Summary
Bu iletişim kuralı bir sentetik peptid vitro üzerinden Aβ reaksiyonlar hazırlamak için ve göreli Aβ oligomer miktarda analiz kurutma bir nokta tarafından değerlendirmek için açıklar.
Abstract
Β-amiloid (Aβ) kendi kendine toplamları birleştirmek için içsel bir eğilim ile hidrofobik bir peptit var. Çeşitli toplamları arasında Aβ oligomer yaygın olarak Alzheimer hastalığı (Ah) devam eden önde gelen nörotoksin olarak kabul edilir ve reklam patogenezinde önemli olay olarak kabul edilir. Bu nedenle, Aβ oligomer inhibitörleri ateş önlemek ve hastalık değiştirme olarak geliştirilecek potansiyeline sahip reklam tedaviler. Ancak, farklı oluşumu protokollerin Aβ oligomer reaksiyonlar farklı özelliklere sahip yol açabilir. Ayrıca, etkili bir şekilde ekran Aβ1-42 oligomer inhibitörleri için pek çok yöntem değildir. A11 almışlarsa bir alt kümesiyle toksik Aβ1-42 oligomer Anti-paralel β-sayfa yapıları ile tepki verebilir. Bu protokol için biz nasıl bir sentetik Aβ1-42 peptid vitro bir A11-pozitif Aβ1-42 oligomer zengini örnekten hazırlamak için ve dot blot tarafından göreli A11-pozitif Aβ1-42 oligomer örneklerinde miktarda değerlendirmek için tarif analiz A11 ve Aβ1-42-belirli 6E10 antikorlar. Bu iletişim kuralını kullanan, A11-pozitif Aβ1-42 oligomer inhibitörleri de yarı kantitatif deneysel sonuçlar ekranlı.
Introduction
Alzheimer hastalığı (Ah) yaşlı insanlar dünya çapında1etkileyen en önemli nörodejeneratif hastalıklardan birisidir. β-amiloid (Aβ) anormal toplama reklam önde gelen patolojik etken olabilir yaygın olarak kabul edilir. Aβ toplamları Senil plakalar, bir reklam hastaların beyinlerinin biyolojik işaretleri ana bileşenleri vardır. Ayrıca, Aβ toplamları reaksiyonlar özellikle de dahil olmak üzere, reklam ilerledikçe nöronal ölüm sebebi olabilir güçlü nörotoksisite üretmek. Bu nedenle, Aβ oligomer oluşumu inhibisyonu ateş engelleyebilir ve Aβ oligomer inhibitörleri-var geliştirilen hastalığı olarak değiştirme AD tedaviler. Birçok çalışma sentetik Aβ peptid reaksiyonlar içinde vitroformu, türleri Morfoloji ve yapay Aβ reaksiyonlar yapıları keşfetmek ve vitro modelleri2,3 kullanarak Aβ oligomer inhibitörleri araştırmak için kullanılan , 4. ancak, farklı vitro oluşumu protokolleri Aβ oligomer oligomer farklı araştırma grupları arasında eşsiz sonuçlar neden olabilir farklı morfolojik özelliklere sahip yol açabilir. Bu nedenle, bir standart oluşumu protokol Aβ oligomer için acilen ihtiyacı vardı.
Şimdiye kadar çoğu yöntemleri doğrudan Aβ reaksiyonlar algılamak için rapor edilmiştir. İletim elektronik mikroskobu (TEM), Sigara denaturing Jel Elektroforez, enzim bağlı immunosorbent assay (ELISA) ve dot blot Analizi miktar ve/veya morfolojisi Aβ oligomer vitro5, incelemek için kullanılabilir 6. Örneğin, Morfoloji ve Aβ oligomer yapısını TEM içinde görülebilir. Göreli tutarları ve moleküler boyutu Aβ toplamalardan sigara denaturing jel elektroforez tarafından ölçülen. ELISA Aβ oligomer serum, plazma ve beyin dokusu özler belirlemek için kullanılabilir. Son olarak, dot blot analizi, algılamak için kullanılan bir teknik analiz ve proteinler, tanımlama Aβ oligomer farklı örneklerinde göreli yoğunlaşmasını oligomer ve Aβ özgü antikorlar yardımıyla değerlendirmek için kullanılabilir. Jel Elektroforez ve blotting yordamları jeller için gerekli değildir Ayrıca, tahlil kurutma bir nokta önemli zaman tasarrufu sunuyor. Bu nedenle, bu tahlil normalde ekran potansiyel Aβ oligomer inhibitörleri kullanılır. Bu iletişim kuralı genel amacı dot blot Analizi ve ekran Aβ oligomer Aβ1-42 oligomer miktarda çözümlenecek bir Aβ1-42 oligomer zengini örnek, hazırlamak için nispeten basit, güvenilir ve tekrarlanabilir bir yöntem tarif etmektir Yarı kantitatif deneysel sonuçlar kullanarak inhibitörleri.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. çözüm hazırlık
Not: Tablo malzemeleri reaktif kaynakları için bakın.
- %5 Sığır serum albumin (BSA) çözüm BSA 5 g çift distile su 100 mL için eklemek suretiyle hazırlamak. Onları tamamen vortexing tarafından mix onları. Çözüm 4 ° c ilâ 1 ay için saklayın.
- Bir anti-oligomer antikor A11 çözümü (1:1, 000) 10 mL % 5 BSA çözeltisi için antikor hisse senedi çözüm 10 µL ekleyerek hazırlayın. Onları tamamen vortexing tarafından mix onları. Çözüm 4 ° c ilâ 1 ay için saklayın.
- Bir anti-Aβ antikor 6E10 çözümü (1:1, 000) 10 mL % 5 BSA çözeltisi için antikor hisse senedi çözüm 10 µL ekleyerek hazırlayın. Tamamen vortexing tarafından mix onları. Çözüm 4 ° c ilâ 1 ay için saklayın.
- Bir anti-fibriler oligomer antikor OC çözümü (1:1, 000) 10 mL % 5 BSA çözeltisi için antikor hisse senedi çözüm 10 µL ekleyerek hazırlayın. Tamamen vortexing tarafından mix onları. Çözüm 4 ° c ilâ 1 ay için saklayın.
- Bir Tris arabelleğe alınmış serum fizyolojik (TBS) hisse senedi çözüm 24 g Tris tabanının ve 88 gr NaCl 1000 mL için çift distile su ekleyerek hazırlayın. PH 7.4 için ayarlayın. Çözüm 4 ° C'de 3 aya kadar saklayın.
- Tris arabelleğe alınmış serum ve ara-20 (TBST) çözüm ara-20 1 mL 100 mL TBS ekleyerek hisse senedi çözüm ve 900 mL çift distile su hazırlamak.
- Bir ikincil antikor çözüm horseradish ekleyerek 10 µL tarafından peroksidaz (HRP) keçi Anti-tavşan IgG (H + L) 10 mL TBST çözeltisi için hazır olun. Onları tamamen vortexing tarafından mix onları. Çözüm 4 ° c ilâ 1 ay için saklayın.
- Curcumin dimetil sülfoksit (10 mM curcumin hisse senedi çözüm oluşturmak için DMSO) 1 ml 3.68 g geçiyoruz.
- Sentetik Aβ1-42 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (2.5-mg/mL Aβ monomer çözüm oluşturmak için HFIP) 2 ml 5 mg geçiyoruz. 20 dk. yapmak 100 µL aliquots için oda sıcaklığında (25 ° C) yerleştirin ve 6 aya kadar-20 ° C'de depolayın.
Not: Bu yordam kısa sürede çalıştırılması gerekir. Pipet ipuçları doğru pipetting emin olmak için kesilmiş. - Electrochemiluminescence (ECL) sıvı hacim oranı 1:1 ECL sıvı A ve B karıştırarak hazırlayın. Bu çözüm sadece kullanmadan önce hazırlanmalıdır.
2. numune hazırlama
Not: 2 gün önce analiz kurutma nokta numune hazırlama gerçekleştirin.
- Çift distile su 900 µL Aβ1-42 monomer çözüm bir tüp için ekleyin; Aβ1-42 konsantrasyonu 0.25 mg/mL olacaktır. 20 dakika oda sıcaklığında karışımı yerleştirin.
- Hacmi yaklaşık 850 µL olana yüksek saflıkta azot gazı ile çözüm buharlaşır. Aβ1-42 çözüm konsantrasyonu 0.29 mg/mL hakkında olacak.
Not: Çözüm zaman zaman HFIP tamamen buharlaşıp emin olmak için sarsılmış. Normalde, buharlaşma, 30 dk sonra kalan çözüm yaklaşık 850 µL birimdir. - Curcumin hisse senedi çözüm curcumin çalışan bir çözüm (0.2 ve 2 µM) çift distile suyla seyreltik. Aβ1-42çözüm ve çözüm 1:1 bir hacim oranı ile çalışma curcumin karıştırın. Curcumin son konsantrasyonları 0,1 ve 1 µM.
Not: Potansiyel oligomer inhibitörleri Aβ1-42 çözüm gerekirse herhangi bir oranda ile karışabilir. - Çözüm, sürekli olarak bir manyetik karıştırıcı sallamak ( Tablo malzemelerigörmek).
- Manyetik karıştırıcı bir plastik ayırıcı kutusuna düzeltmek. Place 2 manyetik barlar kutusunun 2 köşesine heyecan ve örnek tüpler kutusunun ortasına yerleştirin.
- Kutusu, oda sıcaklığında (25 ° C) 48 h için salla.
Not: Manyetik karıştırıcı hızını yaklaşık 60 rpm olduğunu.
- 4 ° C'de 15 dakika tüpler santrifüj kapasitesi ve 18.000 x g. süpernatant toplamak.
3. dot blot Analizi
Not: Tüm incubations üzerinde yatay bir shaker gerçekleştirilir.
- Nitroselüloz membran 1 cm genişliğinde şeritler halinde kesin.
Not: Nitroselüloz membran genişliğini deneysel ihtiyaçlarına göre ayarlanabilir. - 2-µL örnekleri eşit 2 şeritler (şerit 1 ve 2) 0.5 cm her noktası Aralık ile yerleştirin.
- Damlacık grup üzerinde kuru olana, oda sıcaklığında 5 min için şeritler yerleştirin.
- Şeritler, oda sıcaklığında 30 dk için %5 BSA çözüm ile kuluçkaya.
- Şeritler ile bir TBST çözüm 5 min için oda sıcaklığında durulayın.
- TBST çözüm Aspire edin. 1 h, oda sıcaklığında için şerit bir anti-oligomer antikor A11 çözüm 1 kuluçkaya ve 2 anti-Aβ antikor 6E10 çözümünü ile şerit.
- Şeritler bir TBST çözüm ile üç kez, her zaman oda sıcaklığında 5 min için durulayın.
- TBST çözüm Aspire edin. Şeritler, oda sıcaklığında 40 min için bir ikincil antikor çözüm ile kuluçkaya.
- Şeritler bir TBST çözüm ile üç kez, her zaman oda sıcaklığında 5 min için durulayın.
- Eşit karma ECL sıvı şeritler yüzey için geçerlidir. Şeritler görüntüleme sistemi bir otomatik Kemiluminesan maruz ( Tablo malzemelerigörmek).
Not: Normalde, ECL sıvı 300 µL bir membran yeter. Membran pozlama sırasında nemli tutulmalıdır. Pozlama süresi görüntüleme sistem tarafından otomatik olarak hesaplanır. - Yarı kantitatif sonuçları elde etmek için ImageJ (Ulusal Sağlık Enstitüleri) veya başka bir görüntü işleme yazılımı kullanarak bir gri tonlamalı analizi yapmak.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Aβ1-42 monomer hazırlık sonra bir Aβ1-42 oligomer oluşturmak olup olmadığını araştırmak için TEM analizi kullanıldı. Hiçbir görünür toplamları HFIP çözünmüş Aβ1-42 monomer örnek (Şekil 1A) tespit edildi. Ayrıca, esas olarak küresel toplamları çapında 10-80 nm gözlendi Aβ1-42 örnekte sallayarak, 48 saat sonra Aβ1-42 reaksiyonlar hazırlık (Şekil 1B) sonra formlar düşündüren.
Resim 1 . Aβ1-42 monomer ve Aβ1-42 oligomer zengini örnekleri TEM analizi. Aβ HFIP çözünmüş1-42 monomer örneği (10 µM) ve bu protokole göre hazırlanan Aβ1-42 oligomer zengini örneği (10 µM) TEM tarafından incelenmiş. Ölçek çubuğu = 200 nm. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Ayrıca, analiz kurutma nokta Aβ1-42 oligomer örneklerde göreli miktarda değerlendirmek için kullanıldı. A11 almışlarsa bir alt kümesiyle toksik Aβ oligomer Anti-paralel β-sayfa yapıları ile tepki verebilir. Bir OC antikor paralel kayıt β-sayfa yapıları ile fibriler toplamları ile tepki verir. Bu antikorlar kullanarak, biz o A11-pozitif Aβ1-42 gösterdi hazırlanmıştır göre Protokolü (Aβ1-42 oligomer zengini örneklerinde çıktı reaksiyonlar ama değil OC-pozitif Aβ1-42 fibriler toplamları, esas olarak Şekil 2). Anti-Aβ antikor 6E10 kullanarak, biz Aβ1-42 peptidler sayısı HFIP çözünmüş Aβ1-42 monomer örneği ve Aβ1-42 oligomer zengini örneği (Şekil 2) benzer gözlendi.
Resim 2 . Aβ1-42 monomer ve Aβ1-42 Blot Analizi oligomer zengini örnekleri nokta. (A) HFIP çözünmüş Aβ1-42 monomer örneği (10 µM) ve bu protokole göre hazırlanan Aβ1-42 oligomer zengini örneği (10 µM) Anti-oligomer antikor A11, anti fibriler kullanarak analiz kurutma nokta tarafından muayene oligomer antikor OC ve anti-Aβ antikor 6E10. (B - D) gri tonlamalı yarı kantitatif analizini ImageJ tarafından gerçekleştirildi. Veri denetimi, yüzde olarak ifade edilen, 3 bağımsız deneyler ortalama ± SEM vardı; *** p < 0,001 vs Aβ1-42 monomer grup (ANOVA ve t-testi). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Eğer bu protokol Aβ1-42 reaksiyonlar, curcumin, ekran inhibitörleri için kullanılan daha fazla araştırmak için bilinen bir Aβ oligomer inhibitörü kullanıldı. Curcumin ile ortak bir kuluçka bulduk (0.1 - 1 µM) A11-pozitif Aβ1-42 oligomer, göreli miktarda azalma A11 curcumin Co inkübe Aβ1-42 oligomer örnek daha da boyama tarafından kanıtlanan azaltılacağını normal inkübe Aβ1-42 oligomer zengini örnek (Şekil 3). Aynı durum, curcumin, (0.1 - 1 µM) 6E10 boyama bile tüm örnekleri (Şekil 3) olduğu gibi Aβ1-42 peptidler, sayısı değiştirmemeyi.
Şekil 3 . Blot Analizi curcumin Co inkübe Aβ1-42 oligomer zengini örnekleri nokta. (A) HFIP çözünmüş Aβ1-42 monomer (10 µM) bu protokole göre hazırlanmış ve ile ya da ezelî curcumin inkübe (0, 0.1, 1 µM) için 48 h sallayarak altında. Örnekleri analiz A11 ve 6E10 kurutma bir nokta tarafından incelenmiş. (B) yarı kantitatif gri tonlamalı Analizi ImageJ tarafından gerçekleştirildi. Veri denetimi, yüzde olarak ifade edilen, 3 bağımsız deneyler ortalama ± SEM vardı; *** p < 0,001 vs Aβ1-42 yalnız grup (ANOVA ve Tukey'nın testi). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Oligomer oluşumu doğrulamak için biz de bir sigara denaturing jel kullandık. Bu oligomer bulduk (> 4 KD) çoğu monomer süre Aβ1-42 oligomer zengini örnek mevcuttu (4 KD) Aβ1-42 monomer örnek (Şekil S1) bulundu.
Aβ toplamları süpernatant ve Pelet Aβ1-42 örneği araştırdık. Kuluçka 48 saat sonra Aβ1-42 oligomer ama değil Aβ1-42 fibriler toplamları süpernatant A11, OC ve 6E10 antikor (Şekil S2) tarafından belirlenen örneği bulundu. Aynı durum olarak Aβ1-42 fibriler toplamları ama değil Aβ1-42 reaksiyonlar (Şekil S2) örnek Pelet içinde bulundu.
Biz de TEM kullanarak curcumin tedavi Aβ1-42 örnek morfolojisi inceledik. Curcumin tedavi örnek o curcumin Aβ1-42 oligomer (Şekil S3) azaltmak düşündüren birkaç küresel noktalar içerir.
Şekil S1 . Sigara denaturing jel elektroforez analiz Aβ1-42 monomer ve Aβ1-42 oligomer zengin örnekler. HFIP çözünmüş Aβ1-42 monomer örneği (10 µM) ve bu protokole göre hazırlanan Aβ1-42 oligomer zengini örneği (5 µM, düşük; 10 µM, yüksek) tarafından sigara denaturing jel elektroforez anti-Aβ antikor 6E10 kullanarak incelenmiş. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil S2 . Aβ1-42 çözüm süpernatant esas olarak oligomer ama değil fibriler toplamları içerir. Aβ1-42 çözümünü (50 µL), 48 h için sallayarak sonra 18.000 x g 10 min için de centrifuged. Süpernatant toplanmıştır ve Pelet yeniden 850 µL çift distile su içinde çözünmüş. Daha fazla süpernatant ve Pelet OC, A11 ve 6E10 antikorları kullanarak bir nokta leke tahlil tarafından incelenmiş. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil S3 . Curcumin analizini TEM ortak Aβ1-42 oligomer zengini örnekleri inkübe. HFIP çözünmüş Aβ1-42 monomer (10 µM) bu protokole göre hazırlanan ve 48 h için sallayarak altında 1 µM curcumin ile inkübe edildi. Örnekleri TEM tarafından incelenmiş. Ölçek çubuğu = 100 nm. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu protokol için bir yöntem Aβ1-42 oligomer içeren numune hazırlama ve analiz kurutma bir nokta tarafından A11-pozitif Aβ1-42 oligomer miktarda çözümlemek için bildirdin. Bizim yöntemleri Aβ1-42 oligomer zengini örnekleri hazırlanması için oldukça basit, güvenilir ve tekrarlanabilir olmakla birlikte, hala fark gereken bazı noktalar vardır. İlk olarak, HFIP sentetik Aβ1-42 peptid dağıtmak için kullanılır. Bir araya getirilmiş Aβ1-42 peptid monomer HFIP çözüm içine sökmeye. Ancak, HFIP volatilize kolay ve HFIP viskozite çok düşüktür. Bu nedenle, Aβ1-42 peptid HFIP çözünmüş ve HFIP çözüm işlemi sırasında HFIP olası kaybını azaltmak için mümkün olduğunca hızlı bölünmemeli olmalıdır. Ayrıca, pipet ipuçları bu yordamda doğru pipetting emin olmak için kesilebilir. İkinci olarak, yüksek saflıkta azot gazı HFIP çözümden buharlaşır için kullanılır. Bu işlem sırasında Aβ1-42 çözüm zaman zaman HFIP tamamen buharlaşmış emin olmak için sarsılmış. Bu yordamın bitiminde HPIF kokusuna çözüm içinde tespit. Normalde, buharlaşma 30 dk HFIP konsantrasyonu % 0.1'den az için azaltır. Bu konsantrasyonu, HFIP uyum geçiş Aβ1-427değiştirmemeyi kabul bildirilmektedir. Üçüncü olarak, Aβ1-42 oligomer içeren örnekleri hazırlanırken, sıvı en küçük birim 50 µL. büyük olmalıdır Aksi halde, örnekleri tüpler duvara için küçük damlacıklar halinde dağılmaya muhtemeldir. Ayrıca, Aβ1-42 monomer ayrıntılı karıştırma olmadan oligomer oluşamıyor.
Diğer gruplar halinde kullanılan bazı iletişim kuralları biraz farklı bir Aβ1-42 oligomer zengini örnek burada açıklandığı şekilde hazırlamak için protokolüdür. Örneğin, bazı çalışmalarda, HFIP çift-distile su çözüm8,9eklemeden önce buharlaşmış. Ancak, böyle bir durumda, çözüm içine çözülmeye zordur küçük yaprak Aβ1-42 peptid oluşabilir. Bu nedenle, önce çift distile su ekleyin ve sonra HFIP azot gazı tarafından buharlaşır seçti. En önemlisi, bu iletişim kuralı tarafından hazırlanan toplamları oligomeric şekiller TEM tarafından onaylanır. Ayrıca, bu iletişim kuralı tarafından oluşan Aβ1-42 oligomer nörotoksisite SH-SY5Y hücreleri ve birincil hipokampal nöronlar neden ve düşündüren farelerin hipokampal bölgeyi içine enjeksiyon sonra bilişsel performansını düşüren Aβ1-42 hazırlanan oligomer oldukça toksik5,10' dur. Bu sonuçlar önceki çalışmalar11ile tutarlıdır.
A11-pozitif Aβ1-42 oligomer bir nokta blotting analiz tarafından değerlendirmek için bu iletişim kurallarını hala bazı eksiklikleri vardır. İlk olarak, el ile örnekleme kullanarak, bu damlacıkları boyutunda tek tip tutmak kolay değil. İkinci olarak, yarı kantitatif analiz kurutma bir nokta olduğunu ama A11-pozitif Aβ1-42 oligomer, ELISA gibi diğer yöntemleri öne miktarda ölçmek için niceliksel değil yöntemi olup gerekli miktarda Aβ1-42 doğru değerlendirilmesi oligomer gereklidir. Üçüncü olarak, bazı ilaçlar yanlış pozitif sonuçlar için önde gelen antikorlar, tepki.
Genel olarak, güvenilir bir protokolü örnekleri A11-pozitif Aβ1-42 oligomer içeren hazırlamak ve A11-pozitif Aβ1-42 oligomer miktarda tahlil kurutma bir nokta kullanarak çözümlemek için hazırladık. Bu iletişim kuralı, potansiyel Aβ1-42 oligomer kullanarak reklam tedavi için potansiyel işlemcimiz etkili ekranlı.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Bu eser Ulusal Doğal Bilim Vakfı, Çin'den (U1503223, 81673407, 21475131), kar amacı gütmeyen teknoloji Zhejiang Eyaleti (2016 C 37110), Ningbo uluslararası bilim ve teknoloji üzerinde uygulamalı araştırma projesi hibe tarafından desteklenmiştir İşbirliği projesi (2014D 10019), yaşam bilimleri ve sağlık (2015C 110026), Ningbo bilim ve teknoloji proje yaygın zenginlik (2017C 50042), Li Dak toplamı Yip Yio çene Kenneth Li Marine biyofarmasotik Kalkınma Fonu için Ningbo Belediye yenilik ekibinin, ve Ningbo Üniversitesi'nde K. C. Wong Magna fonu.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| A11 (ab126892 Rb pAb to Amyloid Oligomers) | Abcam | GR91739-58 | |
| 6E10 (beta-Amyloid Rabbit Ab) | Cell Signalling Technology | 2454S | |
| OC (Anti-Amyloid Fibrils OC Antibody) | Millipore | AB2286 | |
| Horseradish Peroxidase (HRP) Marker Goat anti rabbit IgG (H+L) | Beyotime | A0208 | |
| Aβ1-42 | GL Biochem | 52487 | |
| 1,1,1,3,3,3-Hexafiuoro-2-propanol | Aladdin | I1523078 | |
| Curcumin | Sigma | C1386 | |
| Albumin Bovine V | Solarbio | A8020 | |
| Sodium chloride | Sangon Biotech | D920BA0003 | |
| Sodium dodecyl sulfate | SCR | 30166428 | |
| TRIS | Solarbio | T8060 | |
| Glycine | Solarbio | G8200 | |
| Dimethyl sulfoxide | Solarbio | D8370 | |
| 5×nondenaturing gel PAGE Protein Marker | Beyotime | P0016 | |
| Genshare CFAS anyKD PAGE | Genshare | JC-PE022 | |
| Pure Nitrocellulose Blotting Membrane | Pall Corporation | T50189 | |
| Methanol | SCR | 10014118 | |
| Ethanol | SCR | 10009218 | |
| Super low range protein Marker | Solarbio | PR1300 | |
| Transfer Membranes | Immobilon-PSQ | ISEQ00010 | |
| BeyoECL Star | Beyotime | P0018A | |
| Commassie Blue Fast staining solution | Beyotime | P0017 | |
| All - automatic chemiluminescence imaging system | Tanon | Tanon 5200 | |
| Image J | National Institutes of Health | ||
| Image processing software | Adobe | Photoshop CS6 | |
| Magnetic agitator | Shanghai Huxi |
References
- Lauren, J. Cellular prion protein as a therapeutic target in Alzheimer's disease. Journal of Alzheimer's Disease. 38 (2), 227-244 (2014).
- De Maio, A., Rivera, I., Cauvi, D. M., Arispe, N. Modulation of amyloid peptide oligomerization and toxicity by extracellular Hsp70. Biophysical Journal. 112 (3), 444 (2017).
- Di Scala, C., Chahinian, H., Yahi, N., Garmy, N., Fantini, J. Interaction of Alzheimer's beta-amyloid peptides with cholesterol: mechanistic insights into amyloid pore formation. Biochemistry. 53 (28), 4489-4502 (2014).
- Xiang, S. Y., et al. Fucoxanthin inhibits beta-amyloid assembly and attenuates beta-amyloid oligomer-induced cognitive impairments. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65 (20), 4092-4102 (2017).
- Chang, L., et al. Protection against beta-amyloid-induced synaptic and memory impairments via altering beta-amyloid assembly by bis(heptyl)-cognitin. Scientific Reports. 5, 10256 (2015).
- Yam, G. H. F., et al. In vitro amyloid aggregate forming ability of TGFBI mutants that cause corneal dystrophies. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (9), 5890-5898 (2012).
- Tomaselli, S., et al. The alpha-to-beta conformational transition of Alzheimer's A beta-(1-42) peptide in aqueous media is reversible: A step by step conformational analysis suggests the location of beta conformation seeding. ChemBioChem. 7 (2), 257-267 (2006).
- Shigemitsu, Y., et al. Nuclear magnetic resonance evidence for the dimer formation of beta amyloid peptide 1-42 in 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol. Analytical Biochemistry. 498, 59-67 (2016).
- Khan, M. V., Rabbani, G., Ahmad, E., Khan, R. H. Fluoroalcohols-induced modulation and amyloid formation in conalbumin. International Journal of Biological Macromolecules. 70, 606-614 (2014).
- Fang, F., et al. 5-hydroxycyclopenicillone, a new beta-amyloid fibrillization inhibitor from a sponge-derived fungus trichoderma sp HPQJ-34. Marine Drugs. 15 (8), 260 (2017).
- Shiao, Y. J., Su, M. H., Lin, H. C., Wu, C. R. Echinacoside ameliorates the memory impairment and cholinergic deficit induced by amyloid beta peptides via the inhibition of amyloid deposition and toxicology. Food & Function. 8 (6), 2283-2294 (2017).
