Estabilidade e Estrutura do Complexo de Histocompatibilidade Maior do Morcego Classe I com β Heterologous2-Microglobulina

Di Zhang; Kefang Liu; Dan Lu; Pengyan Wang; Qingxu Zhang; Peipei Liu; Yingze Zhao; Yan Chai; Jianxin Lyu; Jianxun Qi; William  J. Liu

doi:10.3791/61462

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Artigo de método

Estabilidade e Estrutura do Complexo de Histocompatibilidade Maior do Morcego Classe I com β Heterologous₂-Microglobulina

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DOI:

10.3791/61462

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10 de março de 2021

Di Zhang^*¹^,² , Kefang Liu^*³^,⁴ , Dan Lu^*²^,⁵ , Pengyan Wang¹^,² , Qingxu Zhang¹^,² , Peipei Liu² , Yingze Zhao² , Yan Chai⁴ , Jianxin Lyu¹ , Jianxun Qi⁴ , William J. Liu¹^,²

¹School of Laboratory Medicine and Life Sciences, Wenzhou Medical University, ²NHC Key Laboratory of Biosafety, National Institute for Viral Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, ³Faculty of Health Sciences, University of Macau, ⁴CAS Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, ⁵Savaid Medical School, University of Chinese Academy of Sciences

^* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

O protocolo descreve métodos experimentais para obter substituições estáveis do complexo de histocompatibilidade principal (MHC) classe I através de substituições potenciais β 2-microglobulina (β₂m) de diferentes espécies. A comparação estrutural do MHC I estabilizada por homólogos e heteromaníacos β₂m foram investigadas.

Resumo

O maior complexo de histocompatibilidade (MHC) desempenha um papel fundamental na apresentação de peptídeos de antígeno e respostas imunes de células T contra doenças infecciosas e desenvolvimento de tumores. O MHC híbrido I complexo com β substituição heterologous β 2-microglobulina (β₂m) de diferentes espécies pode ser estabilizado in vitro. Este é um meio viável para estudar MHC I de mamíferos, quando o homólogo β₂m não está disponível. Enquanto isso, é indicado que a substituição de mamíferos β₂m não afeta significativamente a apresentação de peptídeos. No entanto, há uma resumida limitada em relação à metodologia e à tecnologia para o MHC híbrido I complexizado com heterologos β 2-microglobulina (β₂m). Nesse meio, são apresentados métodos para avaliar a viabilidade da β substituição de₂m no estudo MHC I. Esses métodos incluem a preparação de construtos de expressão; purificação de corpos de inclusão e redobramento do complexo mhc; determinação da termoestabilidade proteica; triagem de cristal e determinação da estrutura. Este estudo fornece uma recomendação para a compreensão da função e estrutura do MHC I, e também é significativo para avaliação de resposta celular T durante doenças infecciosas e imunoterapia tumoral.

Introdução

O maior complexo de histocompatibilidade (MHC) existe em todos os vertebrados e é um conjunto de genes que determina a imunidade mediada por células a patógenos infecciosos. A classe I do MHC apresenta peptídeos endógenos, como componentes virais produzidos após a infecção por vírus, aos receptores de células T (TCR) na superfície das células CD8⁺ T para mediar a imunidade celular e participar da regulação imunológica¹. Um estudo estrutural de MHC I vinculando-se aos peptídeos fornece informações sobre motivos de ligação de peptídeos e características de apresentação por moléculas de MHC I, que desempenha papéis vitais na avaliação d....