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Immunology and Infection

प्रायोगिक ऑटोम्यून्यून यूवाइटिस: एक इंट्राओकुलर भड़काऊ माउस मॉडल

Published: January 12, 2022 doi: 10.3791/61832
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1UCL Institute of Ophthalmology, University College London

Summary

इस रिपोर्ट में हम एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं जो अन्वेषक को इंट्राओकुलर यूवाइटिस का माउस मॉडल उत्पन्न करने की अनुमति देता है। आमतौर पर प्रयोगात्मक ऑटोम्यून्यून यूवाइटिस (ईएयू) के रूप में जाना जाता है, यह स्थापित मॉडल मानव रोग के कई पहलुओं को पकड़ता है। यहां, हम वर्णन करेंगे कि कई रीडआउट का उपयोग करके रोग की प्रगति को कैसे प्रेरित और मॉनिटर किया जाए।

Abstract

प्रायोगिक ऑटोम्यून्यून यूवाइटिस (ईएयू) प्रतिरक्षा कोशिकाओं द्वारा स्व-एंटीजन का जवाब देने से प्रेरित होता है। इस गैर-संक्रामक, इंट्राओकुलर भड़काऊ रोग मॉडल की कई विशेषताएं मनुष्यों को प्रभावित करने वाले पश्चवर्ती यूवाइटिस के नैदानिक फेनोटाइप को पुन: परिभाषित करती हैं। ईएयू का उपयोग उपन्यास भड़काऊ चिकित्सीय की प्रभावकारिता, उनकी कार्रवाई के तरीके का अध्ययन करने और इंट्राओकुलर विकारों की रोग प्रगति को रेखांकित करने वाले तंत्र की जांच करने के लिए मज़बूती से किया गया है। यहां, हम C57BL / 6J माउस में EAU प्रेरण पर एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं - इस बीमारी के लिए संवेदनशीलता के साथ सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाने वाला मॉडल जीव। रोग की गंभीरता और प्रगति का नैदानिक मूल्यांकन फंडोस्कोपी, हिस्टोलॉजिकल परीक्षा और फ्लोरेसिन एंजियोग्राफी का उपयोग करके प्रदर्शित किया जाएगा। प्रेरण प्रक्रिया में ओकुलर प्रोटीन इंटरफोटोरिसेप्टर रेटिनोइड बाइंडिंग प्रोटीन (जिसे रेटिनॉल बाइंडिंग प्रोटीन 3 के रूप में भी जाना जाता है), कम्प्लीट फ्रायंड एडजुवेंट (सीएफए) से पेप्टाइड (आईआरबीपी1-20) युक्त एक इमल्शन का चमड़े के नीचे इंजेक्शन शामिल है और मारे गए माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस के साथ पूरक है। गर्दन के पीछे इस चिपचिपे इमल्शन के इंजेक्शन के बाद बोर्डेटेला पर्टुसिस विष का एक इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन होता है। लक्षणों की शुरुआत में (दिन 12-14) और सामान्य संज्ञाहरण के तहत, नैदानिक परीक्षा के माध्यम से रोग की प्रगति का आकलन करने के लिए फंडोस्कोपिक छवियां ली जाती हैं। इन आंकड़ों की तुलना सीधे बाद के समय बिंदुओं और चरम बीमारी (दिन 20-22) के साथ की जा सकती है, जिसमें विश्लेषण किए गए अंतर हैं। उसी समय, यह प्रोटोकॉल अन्वेषक को फ्लोरेसिन एंजियोग्राफी का उपयोग करके पोत पारगम्यता और क्षति में संभावित अंतर का आकलन करने की अनुमति देता है। ईएयू को अन्य माउस उपभेदों में प्रेरित किया जा सकता है - वाइल्डटाइप या आनुवंशिक रूप से संशोधित दोनों - और दवा प्रभावकारिता और / या रोग तंत्र का अध्ययन करने के लिए लचीलापन प्रदान करने वाले नए उपचारों के साथ जोड़ा जा सकता है।

Introduction

यह प्रोटोकॉल प्रदर्शित करेगा कि एक इमल्सीफाइड सहायक में रेटिना एंटीजन के एकल चमड़े के नीचे इंजेक्शन द्वारा सी 57बीएल / 6 जे माउस में प्रायोगिक ऑटोइम्यून यूवाइटिस (ईएयू) को कैसे प्रेरित किया जाए। रोग की प्रगति की निगरानी और आकलन के तरीकों को फंडोस्कोपिक इमेजिंग और हिस्टोलॉजिकल परीक्षा के माध्यम से विस्तृत किया जाएगा, जिसमें माप मापदंडों को रेखांकित किया जाएगा। इसके अलावा, फ्लोरेसिन एंजियोग्राफी, रेटिना रक्त वाहिका संरचना और पारगम्यता की जांच के लिए एक तकनीक पर चर्चा की जाएगी।

यह ईएयू मॉडल क्लीनिकोपैथोलॉजिकल विशेषताओं और बीमारी को चलाने वाले बुनियादी सेलुलर और आणविक तंत्र के संबंध में मनुष्यों में गैर-संक्रामक पश्चवर्ती यूवाइटिस की केंद्रीय विशेषताओं को पुन: प्रस्तुत करता है। ईएयू को स्व-प्रतिक्रियाशील सीडी 4 + टी लिम्फोसाइटों के टीएच 1 और / या टीएच 17 उपसमुच्चय द्वारा मध्यस्थ किया जाता है, जैसा कि दत्तक हस्तांतरण प्रयोगों में और आईएफएन-क्षीण चूहोंके साथ दिखाया गया है। यूवाइटिस में इन कोशिकाओं के लिए संभावित भूमिकाओं की हमारी अधिकांश समझ ईएयू2 का अध्ययन करने से आती है जहां रेटिना ऊतकों के भीतर टीएच 1 और टीएच 17 कोशिकाओं दोनों का पता लगाया जाताहै। अक्सर, ईएयू का उपयोग रोग को कम करने में नए उपचारों की उपयोगिता का आकलन करने के लिए प्रीक्लिनिकल मॉडल के रूप में किया जाता है। चिकित्सीय दृष्टिकोण जिन्होंने ईएयू रोग को सफलतापूर्वक संशोधित किया है, ने क्लिनिक में कुछ प्रभावकारिता दिखाई है और एफडीए अनुमोदित स्थिति तक पहुंच गया है। इनके उदाहरण इम्यूनोरेगुलेटरी दवाओं के समूह हैं जैसे कि टी सेल-टारगेटिंग थेरेपी: साइक्लोस्पोरिन, एफके -506, और रैपामाइसिन 4,5,6। हाल ही में, रोग के परिणाम पर तंत्र और प्रभाव दोनों की जांच करने के लिए इस मॉडल में नए मार्गों को लक्षित करने वाले हस्तक्षेपों का भी पता लगाया गया है। इनमें क्रोमैटिन रीडर ब्रोमोडोमेन एक्स्ट्रा-टर्मिनल (बीईटी) प्रोटीन और पी-टीईएफबी इनहिबिटर 3 के माध्यम से ट्रांसक्रिप्शनल विनियमन को लक्षित करना शामिलहै। इसके अलावा, वीएलए -4 अवरोधक जैसे अधिक पारंपरिक दृष्टिकोणों ने हाल ही में प्रभावक सीडी 4 + टी कोशिकाओं 7 के मॉड्यूलेशन के माध्यम से ईएयू में दमन का प्रदर्शन कियाहै। इसके अलावा, टीएमपी 778 के साथ टीएच 17 कोशिकाओं को लक्षित करना, एक आरओआरओटी व्युत्क्रम एगोनिस्ट, ईएयू8 को काफी हद तक दबाने के लिए भी पाया गया है। इसके अलावा, यह मॉडल रेटिना में पुरानी ऑटोइम्यून सूजन और लिम्फोसाइट प्राइमिंग जैसे अंतर्निहित तंत्र का अध्ययन करने का अवसर प्रदान करता है।

ईएयू प्रीक्लिनिकल अध्ययनों के लिए प्राथमिक रीडआउट ऑप्टिकल कोहेरेंस टोमोग्राफी (ओसीटी) द्वारा रेटिना अखंडता का आकलन करके रेटिना फंडोस्कोपी इमेजिंग और कम बार नैदानिक मूल्यांकन हैं। फ्लो साइटोमेट्री द्वारा रेटिना कोशिकाओं के रेटिना हिस्टोपैथोलॉजिकल मूल्यांकन और इम्यूनोफेनोटाइपिंग को तब समाप्ति पर किया जाता है। फंडोस्कोपी एक आसानी से उपयोग की जाने वाली लाइव इमेजिंग प्रणाली है जो पूरे रेटिना के तेजी से और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य नैदानिक मूल्यांकन की अनुमति देती है। इम्यूनोहिस्टोकेमिकल आकलन के लिए, तकनीक रेटिना वर्गों की तैयारी पर आधारित हैं जो हमें सूजन और संरचनात्मक क्षति की डिग्री के लिए ऊतक वास्तुकला का अध्ययन करने की अनुमतिदेते हैं। उपयोग की जाने वाली सभी तकनीकों के लिए मूल्यांकन मानदंड और पारंपरिक स्कोरिंग सिस्टम, इस प्रोटोकॉल के भीतर उल्लिखित किए जाएंगे। फंडोस्कोपिक इमेजिंग का उपयोग करके दर्ज की गई क्षति की सीमा अक्सर हिस्टोलॉजिकल परिवर्तनों के साथ निकटता से संबंधित होती है। रोग की गंभीरता की निगरानी और आकलन के लिए यह दोहरा दृष्टिकोण अधिक संवेदनशीलता और अधिक विश्वसनीय माप परिणाम प्रदान करता है।

ईएयू प्रतिरक्षा-मध्यस्थता आंख रोग के प्रीक्लिनिकल परीक्षण और जांच के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित, आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला मॉडल है। यह मॉडल >95% बीमारी की घटनाओं के साथ विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है और व्यापक डेटा उत्पन्न करता है जिसका उपयोग इंट्राओकुलर भड़काऊ बीमारी के उपचार के लिए नए उपचारों को मान्य या अस्वीकार करने के लिए किया जा सकता हैजो दुनिया भर में कामकाजी उम्र के अंधापन का एक प्रमुख कारण का प्रतिनिधित्व करता है।

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Protocol

सभी प्रयोग यूके पशु (वैज्ञानिक प्रक्रिया) अधिनियम 1986, और संस्थागत पशु कल्याण और नैतिक समीक्षा निकाय (एडब्ल्यूईआरबी) दिशानिर्देशों के अनुसार किए गए थे।

1. आवास C57BL / 6J चूहों

  1. चूहों को एक विशिष्ट रोगज़नक़ मुक्त वातावरण में, 12 घंटे के प्रकाश-अंधेरे चक्र और भोजन और पानी उपलब्ध लिबिटम पर रखें।
  2. वयस्क महिला C57BL /6J पर सभी प्रयोग करें (महिलाओं को अधिमानतः चुना जाता है क्योंकि यूवाइटिस रोगियों में पुरुषों की तुलना में महिलाओं की घटना 1.4 से 1 होती है)। वजन और उम्र के आधार पर 6-8 सप्ताह के बीच मादा सी 57बीएल / 6 जे चूहों को यादृच्छिक करें। चूहों को व्यक्तिगत रूप से हवादार पिंजरों (आईवीसी) में प्रति पिंजरे 5-6 चूहों के समूह में रखें।

2. C57BL/6 चूहों का टीकाकरण

  1. आईआरबीपी1-20 - सीएफए इमल्शन तैयारी
    नोट: इमल्शन की तैयारी प्रजनन क्षमता और बीमारी की घटनाओं के लिए आवश्यक है; इस प्रकार, तैयारी प्रक्रिया के दौरान और प्रयोगों में स्थिरता बनाए रखने के लिए हर संभव प्रयास किया जाना चाहिए। इमल्शन तैयार करते समय, नुकसान को पहले से सभी अभिकर्मकों की गणना में गिना जाना चाहिए। टीकाकरण के लिए नियोजित चूहों की संख्या के आधार पर यह नुकसान लगभग 1.5 गुना (या तैयार मात्रा का 50% अतिरिक्त) हो सकता है। कृपया नीचे निम्न उदाहरण देखें। 10 चूहों को प्रतिरक्षित करने के लिए, 15 चूहों को तैयार करें और 400 μg (पेप्टाइड प्रति 20 ग्राम माउस) x 15 चूहों = 6 मिलीग्राम का उपयोग करें। प्रत्येक माउस को टीकाकरण के लिए 200 μL (3 एमएल कुल) प्राप्त करना चाहिए। अंतिम मात्रा में पेप्टाइड समाधान और सीएफए का 1: 1 अनुपात शामिल है, इसलिए पेप्टाइड समाधान का 1.5 एमएल और सीएफए का 1.5 एमएल है।
    1. सड़न रोकनेवाला तकनीकों का उपयोग करके एक लामिनार प्रवाह कैबिनेट में सभी बाँझ समाधान तैयार करें।
    2. मानव आईआरबीपी 1-20 (एलएक्यूजीएवाईआरटीएवीएलडीएलएसएलएएसएलटी) लियोफिलाइज्ड पेप्टाइड की वांछित मात्रा (400 μg प्रति 20 ग्राम माउस) का वजन करें। 100% डीएमएसओ में पेप्टाइड घोलें। -20 डिग्री सेल्सियस पर लियोफिलाइज्ड रूप में स्टॉक स्टोर करें।
      नोट: यह सुनिश्चित करने के लिए कि पाउडर पूरी तरह से घुल गया है, प्रत्येक गुच्छे को पहले डीएमएसओ के साथ संपर्क करना चाहिए और अवशिष्ट ठोस का कोई संकेत नहीं दिखाना चाहिए। अंतिम वॉल्यूम तक पहुंचने के लिए छोटे भागों में पीबीएस जोड़ें। एक भंवर के साथ मिश्रण न करें, इसके बजाय पिपेट के साथ कोमल आंदोलन का उपयोग करें। डीएमएसओ की अंतिम एकाग्रता कुल पेप्टाइड तैयारी मात्रा के 1% से अधिक नहीं होनी चाहिए। पतले तल के साथ 20 एमएल प्लास्टिक ट्यूब में इमल्शन तैयार करने से लियोफिलाइज्ड पाउडर के लिए डीएमएसओ की बेहतर पहुंच की अनुमति मिलनी चाहिए।
    3. सीएफए में 1: 1 वी / वी पर डीएमएसओ-पीबीएस पेप्टाइड समाधान जोड़ें, जिसे पहले से ही 2.5 मिलीग्राम / एमएल की अंतिम एकाग्रता देने के लिए माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस को मारने वाले 1.5 मिलीग्राम / एमएल के साथ पूरक किया गया है। एक चिपचिपा और समान रूप से वितरित इमल्शन बनाने के लिए धीरे-धीरे और अक्सर ड्रॉपवाइज जोड़ें।
    4. एक मलाईदार मोटी स्थिरता उत्पन्न करने के लिए 1000 μL पिपेट (आगे के नुकसान को रोकने के लिए 700 μL पर सेट) और पिपेट का उपयोग करके पेप्टाइड समाधान और सीएफए को एरेट करें। इस तकनीक में वांछित मोटाई तक पहुंचने तक बार-बार ऊपर और नीचे एस्पिरेट करने के लिए पिपेट का उपयोग करना शामिल है। इष्टतम परिणामों के लिए, सुनिश्चित करें कि इंजेक्शन लगाने से पहले एंटीजन समाधान और सहायक को अच्छी तरह से मिश्रित किया जाता है।
  2. पर्टुसिस विष का इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन
    1. 1%माउस सीरम 11 के साथ पूरक आरपीएमआई 1640 मीडिया के 100 μL में 1.5 μg बोर्डेटेला पर्टुसिस विष को निलंबित करें।
    2. एक बाँझ सिरिंज और 23 जी सुई के साथ आईपी इंजेक्शन करें।
      नोट: इंजेक्शन साइट पर गड़बड़ी से बचने के लिए, एंटीजन को इंजेक्ट करने से पहले पर्टुसिस विष प्रशासित किया जाना चाहिए।
    3. बोर्डेटेला पर्टुसिस विष के एकल 100 μL यानी इंजेक्शन प्राप्त करने के लिए प्रत्येक माउस को अस्थायी रूप से एक अलग पिंजरे में स्थानांतरित करें।
  3. आईआरबीपी इमल्शन का चमड़े के नीचे इंजेक्शन
    1. इसके बाद, आईआरबीपी इमल्शन को चमड़े के नीचे इंजेक्ट करें। इस प्रक्रिया के लिए स्वास्थ्य और सुरक्षा नियमों के अनुसार सुरक्षा के साथ उचित रूप से दो पशु संचालकों की आवश्यकता होती है।
    2. एक प्रशिक्षित व्यक्ति को पिंजरे के शीर्ष पर माउस को हल्के से रोकें, उनके पेट को नीचे की ओर रखें, जबकि दूसरे प्रशिक्षित व्यक्ति गर्दन के पीछे एक तम्बू जैसी संरचना बनाने के लिए त्वचा को पिन करते हैं जहां सुई को उंगली और अंगूठे के बीच स्लॉट करने के लिए डाला जा सकता है।
      सावधानी: सुई स्टिक में चोट लगने का खतरा है।
    3. एक बार सुई की स्थिति के बाद, आईआरबीपी इमल्शन के 200 μL इंजेक्ट करें। सुई को हटाते समय, बाहर खींचने से पहले त्वचा को बंद करने के लिए सुई के सिर को घुमाएं और इमल्शन के रिफ्लक्स को रोकने के लिए इंजेक्शन साइट पर बाद में दबाव डालें।
      चेतावनी: इमल्शन को माउस की त्वचा या फर के साथ संपर्क नहीं करना चाहिए क्योंकि इससे जलन हो सकती है और अधिक गंभीर मामलों में, एक घाव विकसित हो सकता है। यदि ऐसा होता है, तो क्षेत्र को तुरंत पोंछा जाना चाहिए और 70% इथेनॉल का उपयोग करके अच्छी तरह से सुखाया जाना चाहिए।
      नोट: यदि अध्ययन के अंत में परीक्षा के लिए ड्रेनिंग लिम्फ नोड्स की आवश्यकता होती है, तो इंजेक्शन साइट अलग होगी। इस उदाहरण में, फ्लैंक के दोनों किनारों पर चमड़े के नीचे 100 μL इंजेक्ट करें। यह निकासी इंगुइनल लिम्फ नोड्स पर एक मजबूत प्रतिक्रिया उत्पन्न करेगा, जिसे कटाई के समय उत्पादित किया जा सकता है। हालांकि, यदि इच्छित परिणाम केवल ईएयू विकसित करना है, तो गर्दन के पीछे 200 μL का एक इंजेक्शन कई इंजेक्शन साइटों से असुविधा से बचने के लिए बेहतर है।

3. नैदानिक मूल्यांकन - माउस फंडस परीक्षा

नोट: विज़ुअलाइज़ेशन के लिए उपयोग किए जाने वाले फंडोस्कोप और डिस्कवर सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके उज्ज्वल-क्षेत्र लाइव इमेजिंग के माध्यम से फंडस परीक्षा का उपयोग करके नैदानिक रोग को स्कोर किया जाना है।

  1. रोग की शुरुआत (दिन 12-14) में, केटामाइन (50 मिलीग्राम / एमएल) और डोमिटर (मेडेटोमिडाइन; 1 मिलीग्राम / एमएल) दोनों के संयोजन का उपयोग करके सामान्य संज्ञाहरण के तहत चूहों को बेहोश करें। पतला 1-भाग डोमिटर; 1.5 भाग केटामाइन और 2.5 भाग बाँझ इंजेक्शन योग्य पानी, फिर 100 μL प्रति 30 ग्राम इंट्रापरिटोनियल रूप से इंजेक्ट करें। संज्ञाहरण के उपरोक्त संयोजन के लिए 1 एमएल बाँझ सिरिंज और 23 जी सुइयों का उपयोग करें।
  2. इसके बाद, यह सुनिश्चित करने के लिए माउस की निगरानी करें कि सभी सजगता खो गई है और यह उत्तेजनाओं के लिए अनुत्तरदायी है।
  3. आईपी इंजेक्शन प्राप्त करने के तुरंत बाद और जब माउस अभी भी एक स्क्रफ में रखा जाता है, तो पुतली फैलाव के लिए प्रत्येक आंख पर 1% ट्रॉपिकामाइड और 2.5% फेनिलफ्राइन शीर्ष पर लागू करें। दोनों पतला समाधानों के साथ कॉर्निया को पूरी तरह से कवर करने का लक्ष्य रखें। पुतली को पूरी तरह से पतला होने में कुछ मिनट लग सकते हैं।
  4. बाद में, आंखों के विस्कोटर्स मलहम पर उदारतापूर्वक लागू करें और आंख को पूरी तरह से चिकनाई और हाइड्रेटेड रखने के लिए इमेजिंग प्रक्रिया में बनाए रखें।
  5. इस बीच, सॉफ्टवेयर खोलें (जैसे, डिस्कवर), और ब्राइटफील्ड के तहत छवियों को कैप्चर करने के लिए फंडोस्कोप (जैसे, माइक्रोन) सेट करें। प्रत्येक व्यक्तिगत माउस को एक फ़ोल्डर आवंटित करें और प्रत्येक आंख के अनुसार आर या एल के साथ छवियों को लेबल करें।
  6. लाइव विज़ुअलाइज़ेशन के लिए एक उद्देश्य-निर्मित चरण पर माउस माउंट करें और रेटिना तक पूर्ण पहुंच के लिए माइक्रोस्कोप रखें।
  7. रोग का सटीक प्रतिनिधित्व प्राप्त करने के लिए, ऑप्टिक डिस्क के अलावा परिधि के सभी कोनों को कवर करते हुए, पूरे रेटिना क्षेत्र की छवियां लें। इसे प्राप्त करने के लिए, पूरे समय आंखों के टुकड़े को समायोजित करें। इमेजिंग प्रक्रिया के दौरान आंख को हर समय पूरी तरह से चिकनाई रहना महत्वपूर्ण है; एक स्थिर दर पर आंखों के मलहम को ऊपर उठाकर इसे सुनिश्चित करें।
  8. फ्लोरेसिन एंजियोग्राफी करने के लिए इस स्तर पर अनुभाग 4 (नीचे) देखें।
  9. एक बार जब सभी इमेजिंग पूरी हो जाती है, तो इंजेक्टेबल पानी में एनेस्थेटिक रिवर्सल एंटी-सेडेशन (5 मिलीग्राम / एमएल एंटीसेडान) को पतला करें और 0.1 मिलीग्राम / किग्रा पर प्रशासित करें। माउस को एक पिंजरे में वापस करें और वसूली तक गीले-भिगोए गए आहार तक पहुंच के साथ पूर्व-गर्म चटाई पर रखें। पूर्ण वसूली पूरे शरीर की गति और स्थिर चाल के साथ पिंजरे के चारों ओर चलने की विशेषता है, आमतौर पर कुछ घंटे लगते हैं।
  10. निर्दिष्ट प्रयोगात्मक समापन बिंदु (उदाहरण के लिए, दिन 21-23) पर, चरण 4.1-4.5 दोहराएं और पूरे रेटिना क्षेत्र की तस्वीरें लें, ऑप्टिक डिस्क और परिधि के सभी कोनों को कवर करें ताकि बीमारी का सटीक प्रतिनिधित्व हो सके।

4. फ्लोरेसिन एंजियोग्राफी

  1. इन जानवरों में पोत रिसाव को मापने के लिए, संज्ञाहरण के तहत, प्रत्येक माउस को गर्दन के पीछे चमड़े के नीचे 2% फ्लोरेसिन का इंजेक्शन दें और ऐसी स्थिति दें कि रेटिना लाइव छवि के बीच में केंद्रीकृत हो।
  2. फंडोस्कोप को 465-490 एनएम पर ब्लू लाइट उत्तेजना फिल्टर पर सेट करें। उत्तेजित फ्लोरेसिन से कैप्चर की गई रोशनी 520-530 एनएम के बीच है।
  3. 1.5 मिनट के बाद फ्लोरेसिन इंजेक्शन के बाद, प्रत्येक रेटिना की एक तस्वीर लें और 7 मिनट पर फिर से दोहराएं।
    नोट: इन घटनाओं के लिए समय महत्वपूर्ण है, यदि दोनों को पकड़ने में असमर्थ है तो बस एक आंख की छवि बनाएं।

5. नैदानिक रोग स्कोरिंग

  1. निम्नलिखित मानदंडों की गंभीरता पर नैदानिक मूल्यांकन का आधार: ऑप्टिक डिस्क सूजन, रेटिना वाहिका कफिंग, रेटिना ऊतक घुसपैठ और संरचनात्मक क्षति।
  2. इन मापदंडों में से प्रत्येक को 0 से 5 के पैमाने पर एक स्कोर प्रदान करें और सामूहिक कुल पूरी आंख के लिए नैदानिक रोग का प्रतिनिधि है, जिसमें प्रति आंख 20 का अधिकतम स्कोर प्राप्त किया जा सकता है। तालिका 1 का उपयोग स्कोरिंग मानदंडों के लिए एक गाइड के रूप में किया जा सकता है।

6. हिस्टोलॉजी और हिस्टोलॉजिकल स्कोरिंग

  1. गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था द्वारा चूहों को इच्छामृत्यु करने के बाद, पूरी आंख तक आसान पहुंच के लिए पलकों को अलग करके आंखों को अलग करें।
  2. इसके बाद, कक्षीय संयोजी ऊतक और ऑप्टिक तंत्रिका को पकड़ने के इरादे से ग्लोब के पीछे घुमावदार बल रखें। ग्लोब को निचोड़ने से बचने के लिए ध्यान रखें।
  3. निर्धारण के लिए, रेटिना डिटेचमेंट को कम करने के लिए आंख को कम से कम 15 मिनट के लिए 4% ग्लूटारल्डिहाइड में रखें, और फिर कम से कम 24 घंटे के लिए 10% फॉर्मलाडेहाइड में स्थानांतरित करें।
  4. पैराफिन में एम्बेडिंग करें, एक माइक्रोटोम पर सेक्शनिंग करें, और मानक प्रोटोकॉल के अनुसार धुंधला करें। किसी भी प्रकार के धुंधलापन के लिए 3-4 μm अनुभाग मोटाई की सिफारिश की जाती है।
  5. हेमेटॉक्सिलिन और ईओसिन (एच एंड ई) धुंधला होने के लिए मानक प्रोटोकॉल का उपयोग करके आंखों की हिस्टोलॉजिकल परीक्षा करें।
  6. रेटिना और कोरॉइड के भीतर प्रतिरक्षा कोशिका घुसपैठ की सीमा, रेटिना परतों के विघटन, ग्रैनुलोमा गठन की डिग्री और रेटिना डिटेचमेंट की सीमा के आधार पर, ईएयू स्कोरिंग के मानदंडों के अनुसार 0-4 के पैमाने पर स्कोर असाइन करें, जो रेटिना क्षति का संकेत देता है, जैसा कि पहले वर्णित है (अग्रवाल 2013) और तालिका 211 में संक्षेप ति किया गया है।

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Representative Results

इस प्रोटोकॉल में, हम आईआरबीपी से प्राप्त यूविटोजेनिक रेटिना पेप्टाइड के साथ चूहों को प्रतिरक्षित करके प्रयोगात्मक ऑटोइम्यून यूवाइटिस (ईएयू) के एक मॉडल को प्रेरित करने के लिए एक चरण-दर-चरण विधि का वर्णन करते हैं। व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले और आसानी से सुलभ दृष्टिकोणों को नियोजित करने वाली बीमारी का आकलन कवर किया जाता है, हालांकि ये अनन्य नहीं हैं और अन्य इमेजिंग तकनीकों द्वारा जोड़े जा सकते हैं, या आंशिक रूप से प्रतिस्थापित किए जा सकते हैं। सी 57बीएल / 6 जे चूहों में ईएयू के पहले संकेतों का पता टीकाकरण के दो सप्ताह बाद लगाया जा सकता है और पीक बीमारी तीन सप्ताह के भीतर पहुंच जाती है जैसा कि चित्र 1 में दिखाया गया है। रोग की प्रगति के दौरान फंडोस्कोपिक परिवर्तनों को भड़काऊ परिवर्तनों के रूप में वर्गीकृत किया जाता है, जिसमें प्रतिरक्षा कोशिकाओं और संरचनात्मक क्षति में घुसपैठ के आधार पर हिस्टोलॉजिकल परिवर्तनों के अलावा रेटिना ऊतक, संवहनी और ऑप्टिक डिस्क सूजन और रेटिना संरचनात्मक क्षति (चित्रा 2) शामिल हैं। इन नैदानिक और हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तनों को टीकाकरण के बाद 85 दिनों तक पता लगाया जा सकता है, और मूल्यांकन के लिए वर्गीकृत और स्कोर किया जा सकता है ताकि रोग की प्रगति का अध्ययन किया जा सके। गुणात्मक दृश्य स्कोरिंग में अनजाने पूर्वाग्रह से बचने के लिए, छवियों का मूल्यांकन एक से अधिक विशेषज्ञों द्वारा किया जाना चाहिए और स्कोरर्स को उपचार समूहों में अंधा करने की आवश्यकता होती है।

हम यहां दिखाते हैं कि नैदानिक और हिस्टोलॉजिकल स्कोरिंग सिस्टम (तालिका 1 और तालिका 2) वैज्ञानिकों को ईएयू गंभीरता को निर्धारित करने, उपचार की प्रभावकारिता को मान्य करने और दवा कार्रवाई के तंत्र का पता लगाने के लिए कैसे मार्गदर्शन करते हैं। संवहनी रिसाव भी मॉडल और मानव यूवाइटिस में एक पैथोलॉजिकल विशेषता है। हम इस मॉडल में बीमारी का आकलन करने के लिए एक और विधि के रूप में फ्लोरेसिन (चित्रा 3) के संवहनी रिसाव के उदाहरण दिखा रहे हैं।

Figure 1
चित्र 1. आईआरबीपी1-20 प्रेरित ईएयू में नैदानिक और हिस्टोलॉजिकल रोग की प्रगति की योजनाबद्ध समयरेखा। आईआरबीपी1-20 की घुसपैठ और प्रगति की शुरुआत को चिह्नित करने वाली एक समयरेखा ने ईएयू को चरम बीमारी की ओर प्रेरित किया। टीकाकरण से, नैदानिक बीमारी के पहले लक्षण, जैसा कि फंडोस्कोपिक इमेजिंग और हिस्टोपैथोलॉजिकल विश्लेषण द्वारा पता लगाया गया है, 12-14 दिनों के बीच पड़ता है। इन मापदंडों के अनुसार, बीमारी तब तक प्रगति जारी रखेगी, जब तक कि 21-23 दिन के आसपास चरम पर नहीं पहुंच जाता। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 2
चित्र 2. सी 57बीएल / 6 जे चूहों में आईआरबीपी1-20 प्रेरित ईएयू रोग के विभिन्न चरणों में हिस्टोलॉजिकल वर्गों के साथ सहसंबंधित प्रतिनिधि फंडोस्कोपिक छवियां। आईआरबीपी 1-20 पेप्टाइड के साथ प्रतिरक्षित एक ही जानवर से सी 57बीएल / 6 जे की नैदानिक फंडोस्कोपिक और संबंधित ऊतक छवियां। (ए और बी) स्वस्थ और सीएफए इंजेक्शन चूहों से प्राप्त आंखों के फंडोस्कोपिक चित्र और हिस्टोलॉजिकल खंड। रेटिना में सूजन का कोई संकेत नहीं है और संबंधित हिस्टोलॉजी अनुभाग संरक्षित रेटिना परतों को दिखाते हैं। (सी) टीकाकरण के 14 दिन बाद सी57बीएल/6जे माउस से प्राप्त आंखों की फंडोस्कोपिक छवि ईएयू के क्लासिक लक्षणों को प्रदर्शित करती है, जो रोग के प्रारंभिक चरण में गंभीर ऑप्टिक डिस्क सूजन के साथ प्रस्तुत होती है, संबंधित हिस्टोलॉजी प्रतिरक्षा कोशिकाओं को विट्रियस स्पेस में घुसपैठ करते हुए दिखाती है। (घ) टीकाकरण के 21 दिन बाद सी57बीएल/6जे माउस से प्राप्त आंखों की फंडोस्कोपिक छवियों में वाहिका कफ और प्रतिरक्षा आबादी में घुसपैठ के संकेत दिखाई देते हैं। हिस्टोलॉजी डेटा रेटिना फोल्डिंग (पीले तीर) द्वारा गंभीर संरचनात्मक परिवर्तनों को प्रदर्शित करता है। वी = पोत, ओ = ऑप्टिक डिस्क, आर = रेटिना, एल = लेंस, विट = विट्रियस, आईओ = सूजन ऑप्टिक डिस्क, आईवी = सूजन वाहिका, आईआर = सूजन रेटिना, आई = विट्रियस में घुसपैठ करने वाली कोशिकाएं, आरएफ = रेटिना सिलवटें। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें। 

Figure 3
चित्र 3. पीक रोग पर माइक्रोन III इमेजिंग सिस्टम का उपयोग करके ली गई फ्लोरोसेंट एंजियोग्राफी की प्रतिनिधि छवियां। सी 57बीएल /6 जे चूहों को 2% फ्लोरेसिन के साथ चमड़े के नीचे इंजेक्ट किया गया था और ट्रेसर के संचलन के बाद विभिन्न समय बिंदुओं पर छवियां ली गई थीं। (ए) सीएफए केवल 1.5- और 7 मिनट के बाद फ्लोरेसिन प्रशासन पर लिया गया माउस को नियंत्रित करता है। (बी) आईआरबीपी1-20 प्रतिरक्षित चूहों की प्रतिनिधि छवियां फ्लोरेसिन प्राप्त करने के बाद क्रमशः 1.5 और 7 मिनट ली गईं। सफेद तीर पोत रिसाव को इंगित करता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

अंक ऑप्टिक डिस्क रेटिना वाहिकाएं रेटिना ऊतक घुसपैठ संरचनात्मक क्षति
1 न्यूनतम सूजन 1-4 हल्के कफ 1-4 छोटे घाव या 1 रैखिक घाव रेटिना घाव या रेटिना शोष जिसमें 1/4 से 3/4 रेटिना क्षेत्र शामिल है
2 हल्की सूजन >4 हल्के कफिंग या 1-3 मध्यम कफिंग 5-10 छोटे घाव या 2-3 रैखिक घाव कई छोटे घावों (निशान) या <3 रैखिक घावों (निशान) के साथ पैन रेटिना शोष
3 मध्यम सूजन >3 मध्यम कफ >10 छोटे घाव या >3 रैखिक घाव पैन रेटिना शोष के साथ >3 रैखिक घाव या कॉन्फ्लुएंट घाव (निशान)
4 गंभीर सूजन >1 गंभीर कफ रैखिक घाव का संयोजन फोल्डिंग के साथ रेटिना डिटेचमेंट
5 * दिखाई नहीं देता है (सफेद बाहर या चरम अलगाव) * दिखाई नहीं देता है (सफेद बाहर या चरम अलगाव) * दिखाई नहीं देता है (सफेद बाहर या चरम अलगाव) * दिखाई नहीं देता है (सफेद बाहर या चरम अलगाव)

तालिका 1. ईएयू नैदानिक रोग की गंभीरता का मूल्यांकन करने के लिए पारंपरिक नैदानिक स्कोरिंग स्केल। आईआरबीपी1-20 के साथ प्रतिरक्षित चूहों में रोग की गंभीरता की सीमा का मूल्यांकन करने के लिए उपयोग किए जाने वाले मानदंडों को दर्शाने वाली तालिका। फंडस छवियों पर दिखाई देने वाले ऊपर उल्लिखित हॉलमार्क के अनुसार स्कोर आवंटित किए गए थे, प्रत्येक आंख को बीस में से कुल स्कोर दिया गया था। * घुसपैठ के आच्छादन के कारण और पीछे के कक्ष के अंदर रेटिना डिटेचमेंट का आकलन नहीं किया जा सकता है। जू एच, एट अल, 2008से अनुमति के साथ अनुकूलित तालिका।

श्रेणी कसौटी
0 कोई बदलाव नहीं
0.5 (ट्रेस) हल्के भड़काऊ सेल घुसपैठ। ऊतक क्षति नहीं
1 घुसपैठ; रेटिना सिलवटों और फोकल रेटिना डिटेचमेंट; कोरॉयड और रेटिना में कुछ छोटे ग्रैनुलोमा, पेरिवास्कुलिटिस
2 मध्यम घुसपैठ; रेटिना सिलवटों, टुकड़ियों और फोकल फोटोरिसेप्टर सेल क्षति; छोटे से मध्यम आकार के ग्रैनुलोमा, पेरिवास्कुलिटिस और वास्कुलिटिस
3 मध्यम से भारी घुसपैठ; डिटेचमेंट, मध्यम फोटोरिसेप्टर सेल क्षति के साथ व्यापक रेटिना फोल्डिंग; मध्यम आकार के ग्रैनुलोमैटस घाव; सबरेटिनल नियोवैस्कुलराइजेशन

तालिका 2. हिस्टोलॉजिकल रूप से स्कोरिंग ईएयू

रोग की हिस्टोपैथोलॉजिकल विशेषताओं के आधार पर ईएयू की गंभीरता का मूल्यांकन करने के लिए उपयोग किए जाने वाले मानदंडों को दिखाने वाली तालिका। एच एंड ई स्टेनिंग पर ऊपर उल्लिखित हॉलमार्क के अनुसार स्कोर आवंटित किए गए थे, प्रत्येक आंख को चार में से कुल स्कोर दिया गया था। अग्रवाल एट अल. 2013 11 की अनुमति से अनुकूलित तालिका।

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Discussion

प्रयोगात्मक पशु मॉडल रोग रोगजनन और नए चिकित्सीय प्रतिमानों के प्रीक्लिनिकल परीक्षण का अध्ययन करने के लिए आवश्यक उपकरण हैं। वर्तमान प्रोटोकॉल में, हमने इंट्राओकुलर भड़काऊ यूवाइटिस के एक प्रयोगात्मक मॉडल, उत्प्रेरण, निगरानी और स्कोरिंग ईएयू के लिए एक पद्धति पर चर्चा की है। इस ईएयू मॉडल में 95% से अधिक बीमारी की घटनाएं होती हैं जब सभी प्रक्रियाएं यहां उल्लिखित प्रोटोकॉल के अनुसार की जाती हैं, और इसके परिणामस्वरूप क्रोनिक, मोनोफैसिक ईयू का विकास होता है। इस घटना स्तर को प्राप्त करने के लिए, हम एंटीजन तैयारी और इमल्शन के इंजेक्शन के महत्व पर जोर देते हैं, जिनमें से दोनों ऊपर विस्तृत हैं। जानवरों में ईएयू की मुख्य विशेषताएं रेटिना और / या कोरॉइडल सूजन, रेटिना वास्कुलिटिस, फोटोरिसेप्टर विनाश और दृष्टि की हानि हैं, जिनमें से सभी मानव पश्चवर्ती यूवाइटिस12 की कई आवश्यक क्लिनिकोपैथोलॉजिकल विशेषताओं का प्रतिनिधित्व करते हैं। यूवाइटिस में शामिल बुनियादी सेलुलर और आणविक तंत्र की अधिकांश समझ प्रेरित ईएयू मॉडल से प्राप्त होती है जैसा कि यहां वर्णित है। ईएयू को चूहों13 और चूहों11 में रेटिना एंटीजन के साथ सक्रिय टीकाकरण द्वारा प्रेरित किया जा सकता है जो लिम्फोसाइटों द्वारा मान्यता प्राप्त हैं। ये रेटिना एंटीजन कई रूप लेते हैं; चूहों के लिए आईआरबीपी (चूहों के लिए) या रेटिना घुलनशील एंटीजन (एस-एजी)। सी 57बीएल /6 जे पृष्ठभूमि पर ईएयू को प्रेरित करना रोग का एक अधिक पुराना रूप उत्पन्न करता है, जिसमें टीकाकरण के तीन सप्ताह बाद चरम विकृति देखी जाती है। तुलनात्मक रूप से, बी 10 आर III पृष्ठभूमि14 में रेटिना एंटीजन लागू करना ईएयू के एक तीव्र-मोनोफैसिक और चिकित्सकीय रूप से गंभीर रूप को प्रेरित करता है जहां पीक पैथोलॉजी आमतौर पर प्रेरण के दो सप्ताह के भीतर प्रस्तुत होती है, और रोग सप्ताह 3 तक कम हो जाता है।

सी 57बीएल / 6 जे चूहों में विभिन्न आईआरबीपी एपिटोप्स का परीक्षण किया गया है और आईआरबीपी1-20 पेप्टाइड उच्च घटना और गंभीरता के स्तर के साथ एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मॉडल साबित हुआ है। हाल ही में आईआरबीपी के एक नए यूवाइटोजेनिक एपिटोप, मानव आईआरबीपी के एमिनो एसिड अवशेष 651 से 670 को उच्च नैदानिक घटनाओं और गंभीर रोग अभिव्यक्ति11 के साथ ईएयू को प्रेरित करने के लिए रिपोर्ट किया गया है और वैज्ञानिक उद्देश्यों को पूरा करने के लिए वरीयता में उपयोग किया जा सकता है। चूंकि आंत कॉमेंसल माइक्रोबायोटा का प्रभाव और ऑटोरिएक्टिव टी सेल रिसेप्टर्स (टीसीआर) की सक्रियता को विभिन्न एंटीजन15 को लागू करते समय बीमारी की शुरुआत में हस्तक्षेप करने के लिए जाना जाता है, इसलिए हम इस क्षेत्र में शुरुआती लोगों को एक विश्वसनीय मॉडल प्राप्त करने के लिए300-500 μg के बीच 300-500 μg के बीच टाइटरेट खुराक पर या तो HIRBP1-20 या hIRBP 651-670 पेप्टाइड्स का उपयोग करने की सलाह देते हैं। दरअसल, इस मॉडल में परिवर्तनशीलता को आवास प्रणालियों और माइक्रोबायोम के बीच अंतर के महत्व को उजागर करने वाली रिपोर्टों के साथ कहीं और प्रलेखित किया गया है जो रोग की गंभीरता औरघटनाओं को प्रभावित कर सकते हैं। इस प्रकार, अधिक या कम पेप्टाइड एंटीजन और पर्टुसिस विष की आवश्यकता हो सकती है।

कई अन्य मॉडल हैं जिनके लिए हमारे वर्णित विश्लेषण किए जा सकते हैं। इनमें सहज यूवाइटिस शामिल है जो आईआरबीपी टी सेल रिसेप्टर (टीसीआर) ट्रांसजेनिक (आर 161 एच) चूहों में प्रगति करता है जहां ओकुलर सूजन16 वर्ष की आयु के 5-6 सप्ताह तक विकसित होती है। ईएयू को यूवाइटोजेनिक प्रभावक सीडी 4 + टी कोशिकाओं को स्थानांतरित करके दत्तक रूप से प्रेरित किया जा सकता है। सक्रिय, आईआरबीपी-विशिष्ट सीडी 4 + टी कोशिकाओं को प्राइमेड चूहों से प्राप्त किया जा सकता है, जिसका उपयोग प्रभावक कोशिकाओं 3,11 के स्रोत के रूप में किया जा सकता है। यह मॉडल इंड्यूसेबल मॉडल में सीएफए का उपयोग करने की जटिलताओं से बचते हुए रोग के प्रभावक चरण का प्रतिनिधित्व करता है।

इसके अलावा, अन्य भड़काऊ रोगों की जांच के लिए उपयुक्त उपकरण के रूप में ओकुलर भड़काऊ मॉडल का उपयोग करने के कई फायदे हैं, विशेष रूप से, प्रभावक टीएच 1 और टीएच 17 उप-समूह विकृति वाले। इस मॉडल का उपयोग करने के मुख्य लाभ रोग के विकास और प्रगति की निगरानी के लिए गैर-इनवेसिव और मात्रात्मक तरीके हैं, जो फंडोस्कोपी और एंजियोग्राफी हैं। ये गैर-इनवेसिव इमेजिंग सिस्टम न्यूरोनल ऊतकों तक आसान पहुंच की अनुमति देते हैं, जो अन्यथा सुरक्षात्मक शारीरिक बाधाओं के पीछे छिपे होंगे। रोग की प्रगति की निगरानी के लिए अतिरिक्त तरीकों में ओसीटी इमेजिंग का अनुप्रयोग शामिल है, जो सेलुलर घुसपैठ का पता लगाने में फंडोस्कोपिक इमेजिंग की तुलना में अधिक संवेदनशील है, खासकर ईएयू शुरुआत के शुरुआती चरण में। तकनीक रेटिना के बहु-परत क्रॉस- और क्षैतिज-अनुभागीय विज़ुअलाइज़ेशन को अनुदैर्ध्य रूप से और गैर-इनवेसिव फैशन में अनुमति देती है। विवो में ओसीटी इमेजिंग रेटिना मोटाई पर जानकारी जोड़ती है जिसे फंडोस्कोपिक और हिस्टोलॉजिकल परीक्षाओं द्वारा प्राप्त नहीं किया जा सकताहै। तेजी से, और भी परिष्कृत गैर-इनवेसिव इमेजिंग तकनीकों की उपलब्धता, जैसे कि अनुकूली प्रकाशिकी स्कैनिंग लेजर नेत्र विज्ञान और मल्टीमॉडल इमेजिंग टूल छोटे कृन्तकों में इस बीमारी की जांच करने की हमारी क्षमता को आगे बढ़ाएंगे। इसके अलावा, फ्लो साइटोमेट्री जैसी तकनीकों का उपयोग करके इम्यूनोफेनोटाइप्स के गहरे विश्लेषण के लिए निवासी और घुसपैठ करने वाली सेल आबादी को विच्छेदित और अलग करने की क्षमता, व्यावहारिक जानकारी देने के लिए महान अवसर प्रदान करती है।

फंडोस्कोपी 8,9,18 से प्राप्त नैदानिकमानदंडों के आधार पर कुछ स्थापित स्कोरिंग सिस्टम हैं। जबकि ये नेत्र विज्ञान अनुसंधान केंद्रों के बीच थोड़ा भिन्न होते हैं, सभी विश्वसनीय होते हैं, हिस्टोपैथोलॉजिकल विशेषताओं के साथ सहसंबंधित होते हैं और रोग की गंभीरता को सटीक रूप से प्रतिबिंबित करने में सक्षम होते हैं। वर्तमान अध्ययन में, हम जू एट अल.8 द्वारा विकसित स्कोरिंग सिस्टम का उल्लेख करते हैं। यह प्रणाली नैदानिक माप मापदंडों की अधिक संख्या के साथ अधिक विस्तृत मूल्यांकन दृष्टिकोण प्रदान करती है। इसमें 20 का अधिकतम स्कोर शामिल है जो अधिकतम 5 तक सीमित वैकल्पिक प्रणालियों की तुलना में स्कोरिंग के लिए एक व्यापक खिड़की का परिचय देता है। यह चिकित्सीय दृष्टिकोण के भीतर आगे की खोज के लिए अधिक महत्वपूर्ण है। हालांकि, मापदंडों के ऐसे परिष्कृत और विस्तृत सेट का उपयोग करते समय ऑपरेटर त्रुटि को कम करना महत्वपूर्ण है और ऑपरेटर के सावधानीपूर्वक प्रशिक्षण और व्याख्या के स्वतंत्र सत्यापन की आवश्यकता हो सकती है।

यहां, हम महिला C57BL/6 चूहों में EAU को प्रेरित करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं क्योंकि महिलाओं की बढ़ती घटनाएं हैं: पुरुष 1.4: 1 नैदानिक सेटिंग में यूवाइटिस के साथ प्रस्तुत होते हैं। फिर भी, ऑटोइम्यून बीमारी को प्रेरित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले चूहों के लिंग पर विचार किया जाना चाहिए क्योंकि यह साइटोकिन परिवेश11 को प्रभावित कर सकता है, और चिकित्सीय हस्तक्षेप का जवाब देने के तरीके में महत्वपूर्ण अंतर भी प्रकट कर सकता है। एक और विचार रोग प्रेरण पर चूहों की उम्र है। उदाहरण के लिए, हमने B10RIII चूहों में संवेदनशीलता की आयु-निर्भरता का अध्ययन किया है और निष्कर्ष निकाला है कि जीवन के 8 सप्ताह से अधिक चूहों में ईएयू (हमारे समूह से अप्रकाशित अध्ययन) की कम घटनाएं हैं।

अंत में, इंट्राओकुलर रोग के पशु मॉडल ने मानव पश्चवर्ती यूवाइटिस का अध्ययन करने के लिए एक अमूल्य उपकरण प्रदान किया है और सीएसए जैसे नए उपचारों के विकास की सुविधा प्रदान की है। हालांकि, कोई भी पशु मॉडल अपने आप में मानव यूवाइटिस के पूर्ण स्पेक्ट्रम को पुन: उत्पन्न नहीं करता है, क्योंकि प्रत्येक में अद्वितीय विशेषताएं होती हैं जो इसे रोग के विशेष पहलुओं का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त बनाती हैं। यह ईएयू मॉडल आईआरबीपी पेप्टाइड के आवेदन के माध्यम से ऑटोइम्यूनिटी से प्रेरित होता है जो सहायक दवाओं के साथ पूरक होता है जो जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को ट्रिगर करता है। हालांकि, यह ज्ञात नहीं है कि मनुष्यों में पश्चवर्ती यूवाइटिस के सभी रूप ऑटोइम्यून हैं और यदि एंटीजेनिक मिमिक्री एक ट्रिगरिंग कारक है। इसके अलावा, यह स्पष्ट नहीं है कि मानव यूवाइटिस को ट्रिगर करने में संक्रमण के साथ कोई संबंध है या नहीं। बहरहाल, यहां वर्णित मॉडल एक उपयोगी और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य जेनेरिक मॉडल है जिसका उपयोग एटियोलॉजी, रोगजनन और इस दृष्टि-धमकी देने वाली बीमारी के उपचार के बारे में उपयोगी जानकारी एकत्र करने के लिए किया जा सकता है।

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Disclosures

लेखकों के पास इस काम के साथ घोषित करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है।

Acknowledgments

जेजी को सीबी का समर्थन करने के लिए यूसीएल इम्पैक्ट स्टूडेंटशिप और रोजट्रीज ट्रस्ट फंडिंग से सम्मानित किया गया था। वीसी को अकारी थेराप्यूटिक्स इंक से एक शोध सहयोगी अनुदान प्राप्त हुआ था। हम यूसीएल इंस्टीट्यूट ऑफ ओप्थाल्मोलॉजी, बायोलॉजिकल सर्विस यूनिट विशेष रूप से सुश्री एलिसन ओ'हारा और उनकी टीम को उनके तकनीकी समर्थन के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
antisedan ZOETIS, USA for waking up
Complete Freund’s Adjuvant; CFA Sigma, UK F5881 for immunisation 
Domitor Orion Pharma, Finland for anesthesia
Flourescein Sigma, UK F2456 for Angiography
IRBP1-20 Chamberidge peptide, UK peptide;antigen 
Ketamine Orion Pharma, Finland for anesthesia
Micron III Phoenix Research, USA for fundoscopy
Mouse Serum Sigma, UK M5905 for immunisation 
Mycobacterium terberculosis Sigma, UK 344289 for immunisation 
Pertussis Toxin Sigma, UK P2980 for immunisation 
phenylephrine hydrochloride 2.5%  Bausch & Lomb UK  PHEN25 for dilation 
Tropicamide 1% SANDOZ for dilation 
Viscotears WELDRICKS Pharmacy, UK 2082642 for eye lubrication

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References

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इम्यूनोलॉजी और संक्रमण अंक 179 प्रायोगिक ऑटोइम्यून यूवाइटिस सी 57बीएल / 6 जे सूजन नेत्र रोग टीकाकरण फंडोस्कोपी एंजियोग्राफी।
प्रायोगिक ऑटोम्यून्यून यूवाइटिस: एक इंट्राओकुलर भड़काऊ माउस मॉडल
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Bowers, C. E., Calder, V. L.,… More

Bowers, C. E., Calder, V. L., Greenwood, J., Eskandarpour, M. Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model. J. Vis. Exp. (179), e61832, doi:10.3791/61832 (2022).

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