 9002-93-1 | |
| Paraformaldehyde(PFA) | Electron Microscopy Sciences | 15714-S | |
| Sylgard 184 silicone elastomer base and curing agent | Dow Corning Corportation | 3097366-0516;3097358-1004 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant | Thermo Fisher Scientific | P36931 | |
| Fingernail polish | CVS | 72180 | |
| Stereo microscope | Nikon | SMZ800 | |
| Confocal microscope | Nikon | Eclipse Ti-E | |
| Petri dish | Falcon | 353001 | |
| Forceps | Dumont | 11255-20 | |
| Scissors | Roboz Surgical Instrument Co | RS-5611 | |
| Insect Pins | Roboz Surgical Instrument Co | RS-6082-25 | |
| Microscope slides and cover slips | Fisher Scientific | 15-188-52 |
References
- Wassle, H., Boycott, B. B.
- MacNeil, M. A., Masland, R. H. Extreme diversity among amacrine cells: implications for function. Neuron. 20 (5), 971-982 (1998).
- Losonczy, A., Makara, J. K., Magee, J. C. Compartmentalized dendritic plasticity and input feature storage in neurons. Nature. 452 (7186), 436-441 (2008).
- Spruston, N. Pyramidal neurons: dendritic structure and synaptic integration. Nat Rev Neurosci. 9 (3), 206-221 (2008).
- Jaworski, J., et al. Dynamic microtubules regulate dendritic spine morphology and synaptic plasticity. Neuron. 61 (1), 85-100 (2009).
- Kweon, J. H., Kim, S., Lee, S. B. The cellular basis of dendrite pathology in neurodegenerative diseases. BMB Rep. 50 (1), 5-11 (2016).
- Baloyannis, S. J.
- Masliah, E., Terry, R. D., Alford, M., DeTeresa, R., Hansen, L. A. Cortical and subcortical patterns of synaptophysinlike immunoreactivity in Alzheimer's disease. Am J Pathol. 138 (1), 235-246 (1991).
- Wayman, G. A., et al. Activity-dependent dendritic arborization mediated by CaM-kinase I activation and enhanced CREB-dependent transcription of Wnt-2. Neuron. 50 (6), 897-909 (2006).
- Rosso, S. B., Sussman, D., Wynshaw-Boris, A., Salinas, P. C. Wnt signaling through Dishevelled, Rac and JNK regulates dendritic development. Nat Neurosci. 8 (1), 34-42 (2005).
- Grueber, W. B., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Different levels of the homeodomain protein cut regulate distinct dendrite branching patterns of Drosophila multidendritic neurons. Cell. 112 (6), 805-818 (2003).
- Sugimura, K., Satoh, D., Estes, P., Crews, S., Uemura, T. Development of morphological diversity of dendrites in Drosophila by the BTB-zinc finger protein abrupt. Neuron. 43 (6), 809-822 (2004).
- Jan, Y. N., Jan, L. Y. Branching out: mechanisms of dendritic arborization. Nat Rev Neurosci. 11 (5), 316-328 (2010).
- Sears, J. C., Broihier, H. T. FoxO regulates microtubule dynamics and polarity to promote dendrite branching in Drosophila sensory neurons. Dev Biol. 418 (1), 40-54 (2016).
- Li, A., et al. Silencing of the Drosophila ortholog of SOX5 leads to abnormal neuronal development and behavioral impairment. Hum Mol Genet. 26 (8), 1472-1482 (2017).
- Misra, M., et al. A Genome-Wide Screen for Dendritically Localized RNAs Identifies Genes Required for Dendrite Morphogenesis. G3 (Bethesda). 6 (8), 2397-2405 (2016).
- Emoto, K., et al. Control of dendritic branching and tiling by the Tricornered-kinase/Furry signaling pathway in Drosophila sensory neurons. Cell. 119 (2), 245-256 (2004).
- Olesnicky, E. C., et al. Extensive use of RNA-binding proteins in Drosophila sensory neuron dendrite morphogenesis. G3 (Bethesda). 4 (2), 297-306 (2014).
- Parrish, J. Z., Xu, P., Kim, C. C., Jan, L. Y., Jan, Y. N. The microRNA bantam functions in epithelial cells to regulate scaling growth of dendrite arbors in drosophila sensory neurons. Neuron. 63 (6), 788-802 (2009).
- Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
- Corty, M. M., Matthews, B. J., Grueber, W. B. Molecules and mechanisms of dendrite development in Drosophila. Development. 136 (7), 1049-1061 (2009).
- Jinushi-Nakao, S., et al. Knot/Collier and cut control different aspects of dendrite cytoskeleton and synergize to define final arbor shape. Neuron. 56 (6), 963-978 (2007).
- Crozatier, M., Vincent, A. Control of multidendritic neuron differentiation in Drosophila: the role of Collier. Dev Biol. 315 (1), 232-242 (2008).
- Copf, T. Importance of gene dosage in controlling dendritic arbor formation during development. Eur J Neurosci. 42 (6), 2234-2249 (2015).
- Rosso, S. B., Inestrosa, N. C. WNT signaling in neuronal maturation and synaptogenesis. Front Cell Neurosci. 7, 103 (2013).
- Engel, T., Hernandez, F., Avila, J., Lucas, J. J. Full reversal of Alzheimer's disease-like phenotype in a mouse model with conditional overexpression of glycogen synthase kinase-3. J Neurosci. 26 (19), 5083-5090 (2006).
- Longair, M. H., Baker, D. A., Armstrong, J. D. Simple Neurite Tracer: open source software for reconstruction, visualization and analysis of neuronal processes. Bioinformatics. 27 (17), 2453-2454 (2011).
- Pool, M., Thiemann, J., Bar-Or, A., Fournier, A. E. NeuriteTracer: a novel ImageJ plugin for automated quantification of neurite outgrowth. J Neurosci Methods. 168 (1), 134-139 (2008).
