Name: Não-radioativo In situ Protocolo de hibridação Aplicável para a Noruega Spruce e uma variedade de espécies de plantas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-04-17T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 56 s
Description: Aprenda uma técnica de hibridização in situ não radioativa adaptável para Picea abies e diversas espécies vegetais. Este protocolo modificado permite análise eficiente da expressão gênica em tecidos vegetais.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Estamos muito gratos a Anders Bovin que forneceu a música para o nosso filme e Stocks Michael Elliot para o voluntariado para ser a voz do altifalante. Apoio foi fornecido por Carl Trygger Foundation, o programa estratégico de pesquisa agrícola Genômica Funcional (AgriFunGen) da Universidade Sueca de Ciências Agrícolas, o sueco Research Council (VR), eo Conselho de Pesquisa sueco do Ambiente, Ciências Agrárias e do Ordenamento do Território (FORMAS ).

<ol><li>Carr, S. M., Irish, V. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Floral+homeotic+gene+expression+defines+developmental+arrest+stages+in+Brassica+oleracea+L.+vars.+botrytis+and+italica%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">Floral homeotic gene expression defines developmental arrest stages in Brassica oleracea L. vars. botrytis and italica.</a> Planta. 201 (2), 179-188 (1997).</li>
<li>Coen, E. S., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+war+of+the+whorls%3A+genetic+interactions+controlling+flower+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The war of the whorls: genetic interactions controlling flower development.</a> Nature. 353 (6339), 31-37 (1991).</li>
<li>Jackson, D. In situ hybridization in plants. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJackson%2C+D+%22Molecular+Plant+Patology%3A+a+practical+approach%22">Molecular Plant Patology: a practical approach</a>. Gurr, S. J., McPherson, M. J., Bowles, D. J. , University Press. Oxford. (1991).</li>
<li>Leitch, A. R., Schwarzacher, T., Jackson, D., Leitch, I. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLeitch%2C+AR+%22In+situ+hybridization%3A+a+practical+guide%22">In situ hybridization: a practical guide</a>. , BIOS Scientific Publishers Limited. Oxford. (1994).</li>
<li>Smyth, D. R., Bowman, J. L., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+flower+development+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Early flower development in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 2 (8), 755-767 (1990).</li>
<li>Azevedo, H., Lino-Neto, T., Tavares, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+high-quality+RNA+isolation+from+needles+of+adult+maritime+pine+trees%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Molecular+Biology+Reporter%22%5BJournal%5D)">An improved method for high-quality RNA isolation from needles of adult maritime pine trees.</a> Plant Molecular Biology Reporter. , 333-338 (2003).</li>
<li>Sundstrom, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MADS-box+genes+active+in+developing+pollen+cones+of+Norway+spruce+%28Picea+abies%29+are+homologous+to+the+B-class+floral+homeotic+genes+in+angiosperms%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genet%22%5BJournal%5D)">MADS-box genes active in developing pollen cones of Norway spruce (Picea abies) are homologous to the B-class floral homeotic genes in angiosperms.</a> Dev Genet. 25 (3), 253-266 (1999).</li>
<li>Tandre, K., Svenson, M., Svensson, M. E., Engstrom, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conservation+of+gene+structure+and+activity+in+the+regulation+of+reproductive+organ+development+of+conifers+and+angiosperms%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Conservation of gene structure and activity in the regulation of reproductive organ development of conifers and angiosperms.</a> Plant J. 15 (5), 615-623 (1998).</li>
<li>Winter, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MADS-box+genes+reveal+that+gnetophytes+are+more+closely+related+to+conifers+than+to+flowering+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">MADS-box genes reveal that gnetophytes are more closely related to conifers than to flowering plants.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96 (13), 7342-7347 (1999).</li>
<li>Savard, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloroplast+and+nuclear+gene+sequences+indicate+late+Pennsylvanian+time+for+the+last+common+ancestor+of+extant+seed+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Chloroplast and nuclear gene sequences indicate late Pennsylvanian time for the last common ancestor of extant seed plants.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 91 (11), 5163-5167 (1994).</li>
<li>Jack, T., Brockman, L. L., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+homeotic+gene+APETALA3+of+Arabidopsis+thaliana+encodes+a+MADS+box+and+is+expressed+in+petals+and+stamens%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The homeotic gene APETALA3 of Arabidopsis thaliana encodes a MADS box and is expressed in petals and stamens.</a> Cell. 68 (4), 683-697 (1992).</li>
<li>Bowman, J. L., Smyth, D. R., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+directing+flower+development+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Genes directing flower development in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 1 (1), 37-52 (1989).</li>
<li>Kramer, E. M., Irish, V. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+genetic+mechanisms+controlling+petal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Evolution of genetic mechanisms controlling petal development.</a> Nature. 399 (6732), 144-148 (1999).</li>
<li>Sundstrom, J., Engstrom, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conifer+reproductive+development+involves+B-type+MADS-box+genes+with+distinct+and+different+activities+in+male+organ+primordia%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Conifer reproductive development involves B-type MADS-box genes with distinct and different activities in male organ primordia.</a> Plant J. 31 (2), 161-169 (2002).</li>
<li>Carlsson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microarray+analysis+reveals+altered+expression+of+a+large+number+of+nuclear+genes+in+developing+cytoplasmic+male+sterile+Brassica+napus+flowers%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Microarray analysis reveals altered expression of a large number of nuclear genes in developing cytoplasmic male sterile Brassica napus flowers.</a> Plant J. 49 (3), 452-462 (2007).</li>
<li>Teixeira, R. T., Farbos, I., Glimelius, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+levels+of+meristem+identity+and+homeotic+genes+are+modified+by+nuclear-mitochondrial+interactions+in+alloplasmic+male-sterile+lines+of+Brassica+napus%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Expression levels of meristem identity and homeotic genes are modified by nuclear-mitochondrial interactions in alloplasmic male-sterile lines of Brassica napus.</a> Plant J. 42 (5), 731-742 (2005).</li>
<li>Ying, S., Kay, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+of+in+situ+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">The technique of in situ hybridization.</a> Methods in Molecular Medicine. 56, 263-283 (2001).</li>
</ol>

Dois aspectos do P. abies protocolo foram otimizadas em relação ao A. thaliana / B. napus protocolo, RNase tratamento e proteinase K concentração. A RNase remove sinais de fundo e assim aumentar a especificidade do sinal 17. O tratamento proteinase K é necessária para permeabilizar o tecido para que a sonda pode entrar e hibridizar para a piscina RNA de interesse. A sonda antisense DAL13 deu um maior sinal sem RNase-tratamento (Fig. 3C, E, G) em comparação com seções tratadas com RNase por 30 min (Figura 2D, F e H). Desde a RNase-tratamento não melhorou o sinal que foi retirado do protocolo. O tratamento proteinase K foram testadas em três concentrações diferentes; 1, 3 e 5 mg / ml. No caso de P. abies um sinal de baixa ou nenhuma foi observada usando 1 mg / ml proteinase K (Fig. 3C-D). Um sinal forte foi obtida com ambos mg 3 / ml (Fig. 3E-F) e 5 mg / ml (Fig. 3G-H) proteinase K. Uma vez que não aparente diferença na força do sinal quando foi encontrado usando 5 mg / ml proteinase K em comparação com 3 mg / ml, optamos por utilizar 3 mg / ml em nosso protocolo. É provável que a necessidade de uma maior concentração proteinase K na P. abies cones masculinos em relação ao A. thaliana e B. botões florais napus é devido a mais de tecido compacto, com níveis mais elevados de compostos fenólicos e polissacarídeos. Durante a fixação e incorporação de algumas diferenças entre o A. thaliana / B. napus protocolo eo P. abies protocolo são evidentes. O tecido de juro é fixa para fornecer retenção de RNA e este é um passo crítico, pois materiais mal fixa pode dar um sinal de baixa ou indetectável mesmo que o mRNA é altamente abundante. O tecido é desidratado, limpo e embebido em cera em mudanças graduais para evitar danos aos tecidos e, em alguns protocolos de NaCl 0,85% é adicionado ao etanol na desidratação para continuar a evitar o encolhimento e inchaço da 3 células. A etapa de desidratação durante a incorporação pode ser realizada no gelo para manter a atividade RNase no mínimo. No P. abies protocolo de corrigir a solução de 4% paraformaldeído contém glutaraldeído 0,25%, o que é suposto dar uma melhor retenção de RNA 17, apesar de que alguns argumentam que ele provavelmente não fazem diferença 3. Depois de cortar o material é fixado em lâminas e pré-tratados (isto é, desparafinados, reidratados, permeabilizadas, tratado para reduzir a ligação não específica da sonda e, finalmente, desidratadas) antes da hibridização. No protocolo aqui apresentado o procedimento de detecção de todo pode ser realizado em laboratórios comuns, o sinal se desenvolve normalmente dentro de 1-3 dias ea relação entre o sinal sobre o fundo pode ser continuamente monitorado. A DIG sondas marcadas costumam dar um sinal mais distinta em comparação com sondas marcadas radioativos, são mais estáveis ​​e podem ser reutilizados em experimentos consecutivos. Por outro lado, a sensibilidade é reduzida em comparação com sondas radioativas 17. A hibridização in situ detecta expressão usando uma sonda marcada específico para um determinado mRNA. A marcação é um método de etiquetagem robusta e sensível, mas requer a manipulação da radioatividade e leva várias semanas antes que os resultados podem ser detectados. Antígeno marcado com sondas, por outro lado, são mais estáveis, menos perigosos e exigem uma exposição para o meio de detecção por alguns dias apenas 17 anos. Assim, o antígeno-rotulagem métodos são atualmente dominante. O passo mais crítico independentemente do protocolo é o projeto da sonda. Cuidados devem ser tomados para garantir que a sonda tem uma alta especificidade e é rotulado com UTPs de alta qualidade. Às vezes, a temperatura de hibridação e / ou comprimento de reação tem que ser ajustado para sondas específicas. Nosso protocolo modificado com base na DIG sondas marcadas irá facilitar a localização de expressão de mRNA, simultaneamente, em espécies que variam de A. thaliana a P. abies, e deve, com pequenos ajustes ser usado em outras espécies vegetais. O protocolo tem, ao lado de cones masculinos, também foi testado em diferentes estágios de brotos vegetativos e em embriões de ambos os zigóticos e somáticos de P. abies com bons resultados (resultados não publicados;. Karlgren et al).

<table><tbody><tr><td>Anidrido acético</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6404-200ml</td><td>mínimo 98%</td></tr><tr><td>Acrylamida, linear</td><td>Ambion</td><td>9520</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpos anti-DIG</td><td>Roche Group</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Reagente bloqueador</td><td>Roche Group</td><td>11 175 041 910 ou 11 096 176 001</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sérica bovina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7030-50g</td><td>mínimo 98%</td></tr><tr><td>Formamida desionizada</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solução de Denhardt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2532-5ml</td><td></td></tr><tr><td>DEPC, dietilpirocarbonato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de dextrana</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit de marcação de RNA com DIG (SP6/T7)</td><td>Roche Group</td><td>11175025910</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldeído (25%)</td><td>Histolab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glicogênio</td><td>Ambion</td><td>9510G</td><td></td></tr><tr><td>Histoclear II</td><td>Histolab</td><td></td><td>Você pode usar Tissue-clear, Histoclear II, xilol ou algo similar ao incluir seu tecido.</td></tr><tr><td>Histowax</td><td>Histolab</td><td></td><td>Histowax ou Paraplast podem ser usados para inclusão.</td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148-500g</td><td></td></tr><tr><td>Paraplast plus</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3683-1kg</td><td>Histowax ou Paraplast podem ser usados para inclusão.</td></tr><tr><td>Fusão&amp;#8482; High-Fidility DNA Polimerase</td><td>Finnzymes</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lâminas Probe-on Plus</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-230-900</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2308-5mg</td><td></td></tr><tr><td>RNase A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R5503-100mg</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-clear</td><td>Sakura Finetek</td><td></td><td>Você pode usar Tissue-clear, Histoclear II, xilol ou algo similar ao incluir seu tecido.</td></tr><tr><td>Trietanolamina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1377-100ml</td><td>mínimo 98%</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>use seu produto padrão no laboratório</td><td></td><td>Use um ou ambos, Triton X-100 e Tween-20.</td></tr><tr><td>tRNA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>83853-100mg</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>use seu produto padrão no laboratório</td><td></td><td>Use um ou ambos, Triton X-100 e Tween-20.</td></tr><tr><td>Western Blue</td><td>Promega Corp.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

não-radioativo in situ protocolo de hibridação aplicável para a noruega spruce e uma variedade de espécies de plantas

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

A tecnologias de alta capacidade de análise de expressão disponíveis hoje dar aos cientistas um estouro de perfis de expressão, mas a sua resolução em termos de expressão tecido específico é limitado devido a problemas em dissecar tecidos individual. Dados de expressão deve ser confirmado e complementado com padrões de expressão usando, por exemplo hibridização in situ, uma técnica utilizada para localizar a expressão de RNAm de células específicas. O método de hibridização in situ é trabalhoso, demorado e muitas vezes exige otimização extensa dependendo da espécie e do tecido. Em experimentos in situ são relativamente mais difíceis de executar em espécies lenhosas, como a Noruega coníferas spruce (Picea abies). Aqui apresentamos uma DIG modificado no protocolo de hibridização in situ, que é rápido e aplicável em uma ampla gama de espécies de plantas, incluindo P. abies. Com apenas alguns ajustes, incluindo alteradas RNase tratamento e concentração proteinase K, poderíamos usar o protocolo para estudar a expressão tecido específico de genes homólogos nos órgãos reprodutivos masculinos de uma gimnosperma e duas espécies de angiospermas; P. abies, Arabidopsis thaliana e Brassica napus. O protocolo funcionou tão bem para as espécies e genes estudados. AtAP3 e BnAP3 foram observados no segundo e terceiro whorl órgãos florais em A. thaliana e B. napus e DAL13 em microsporophylls de cones masculinos de P. abies. Para P. abies a concentração de K proteinase, usado para permeablize os tecidos, teve que ser aumentada para 3 g / ml em vez de 1 g / ml, possivelmente devido aos tecidos mais compactos e níveis mais elevados de compostos fenólicos e polissacarídeos. Para todas as espécies o tratamento RNase foi removido devido a intensidade do sinal reduzida sem um aumento correspondente na especificidade. Ao comparar os padrões de expressão tecido específico de genes homólogos de ambas as plantas floridas e uma árvore conífera demonstramos que a DIG situ no protocolo aqui apresentado, com apenas pequenos ajustes, pode ser aplicado a uma grande variedade de espécies de plantas. Assim, o protocolo evita tanto a otimização espécies extensa específicas ea utilização de sondas trabalhoso marcado radioativamente, em favor de sondas DIG rotulados. Nós escolhemos para ilustrar os passos tecnicamente exigente do protocolo em nosso filme. Anna Karlgren e Jenny Carlsson contribuíram igualmente para este estudo. Autores correspondentes: Anna Karlgren em Anna.Karlgren @ ebc.uu.se e Sundström Jens F. em Jens.Sundstrom @ vbsg.slu.se

Nós descrevemos um DIG modificado<em&gt; In situ</em&gt; Protocolo de hibridização, que é rápido e aplicável em uma ampla gama de espécies de plantas, incluindo a Noruega abeto. Com apenas alguns ajustes, incluindo alteradas RNase tratamento e concentração proteinase K, o protocolo pode ser utilizado em estudos de diferentes tecidos e espécies.

Não-radioativo In situ Protocolo de hibridação Aplicável para a Noruega Spruce e uma variedade de espécies de plantas

As tecnologias de análise de expressão de alto rendimento disponíveis atualmente proporcionam aos cientistas um excesso de perfis de expressão, mas a sua resolução em termos de...

Protocolo de hibridização in situ não radioativa aplicável para a espruce-da-noruega e uma variedade de espécies vegetais. Carre Etal. Olá, meu nome é AM GaN, e estamos trabalhando na Universidade OBS e na Universidade Sueca de Ciências Agrárias em Uppsala, Suécia.Estabelecemos um protocolo de visitação de insetos que funciona em várias espécies vegetais diferentes. Hoje vamos mostrar a você alguns passos exigentes. Neste protocolo, vamos demonstrar a inclusão, o corte em seções e as diferentes etapas do experimento real de visitação de insetos.Vamos para o laboratório Um, fixação e inclusão, etapas de nove a onze do protocolo. Etapa nove, pré-aqueça as placas de Petri e as formas a 60 graus Celsius. Etapa dez, aqueça um par de pinças e distribua os tecidos uniformemente em uma placa.Adicione mais parafina para cobrir os tecidos. Passo 11: deixe a parafina endurecer em temperatura ambiente. Dois passos sexuais 12 a 19 no protocolo.Ligue as placas aquecedoras e tenha parafina histológica derretida disponível. Retire as amostras da câmara fria. Passo 13: use um bisturi para cortar cuidadosamente um bloco de tecido em parafina.Modele a peça para facilitar o corte. Na etapa 14, aqueça o bloco frio e a sola para fundi-los juntos. Deixe o preparado endurecer a quatro graus centígrados.Etapa 15, corte o bloco de parafina em seções com espessura de seis a oito micrômetros. Usando um micrótomo, as seções são ligadas em uma fita longa. Corte a fita e transfira-a para um papel.Neste ponto, é possível inspecionar as seções individuais sob um microscópio estereoscópico para selecionar as seções de interesse. Será fácil realizar uma inspeção com tecidos ou corados com eosina. Passo 17: adicione água Milli Q livre de RNA sobre as lâminas.Corte a fita em pedaços menores e coloque-os sobre as lâminas. Transfira as lâminas para a placa aquecedora. Passo 17, deixe as fitas achatarem em uma placa a 42 graus centígrados por um a dois minutos.Remova a água utilizando Kim oil. Passo 19, incubar as lâminas a 42 graus centígrados durante a noite para que os tecidos aderem às lâminas para hibridização in situ 4.1 na seção in-situ. Passos de pré-tratamento de 36 a 48 no protocolo.Passo 36: desidratação de seções na camada de histologia. Os lâminas são dispostos de forma uniforme e colocados em uma grade para facilitar o movimento entre diferentes recipientes, desidratando as seções. Em uma série de etanol, adicione anidrido acético sob agitação vigorosa.Passo 45, preparação para o tratamento com anidrido acético 4,2 na hibridização in situ. Passos 49 a 52 em um protocolo. Passo 51, envelhecimento de lâminas pro um mais.A solução é viscosa. Tente evitar bolhas. Incube as lâminas em uma câmara úmida.4.3 início. Após hibridização, etapas 53 a 72 do protocolo. Etapa 62, incubar as lâminas com o bloqueador burer em um recipiente plástico.Passo 63, adicione quantidade suficiente de solução bloqueadora apenas para cobrir as lâminas. Os anticorpos são adicionados às lâminas utilizando o envelhecimento. O envelhecimento funciona apenas com lâminas prob bon plus. Para lâminas de design semelhante, Passo 65, permita que as forças capilares puxem para cima a solução de anticorpo anti-dig.Este passo é repetido. Passo 70, como antes, em sanduíche e aspire a solução azul western. Observe que a solução azul western é aspirada duas vezes, assim como fizemos para a solução de anticorpo anti-dig.E na etapa 65, etapa 71, incubar as lâminas no escuro por um a cinco dias. À temperatura ambiente, o monitoramento dos sinais de hibridização pode ser realizado em um microscópio estereoscópico. Enquanto as lâminas ainda estiverem em sanduíche, deve ser possível observar manchas roxas a acastanhadas.Este é o aspecto dos Resultados obtidos no experimento com a estação CW. É possível observar o sinal aqui como uma coloração roxa ou acastanhada.

non-radioactive-situ-hybridization-protocol-applicable-for-norway

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Fluorescência dupla In situ Hibridação nas Seções cérebro fresco

Este protocolo de hibridização in situ em preparação inteira discute etapas críticas que garantem resultados de alta qualidade e reprodutíveis para estudos de expressão gênica em embriões de camundongo com idade entre E8,5 e E11,5 dias.

Monte todo In Situ Hibridação de E8.5 de Embriões E11.5 rato

Hibridização In Situ para a localização precisa de transcrições em Plantas

Este protocolo é usado com sucesso para detectar quantitativamente os níveis e padrões espaciais de expressão de mRNA em vários tipos de tecido em todas as espécies de vertebrados. O método pode detectar transcritos baixa abundância e permite o tratamento de centenas de lâminas simultaneamente. Apresentamos este protocolo com perfil de expressão de formação cérebro das aves embrionárias como um exemplo.

Radioativo In situ Hibridação para detecção de padrões de expressão dos genes nos tecidos diversos

Através da combinação de métodos para a montagem de toda...

RNA<em&gt; Em situ</em&gt; Hibridação em embriões de Mount inteiros e histologia de células Adaptado para Elasmobrânquios Marinhos

Descrevemos aqui um simples fluorescência de hibridação in situ (FISH), o método para a localização de vírus e bactérias, em tecidos de plantas e de insectos. Este protocolo pode ser estendido para a visualização de mRNA em toda montagem e cortes microscópicos.

Fluorescência<em&gt; In situ</em&gt; Hibridizações (FISH) para a localização de vírus e bactérias Endosymbiotic em Plant e Insect Tecidos

Este protocolo descreve um método simples de seccionamento de tecido de corte híbrido que é útil para tecidos vegetais recalcitrantes. Cortes de tecido de boa qualidade permitem estudos anatômicos e outros estudos biológicos, incluindo hibridização in situ (ISH).

Hybrid-Cut: Um Método Seccionamento melhorado para amostras de tecidos de plantas recalcitrante

Problemas no processamento de amostras biológicas para observação de microscopia eletrônica de varredura incluem colapso celular, tratamento de amostras de microambientes úmidos e destruição celular. Protocolos de baixo custo e relativamente rápidos, adequados para a preparação de amostras desafiadoras, como meristemas florais, cistos de oomicetos e fungos (Agaricales), são compilados e detalhados aqui.

Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) Protocolos para a Problemática da planta, oomiceto e amostras fúngicas

A Microscopia eletrônica de varredura de blocos de blocos serial (SBEM) é aplicada à imagem e análise de colunas dendríticas no hipocampo murino.

Microscopia eletrônica de varredura de blocos de bloco serial (SBEM) para o estudo de espinhas dendríticas

Este protocolo apresenta um fluxo de trabalho eficiente para microscopia de localização de molécula única em núcleos isolados de Arabidopsis, utilizando isolamento, fixação e marcagem otimizados para alcançar visualização confiável em nanoescala da cromatina e da RNA Polimerase II. Essa abordagem pode ser facilmente adaptada a outras proteínas associadas à cromatina ou modificações de histonas para imagens de alta resolução.

Um Protocolo Simplificado para Microscopia de Localização de Molécula Única em Núcleos de Arabidopsis

Aprenda uma técnica de hibridização in situ não radioativa adaptável para Picea abies e diversas espécies vegetais. Este protocolo modificado permite análise eficiente da expressão gênica em tecidos vegetais.

Não-radioativo In situ Protocolo de hibridação Aplicável para a Noruega Spruce e uma variedade de espécies de plantas

Explorar mais vídeos