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Artigo de método

Modelo de transplante de hindlimb heterotópico parcial em ratos

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DOI:

10.3791/62586

9 de junho de 2021

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Este artigo apresenta um protocolo de transplante de retalho osteomyocutâneo heterotópico em ratos e seus resultados potenciais no acompanhamento a médio prazo.

Resumo

As alotransplantações compostas vascularizadas (VCA) representam a opção de reconstrução mais avançada para pacientes sem possibilidades cirúrgicas autólogas após um defeito complexo tecidual. Os transplantes de rosto e mão mudaram a vida dos pacientes desfigurados, dando-lhes um novo órgão social estético e funcional. Apesar dos resultados promissores, o VCA ainda é pouco executado devido a comorbidades de imunossupressão ao longo da vida e complicações infecciosas. O rato é um modelo animal ideal para estudos in vivo que investigam vias imunológicas e mecanismos de rejeição de enxertos. Ratos também são amplamente utilizados em novas técnicas de preservação de enxerto de tecido composto, incluindo estudos de perfusão e criopreservação. Os modelos utilizados para VCA em ratos devem ser reprodutíveis, confiáveis e eficientes com baixa morbidade e mortalidade pós-operatória. Os procedimentos heterotópicos de transplante de membros preenchem esses critérios e são mais fáceis de realizar do que transplantes ortotópicos de membros. Dominar modelos microcirúrgicos de roedores requer experiência sólida em microcirurgia e cuidados com animais. Aqui é relatado um modelo confiável e reprodutível de transplante de retalhos heterotópicos parciais em ratos, os desfechos pós-operatórios e os meios de prevenção de possíveis complicações.

Introdução

Nas últimas duas décadas, o VCA evoluiu como um tratamento revolucionário para pacientes que sofrem desfiguração grave, incluindo face1, amputações de membros superiores2,peniano3e outros defeitos complexos do tecido4,5. No entanto, as consequências da imunossupressão ao longo da vida ainda dificultam uma aplicação mais ampla dessas complexas cirurgias reconstrutivas. Pesquisas básicas são cruciais para melhorar as estratégias anti-rejeição. O aumento do tempo de preservação do VCA também é essencial para melhorar a logística de transplant....

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Protocolo

Todos os animais receberam cuidados humanos de acordo com o Guia do NIH para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório. O Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC-protocol 2017N000184) e o Escritório de Revisão de Cuidados e Uso animal (ACURO) aprovaram todos os protocolos animais. Ratos machos de raça Lewis (250-400 g) foram usados para todos os experimentos.

1. Cirurgia

  1. Anestesiar os ratos de Lewis usando inalação de isoflurano. Induzir anestesia com 5% de isoflurane na câmara de indução, e manter anestesia com 1,5-3% de inalação de isoflurane através de um cone respiratório.
  2. Aplique lubrificante ocular....

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Resultados

Neste estudo de operador único, foram realizados 30 transplantes de membros parciais heterotópicos sintéricos. O sucesso foi definido no pós-operatório 21 como a ausência de falha do VCA ou complicações que requerem eutanásia. A evolução normal do enxerto está representada na Figura 3. A duração média para aquisição parcial de membros e inset de enxerto no receptor foi de 35 e 105 min, respectivamente; a média de isquemia foi de 105 min. Durante o acompanhamento, ocorreram dois tipos de comp.......

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Discussão

Modelos ortotópicos de transplante de membros em roedores foram descritos na literatura15,16,17; no entanto, eles requerem uma reparação nervosa, recolocação muscular, e uma osteossíntese perfeita do fêmur, o que pode ser um passo muito difícil. Esses modelos também estão associados a uma maior taxa de morbidade e mortalidade em roedores14, especialmente no seguimento de curto prazo, pois a recuperação de.......

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Divulgações

Os autores não têm revelações.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado pelo Escritório do Secretário Adjunto de Defesa para Assuntos de Saúde através do Programa de Pesquisa Médica Dirigido pelo Congresso sob o Prêmio Nº. W81XWH-17-1-0680. Opiniões, interpretações, conclusões e recomendações são dos autores e não são necessariamente endossadas pelo Departamento de Defesa.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
24 GA angiocateterBD Insyte Autoguard381412
4-0 sutura monofilamento preto não absorvívelEthicon1667Usado para suturar o E-colar na parte de trás do pescoço
4-0 sutura Revestida Vicryl Plus AntibacterianaEthiconVCP496
Adson Tissue Forceps, 11 cm, 1 x 2 Dentes com Plataforma de AmarraçãoASSIASSI.
Cabos bipolaresASSI228000C
Monofilamento de poliamida preta USP 10-0, 4 mm 3/8cAROSurgicalT04A10N07-13Usado para realizar as anastomoses microvasculares
Buprenorfina HClPharmaceutical, Inc42023-179-01
Pinça de dilataçãoFerramentas de ciências finas (FST)18131-12
Tesoura de dissecação 15 cm, cabo redondo 8 mm de diâmetro, lâmina cônica reta e delgada 7 mm, padrão LipshultzASSIASSI.
Micro Grampos Duplos 5,5 x 1,5 mmFerramentas de ciências finas (FST)18040-22
Colar elizabetanoBraintree ScientificEC-R1
Fórceps 13,5 cm de comprimento, Cabo Plano, 9 mm de largura Pontas Retas 0,1 mm de diâmetro (x2)ASSIASSI. JFL31
Halsey Micro Needle HolderFerramentas de ciência fina (FST)12500-12
Heparin Lock Flush Solution, USP, 100 unidades/mLBD PosiFlush306424
IsofluranoPatterson Veterinary14043-704-06
Pinça Bipolar para Joalheiros Antiaderente 11 cm, ponta reta e pontiaguda, diâmetro da ponta de 0,25 mmASSIASSI.
Lone Star Elastic StaysCooperSurgical3314-8GUsado para retrair o ligamento inguinal para dissecção de vasos femorais
Lone Star Auto-retentoresCooperSurgical3301G
Micro-Mosquito HemostatsFerramentas de ciência fina (FST)13010-12Usado para retrair a almofada de gordura inguinal distalmente
Porta-agulhas, cabo redondo de 15 cm, diâmetro de 8 mm, mandíbula curva superfina de 0,2 mm de diâmetro da ponta, sem travaASSIASSI. B1582
Sutura de Nylon Monolfilamento Preto 8-0, 6,5 mm 3/8cEthilon2808GUsado para ligar ramos colaterais nos vasos femorais
Tesouras de osso deslocadasFerramentas de ciência fina (FST)16101-10
S& T Grampos vasculares 5,5 x 1,5 mmFerramentas de ciências finas (FST)00398-02
Tesouras WaltonFerramentas de ciências finas (FST)14077-09
ATK26426SAS15RVLBPNS11223

Referências

  1. Lanteiri, L., et al. Feasibility, reproducibility, risks and benefits of face transplantation: a prospective study of outcomes. American Journal of Transplantation. 11 (2), 367-378 (2011).
  2. Park, S. H., Eun, S. C., Kwon, S. T.

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Reimpressões e permissões

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