Summary
该协议的目的是使用基质辅助激光解吸/电离（MALDI）质谱成像，为小组织（如 果蝇 脑）中的脂质和代谢物分析提供适当的样品制备的详细指导。
Abstract
脂质分析或脂质组学是一种成熟的技术，用于研究细胞或组织的整个脂质含量。从脂质组学获得的信息对于研究参与发育，疾病和细胞代谢的途径很有价值。许多工具和仪器都有助于脂质组学项目，最值得注意的是质谱和液相色谱技术的各种组合。基质辅助激光解吸/电离质谱成像（MALDI MSI）最近已成为一种强大的成像技术，可以补充传统方法。这种新技术提供了关于组织区室内脂质空间分布的独特信息，这在以前是没有使用过度修饰的情况下无法实现的。MALDI MSI方法的样品制备至关重要，因此是本文的重点。本文对嵌入在最佳切割温度化合物（OCT）中的大量 果蝇 脑进行快速脂质分析，为通过MALDI MSI制备脂质分析或代谢物和小分子分析的小组织提供了详细的方案。
Introduction
脂质参与广泛的生物过程，根据其结构多样性可大致分为五类：脂肪酸，三酰基甘油（TAGs），磷脂，甾醇脂质和鞘脂1。脂质的基本功能是为生物过程（即TAG）提供能量来源并形成细胞膜（即磷脂和胆固醇）。然而，脂质在发育和疾病中的其他作用已被注意到，并且在生物医学领域已被广泛研究。例如，报告显示，不同长度的脂肪酸可能具有独特的治疗作用。短脂肪酸链可以参与针对自身免疫性疾病的防御机制，中等长度的脂肪酸链产生可以减轻癫痫发作的代谢物，长脂肪酸链产生可用于治疗代谢紊乱的代谢物2。在神经系统中，神经胶质细胞衍生的胆固醇和磷脂已被证明对突触发生至关重要3，4。其他类型的脂质在医疗应用中显示出前景，包括用于药物输送系统的鞘脂和用于支持免疫系统的糖脂5，6。脂质在生物医学领域的众多作用和潜在的治疗应用使得脂质组学-细胞脂质的通路和相互作用的研究-成为一个关键且日益重要的领域。
脂质组学利用分析化学来大规模研究脂质组。脂质组学中使用的主要实验方法基于质谱（MS）结合各种色谱和离子淌度技术7，8。MS在该领域的使用是有利的，因为它具有高特异性和敏感性，获取速度以及（1）检测即使在低水平和瞬时水平下也发生的脂质和脂质代谢物的独特能力，（2）在单个实验中检测数百种不同的脂质化合物，（3）识别以前未知的脂质，以及（4）区分脂质异构体。在MS的发展中，包括解吸电喷雾电离（DESI），MALDI和二次离子质谱（SIMS），MALDI MSI已成为一种强大的成像技术，通过提供有关组织隔室内脂质空间分布的独特信息来补充传统的基于MS的方法9，10。
脂质组学的典型工作流程包括样品制备、使用质谱技术进行数据采集和数据分析11.对样品中脂质和代谢物的研究导致了了解生物体代谢过程的生理和病理状况的技术的出现。虽然了解生物相互作用很重要，但脂质和代谢物的敏感性使它们难以在没有染料或其他修饰的情况下成像和鉴定。代谢物水平或分布的变化可能导致表型变化。用于代谢组学分析的一种工具是MALDI MSI，这是一种无标记 的原位 成像技术，能够同时检测数百个分子。MALDI成像允许样品中代谢物和脂质的可视化，同时保持其完整性和空间分布。以前的脂质分析技术涉及使用放射性化学物质单独绘制脂质图，而MALDI成像则放弃了这一点，并允许同时检测一系列脂质。
脂质代谢和体内平衡在细胞生理学中起着重要作用，例如神经系统的维持和发展。神经系统脂质代谢的一个重要方面是神经元和神经胶质细胞之间的脂质穿梭，其由分子载体脂蛋白介导，包括极低密度脂蛋白（VLDL），低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）12。脂蛋白含有载脂蛋白（Apo），如ApoB和ApoD，其功能是脂质货物的结构块和脂蛋白受体的配体。脂质的神经元 - 神经胶质细胞串扰涉及多个参与者，例如神经胶质细胞衍生的ApoD，ApoE和ApoJ，以及它们的神经元LDL受体（LDLRs）13，14。在 果蝇中，ApoB家族的成员阿波利波弗林是主要的血红素脂质载体15。载脂蛋白具有两个密切相关的脂蛋白受体（LpR），LpR1和LpR2，它们是哺乳动物LDLR15，16的同源物。在以前的研究中，发现星形胶质细胞分泌的脂质细胞分泌的胶质拉扎里洛（GLaz）是人ApoD的 果蝇 同源物，其神经元受体LpR1可以合作介导神经元 - 胶质细胞脂质穿梭，从而调节树突形态发生17。因此，据推测，LpR1的丢失会导致 果蝇 大脑中整体脂质含量的降低。MALDI MSI将是分析 LpR1−/− 突变型果蝇脑和野生型 果蝇 脑小组织中脂质含量的合适工具，如本研究所示。
尽管MALDI MSI越来越受欢迎，但该仪器的高成本和实验复杂性经常阻碍其在单个实验室中的实施。因此，大多数MALDI MSI研究都是使用共享的核心设施进行的。与 MALDI MSI 的其他应用一样，仔细的脂质组学样品制备过程对于获得可靠的结果至关重要。然而，由于样品载玻片制备通常在单个研究实验室进行，因此MALDI MSI采集可能存在差异。为了解决这个问题，本文旨在为MALDI MSI测量之前的小生物样品的样品制备提供详细的方案，例如11，17，17，使用对一大群成年果蝇脑进行脂质分析。然而，一些磷脂类和大多数小代谢物在负离子模式下通过MALDI成像被有利地检测到，这在前面11中已经描述过。因此，通过这两个示例研究，我们希望提供各种组合的详细样品制备方案：独立式大组织与包埋的小组织，解冻安装与暖玻片安装，以及正离子模式与负离子模式。
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Protocol
1. 飞头嵌入
注意：整个过程大约需要45-60分钟。
- 准备具有平坦表面的最佳切削温度化合物（OCT化合物）载物台。
- 将OCT加入塑料冷冻模具（15 mm x 15 mm x 5 mm）至冷冻模型深度的一半，避免形成气泡。将模具放在平坦的表面上几分钟，然后将其转移到干冰上。
- 将冷冻模具平放在干冰上，让OCT形成平坦均匀的表面。等到OCT在模具中完全凝固。立即使用冷冻的OCT阶段或将其储存在-80°C。
- 使用CO 2（即CO2垫）麻醉成虫。
- 准备一个包含实验室湿巾的培养皿。用水润湿部分湿巾，以减少静电。保持湿巾一半湿，一半干。
- 在解剖范围1下，使用镊子切割飞头。每次收集4-5个头，并将它们放在实验室擦拭的干燥区域。
注意：收集4-5个头需要〜2分钟。
- 将OCT阶段从干冰转移到解剖范围。
- 将OCT载物台从干冰移至显微镜2，立即将头部转移到OCT载物台，并快速排列，这需要约30秒才能避免OCT融化。在每个飞脑周围留出约1毫米的空白空间，以确保从OCT获得足够的支撑，并从块的边缘留出4-5毫米的空白空间，以提供足够的空间来处理该部分。如果长鼻太长，请取下尖端;如果不是太长，请保持完整。将OCT阶段放回干冰上，让它保持约3分钟，以确保OCT阶段保持冻结和坚固。
- 当OCT阶段回到干冰上并等待凝固时，收集另一轮头部。重复步骤1.2和1.3，将其他样品转移到载物台的剩余空间上。
注意：通常为每个基因型准备八个头，并且在此实验室的一个OCT阶段使用四个基因型。 - 并排使用两台解剖显微镜，以避免改变焦点并增加在OCT载物台上转移和排列头部所需的时间，并降低OCT载物台熔化的风险。
- 在所有飞头对齐后，让OCT舞台在干冰上再放置5-10分钟。
- 将OCT载物台从干冰中取出，将其放在平坦的表面（工作台）上，然后快速加入大量的OCT化合物以覆盖所有样品并填充整个冷冻模具，这需要〜3秒。
- 立即将冷冻转回干冰，并冷冻含有包埋组织的整个OCT块。让OCT舞台在干冰上再坐5-10分钟。在冷冻模型的边缘标记样品。
- 将冷冻样品储存在−80°C，直到准备好切片。
2. 冷冻切片组织
注意：处理氧化铟锡（ITO）玻片时，请始终戴上手套以避免组织污染。还建议佩戴口罩，以避免直接在滑梯上呼吸。
- 通过使用设置为电阻的电压表测试ITO载玻片的电导率来确认ITO涂层的一面。用电阻测量值标记一侧作为粘附组织的一侧。标记它并始终在载玻片底部设置实验室湿巾，以避免载玻片污染。
- 让组织在低温恒温器室中平衡30-45分钟。
- 为避免OCT熔化，请提前将所有必要的工具（如镊子和薄头的艺术家刷）放入低温恒温器室中以进行预冷。
- 清洁低温恒温器，优选用70%乙醇。擦拭辊板和舞台，然后取下用过的刀片。在切片开始之前，使用额外的清洁湿巾以确保乙醇已经蒸发并且所有表面都是干燥的。
- 根据组织的类型调整低温恒温器室和标本头的温度（例如，在该协议中，肝脏为−14°C，肌肉为−20°C，皮肤为−25°C，10;-18°C为蝇头）。
- 使用OCT将组织安装到标本架上，小心使用足够的OCT来覆盖OCT块的底部，并将块尽可能平整地安装。
- 在舞台上放置一个干净的刀片并锁定它。根据需要将试样的头部朝向载物台，以达到所需的切割角度。
- 将标本块放置在所有基因型/处理组垂直于刀片的方向。
注意：这确保了切割平面的一致性，并避免了来自不同组的交叉污染。如果切割不同的组织块，请在样品之间切换到新的刀片，以防止交叉污染。
- 将标本块放置在所有基因型/处理组垂直于刀片的方向。
- 开始切割厚片（50-100μm），直到找到感兴趣的区域（例如，大脑的所需区域）。
- 不断用预冷的艺术家刷子刷掉多余的作品，以保持舞台清洁。
- 一旦达到所需区域，将切片的厚度更改为10-12μm。
- 根据需要稍微调整腔室温度。例如，如果切片容易剥落或脱落，请设置更高的温度。
注意：OCT块的推荐温度为−18°C。
- 根据需要稍微调整腔室温度。例如，如果切片容易剥落或脱落，请设置更高的温度。
- 仔细收集所需的部分并将其粘附在ITO幻灯片上。在低温恒温器室中执行此操作。
- 取一张室温ITO载玻片并将其放在切片上，轻轻快速地接近切片，使切片粘附在载玻片上，而不会在低温恒温器载物台上留下痕迹。
注：OCT 将熔化并附着在载玻片上。
- 取一张室温ITO载玻片并将其放在切片上，轻轻快速地接近切片，使切片粘附在载玻片上，而不会在低温恒温器载物台上留下痕迹。
- 将载玻片放在机架或实验室中，在低温恒温器外的多个部分集合之间擦拭。
- 如果需要对同一队列的不同样品进行比较，请将来自多个样品的切片放在单个载玻片上，以便同时进行分析和最小化变异。如有必要，可分开放置两张载玻片，因为 MALDI 靶架可在一次运行中容纳两张载玻片。
- 将真空箱中的载玻片运输到以干燥剂为底层的干燥器。在真空下干燥载玻片30-60分钟。
注意：或者，如果实验室没有配备真空干燥器，则应在整个过程中将载玻片保持在-20°C，直到在24小时内储存在-80°C或运输在干冰上以避免脂质或代谢物的恶化。 - 继续进行基质沉积。使用甲醇/水（70/30，v / v）中的2，5-二羟基苯甲酸（DHB）作为基质。
- 如果载玻片没有立即运行，请将载玻片储存在-80°C（苍蝇脑切片长达1个月，啮齿动物脑切片长达6个月），或者立即将样品运送到具有足够干冰的MALDI核心设施。为了获得最佳的存储和运输效果，请将载玻片放入载玻片运输车中，并用蜡膜牢固地密封开口。用拉链袋密封，将其放入另一个装有干燥剂的拉链袋中，并在外部贴上标签。
注：请参阅前面的工作，了解玻片扫描、基质沉积和MALDI成像程序11的后续步骤。 - 使用自动 HTX M5 基质喷雾器和甲醇/水 （70/30， v/v） 中 40 mg/mL DHB 溶液进行基质沉积。以 0.12 mL/min 的定制流速和 85 °C 的喷嘴温度喷洒基质 10 次。使用 10 psi 的 N2 气体压力。
注意：如果喷雾器中的 N2 气体压力降低到 5 psi 以下，喷雾器中的安全机制将立即关闭加热器，以避免以 1，300 mm/min 的喷雾速度、2 mm 的轨道间距、3 L/min 的流速和 40 mm 的喷嘴高度对喷雾器造成任何损坏。 - 在正离子模式下使用MALDI飞行时间（TOF）MS仪器（参见 材料表）获取m / z 50-1，000质量范围内的质谱。
- 要校准仪器，将0.5μL红磷乳液在乙腈中点到ITO载玻片上，并使用其光谱通过应用二次校准曲线在50-1，000 m / z质量范围内校准仪器2。
- 将激光光斑直径设置为 “中”，因为它是 40 μm 光栅宽度的调制光束轮廓，并通过以每个阵列位置 1，000 Hz 的激光重复率对 500 次射击求和来收集成像数据。
- 使用软件（参见 材料表）记录和处理光谱数据。使用均方根（RMS）归一化进行成像数据分析，以生成箱宽为±0.10 Da.的离子图像，使用软件对齐同一实验中OCT和脑组织的光谱，以评估OCT的重叠峰和离子抑制干扰（补充图S1）。实验结束后，通过苏木精和曙红（H&E）染色处理含有组织样品的MALDI载玻片，如前所述11。
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Representative Results
假设星形胶质细胞分泌的脂质细胞分泌的脂质体Lazarillo（GLaz）的神经元受体LpR1的丢失是人类ApoD的 果蝇 同源物，能够导致 果蝇 大脑中总脂质含量的降低。为了测试这一点，MALDI MSI用于分析 LpR1−/− 突变型 果蝇 大脑中的脂质，这将在下面详细阐述。
实验根据 图1所示的工作流程进行。如上所述收获了成年苍蝇的大脑。它们被嵌入OCT中，干冰被用来冻结OCT块。将OCT组织块以12μm厚度和−18°C的样品头和腔室冷冻切片。将安装在其上的冷冻切片的ITO载玻片在室温下在真空中干燥30分钟。接下来，使用自动HTX M5基质喷雾器和40mg / mL甲醇/水（70/30，v / v）中的DHB溶液进行基质沉积。
在正离子模式下的 MALDI 飞行时间 （TOF） MS Autoflex 仪器在 50-1，000 m/z 的质量范围内采集了质谱。在同一实验中，将同一实验的OCT和脑组织的光谱在SCiLS中对齐，以评估OCT的重叠峰和离子抑制干扰（补充图S1）。
图2中的结果表明，MALDI MSI数据分析软件对所选m/z光谱的输出图像，其中所选值显示LpR1敲除和野生型果蝇之间的脂质分布存在显着差异。扫描显示LpR1−/−突变体中的脂质含量普遍降低。手动分析每个光谱，并通过交叉引用METLIN数据库和先前发表的研究3，4来实现分析物鉴定。与LpR1−/−突变体相比，三酰基甘油（TAG）和磷脂酰甘油（PG）在对照脑中高度表达（TAG的变化高达10倍）。此外，二甘油（DAG），磷脂酰胆碱（PC）和磷脂酰乙醇胺（PE）在LpR1−/−突变基因型中也表达最小。
图1：MALDI-TOF质谱成像的工作流程。（A）果蝇大脑在OCT中对齐，放置在干冰上。（黑白）将组织块在−15°C下冷冻切片成12μm厚的部分。 使用预冷刷将切片压平，并解冻熔化到保持在室温下的载玻片的ITO涂层侧。（E） 载玻片用基准标记标记，涂有基质，然后放入MALDI仪器中。（F）果蝇脑的MALDI图像是使用DHB作为基质以40μm分辨率获得的。眼睛（红色，m / z 370.2），头部组织（绿色，m / z 184.1）和大脑（蓝色，m / z 788.6）的区域显示在叠加的多通道图像中。（G）H&E染色在马尔迪MSI后的同一组织切片上进行。（H）样品制备，储存和运输的工作流程。比例尺 = 500 μm （F，G）。缩写：MALDI-TOF =基质辅助激光解吸/电离飞行时间;OCT = 最佳切割温度化合物;ITO = 氧化铟锡;DHB = 2，5，-二羟基苯甲酸;H&E = 苏木精和曙红;MSI = 质谱成像。请点击此处查看此图的大图。
图2：来自MALDI MS分析的代表性图像，显示 LpR1−/− 突变体大脑中脂质含量普遍降低。 图中显示了具有代表性的H&E染色的成年苍蝇脑切片（左）。脂质种类、它们各自的 m/z 值以及热图的比例如图所示。在底部，与至少四个生物重复的对照组相比， LpR1−/− 突变体减少的平均折叠显示为箭头旁边的数字。比例尺 = 1 mm。这个数字是从Yin等人17修改而来的。 请点击此处查看此图的大图。
补充图S1：OCT和果蝇脑组织的质谱。在MALDI成像之前，图1中果蝇脑OCT阻滞的冷冻切片用DHB基质均匀覆盖。从对照果和突变果蝇中选择的空白OCT区和脑组织区的质谱分别显示在m/z 1-1，000和m/z 520-900（富脂）的范围内。OCT的干扰与离子抑制现象和重叠信号问题有关。简称：OCT=最佳切削温度化合物;DHB = 2，5-二羟基苯甲酸;MALDI = 基质辅助激光解吸/电离。请按此下载此档案。
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Discussion
正如对突变型和野生型果蝇大脑中脂质组成变化的研究所证明的那样，MALDI MSI可以成为一种有价值的无标记成像技术，用于原位分析小昆虫器官内的分子分布模式。事实上，由于脂质分布在果蝇头的脑组织和脂肪体中，因此当使用全头提取时，基于液相色谱和质谱（LC-MS）的传统脂质组学方法只能检测来自两个区域的组合信号。从广义上讲，对于LC-MS方法18，对果蝇等小昆虫器官内的次区域进行差异脂质组学分析是一项非常费力且具有挑战性的任务。这将需要对这些区域进行剖析，这带来了巨大的挑战。相比之下，MALDI MSI提供足够的分辨率来区分不同的解剖结构，即使在小果蝇脑内也是如此。与传统的LC-MS相比，最低组织要求的好处也可以应用于珍贵的样品，如临床活检。此外，为MALDI MSI准备的样本载玻片也可以通过TOF-SIMS和免疫组织化学等补充技术进行检查，这将使从跨学科方法中获得的数据得以整合19，20。
MALDI MSI中最重要的步骤之一是样品制备 - 这是实验中解释在不同实验室进行的代谢组学研究结果的大部分差异的部分21.这里的主要目标是为MALDI MSI分析果 蝇 昆虫等生物体中的脂质和代谢物提供全面而实用的样品制备方案，希望帮助研究人员在从基础生物学到转化科学的研究中实施MALDI MSI。
除了前面讨论的最小化分子谱变化（丰度和空间分布）的预防措施11之外，在处理小组织时还需要调整其他几种做法。首先，应尽量减少生物组织收获和OCT冷冻之间的时间，以减少死后缺血的可能性21。其次，在将组织放入块中之前，应确保准备OCT的平坦阶段，这对于在切片过程中从不同组织的可比较平面进行切片至关重要。第三，在实验前，切割小规模生物组织或珍贵样品需要充分的实践。虽然OCT有助于切割偶数切片，但在组织卷曲或剥落方面可能会出现并发症。为了对抗卷曲，在取下卷板之前，应让该部分在舞台上停留几秒钟。使用两个画笔，一个可用于保持部分的顶部静止，而另一个可用于展开部分。应注意通过主要处理块部分的边缘来尽量减少与组织的接触。第四，虽然解冻安装方法可用于较少的苍蝇脑（<10个大脑），但不可能将包含大量苍蝇脑（>30个大脑）的部分转移到冷的ITO载玻片上而不会损失大量大脑，一旦抬起，这些大脑很容易从块状切片中掉出来。因此，为了快速分析大量苍蝇脑，需要使用暖玻片安装。值得注意的是，OCT部分和载玻片之间的温差将导致切片非常迅速地附着并粘附在载玻片上。因此，不应将温热的载玻片压在截面和低温恒温器上;相反，必须轻柔而快速地接近切片，以使切片附着在ITO载玻片上，而无需接触低温恒温器。与解冻安装方法相比，我们没有观察到低温恒温器阶段留下的部分有任何明显的痕迹。第五，MALDI矩阵的均匀和精细沉积对于在采集过程中获得强大而准确的空间信息至关重要。建议在进入含有样品的载玻片之前，使用空白载玻片测试基质沉积是否具有适当的覆盖性。
随着其日益普及和进步，MALDI MSI有望达到更广泛的用户群，并成为分析物（如氨基酸，代谢物，脂质，肽和蛋白质）以及直接从生物组织中提取的其他小分子的分子量测量的标准工具10。然而，它有自己的局限性和挑战。在为 MALDI MSI 制备易碎和小规模样品时，切片需要包埋剂，如 OCT。然而，OCT含有聚合物（聚（乙烯醇），聚乙烯甘油和苯扎氯铵）的组合，其产生可能干扰分析物信号22的聚合物背景信号。据报道，明胶和羧甲基纤维素（CMC）等替代包埋化合物显示出较少的离子抑制作用。明胶显示不太强烈的信号，在100-600 m / z 20，23，24的低质量范围内更分散。CMC还用于果蝇的MALDI MSI中，以可视化GABA等代谢物，尽管它需要在包埋前将头部浸入70%乙醇中以获得最佳粘附力25。
尽管OCT倾向于信号抑制，但由于OCT在保留大脑形态的同时提供大量样品的可靠切片的卓越能力，该协议仍在继续使用。研究人员发现，虽然明胶和CMC切片在高厚度（如20μm）下表现良好，但只有OCT能够可靠地产生连续的12μm切片26。CMC和明胶缺乏OCT提供的结构完整性和紧密的组织，这设定了小组织（如飞脑）的数量限制，以容纳在一个块26中。据报道，来自OCT嵌入的飞行部分的MS信号与嵌入明胶和CMC26中的MS信号相当。我们未发表的数据还表明，温装，OCT包埋的苍蝇脑切片产生强大的脂质信号，可与解冻的明胶包埋组织相媲美。总体而言，由于与其他包埋化合物相比，OCT具有保持组织形态完整性并实现精确样品切片的卓越能力，因此将其用于高脆性样品（例如 果蝇 脑阵列）仍然是一种选择。在这种情况下，只应进行比较来自同一实验的样品的相对定量，而不应进行绝对定量。关于我们报道的 果蝇 模型在脂质分析中的研究，得出的结论是OCT的好处大于其局限性。此外，必须进行试验实验以测试目标分析物的MS信号是否会被OCT信号掩盖。
此外，需要调整几种做法以最大限度地减少离子抑制的影响。首先，应该同时处理不同组的样品，以确保相同程度的离子抑制（如果有的话）。其次，在选择MALDI扫描的感兴趣区域时，应避免使用OCT区域，而只勾勒出组织区域。最后，应选择一个空白OCT区域作为阴性对照进行扫描，以在数据分析期间排除OCT中的信号。
脂质组学领域出现在2000年代初，近年来迅速发展，这主要是由于质谱的发展，包括MALDI MSI27。这些先进的技术有助于推动该领域走向生物和生物医学应用。例如，脂质组学可用于神经学研究，因为脑脂质运输水平和组成的变化可以用作疾病的生物标志物。此外，脂质组学还导致了新信号分子的鉴定，药物功效测试的发展，病理生理病理状况机制的发现以及更多28。尽管该领域在过去几年中取得了令人瞩目的成就，但仍有一些领域需要增长。例如，使用当前技术准确量化脂质的能力仍在争论中 29.此外，细胞脂质组的完整映射还有很大进展要做。预计这些领域，特别是该领域的其他领域，将在未来几年内经历显著增长。
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Disclosures
作者没有利益冲突要披露。
Acknowledgments
陈由纪、凯莉·维拉萨米和玛雅·海因得到了斯隆基金会纽约市立大学暑期研究计划（CSURP）的支持。尹俊仁得到了美国国立卫生研究院项目编号1ZIANS003137的校内研究项目的支持。该项目由PSC-CUNY奖提供给叶赫和里纳特·阿布扎利莫夫，由专业人员大会和纽约市立大学共同资助。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2,5-Dihydroxybenzoic acid (DHB) | Millipore Sigma Aldrich | 85707-1G-F | |
| Andwin Scientific CRYOMOLD 15X15X5 | Fisher Scientific | NC9464347 | |
| Andwin Scientific Tissue-Tek CRYO-OCT Compound | Fisher Scientific | 14-373-65 | |
| Artist brush MSC #5 1/8 X 9/16 TRIM RED SABLE | Fisher Scientific | 50-111-2302 | |
| autoflex speed MALDI-TOF MS system | Bruker Daltonics Inc | MALDI-TOF MS instrument | |
| BD Syringe with Luer-Lok Tips | Fisher Scientific | 14-823-16E | |
| BD Vacutainer General Use Syringe Needles | Fisher Scientific | 23-021-020 | |
| Bruker Daltonics GLASS SLIDES MALDI IMAGNG | Fisher Scientific | NC0380464 | |
| Drierite, with indicator, 8 mesh, ACROS Organics | AC219095000 | ||
| Epson Perfection V600 Photo Scanner | Amazon | Perfection V600 | |
| Fisherbrand 5-Place Slide Mailer | Fisher Scientific | HS15986 | |
| Fisherbrand Digital Auto-Range Multimeter | Fisher Scientific | 01-241-1 | |
| FlexImaging v3.0 | Bruker Daltonics Inc | Bruker MS imaging analysis software | |
| HPLC Grade Methanol | Fisher Scientific | MMX04751 | |
| HPLC Grade Water | Fisher Scientific | W5-1 | |
| HTX M5 Sprayer | HTX Technologies, LLC | Automatic heated matrix sprayer | |
| Kimberly-Clark Professional Kimtech Science Kimwipes Delicate Task Wipers | Fisher Scientific | 06-666A | |
| MSC Ziploc Freezer Bag | Fisher Scientific | 50-111-3769 | |
| SCiLS Lab (2015b) | SCiLS Lab | Advanced MALDI MSI data analysis software | |
| Thermo Scientific CryoStar NX50 Cryostat | Fisher Thermo Scientific | 95-713-0 | |
| Thermo Scientific Nalgene Transparent Polycarbonate Classic Design Desiccator | Fisher Scientific | 08-642-7 |
References
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