Name: Em células vivas, Imagem e Análise Quantitativa de células embrionárias epiteliais em Xenopus laevis /em (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-23T17:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: Aprenda técnicas de imagem em células vivas para analisar morfologia de células epiteliais embrionárias em Xenopus laevis usando microscopia confocal. Este método permite quantificar áreas celulares e intensidades de membrana em tempo real.

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Este trabalho foi financiado por um dos Institutos Nacionais de Saúde (R01-HD044750), uma doação de CARREIRA do National Science Foundation e apoio da American Heart Association (Começando Grant-in-aid). Os autores agradecem membros Davidson Lab: HY Kim, M. e J. von Dassow Zhou (para ajudar com as responsabilidades do laboratório por dia), e Lin Zhang por sua assistência em biologia molecular e síntese de mRNA. Reconhecemos os esforços experimentais de todos os laboratórios de sapo (especialmente Ray Keller e Doug DeSimone), que têm contribuído para alguma parte deste protocolo, através do desenvolvimento e teste de vários métodos ao longo dos anos. Agradecemos a Richard Harland and John Wallingford para os presentes o seu tipo de mem-GFP e GFP moesin-plasmídeos, respectivamente.

<ol><li>Ninomiya, H., Winklbauer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+coating+controls+mesenchymal+shape+change+through+tissue-positioning+effects+and+reduction+of+surface-minimizing+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension.</a> Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).</li>
<li>Kay, B. K., Peng, H. B. Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , Academic Press. New York. (1991).</li>
<li>Cross, M. K., Powers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obtaining+eggs+from+Xenopus+laevis+females%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Obtaining eggs from Xenopus laevis females.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>Cohen, S., Au, S., Pante, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinjection+of+Xenopus+laevis+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Microinjection of Xenopus laevis oocytes.</a> J Vis Exp. , (2009).</li>
<li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. Normal Tables of Xenopus laevis (Daudin). , Elsevier North-Holland Biomedical Press. Amsterdam. (1967).</li>
<li>Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+wound+healing+by+apical+contraction+and+ingression+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Motil+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 53 (3), 163-163 (2002).</li>
<li>Joshi, S. D., Dassow, M. von, Davidson, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+control+of+excitable+embryonic+tissues%3A+three+stimuli+induce+rapid+epithelial+contraction%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Experimental control of excitable embryonic tissues: three stimuli induce rapid epithelial contraction.</a> Exp Cell Res. 316 (1), 103-103 (2010).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Nós apresentamos protocolos experimentais usados ​​regularmente em nosso laboratório para citoesqueleto imagem dinamicamente mudando no córtex celular apical e oscilantes membranas celulares das células epiteliais em embriões Xenopus. Deve-se usar estes protocolos como ponto de partida para geração de imagens ao vivo de formas de células epiteliais; otimização deste protocolo é essencial e algumas das configurações irá mudar, dependendo do tipo de sistema de microscópio tem uma e do tipo de proteínas é um inter...

em células vivas, imagem e análise quantitativa de células embrionárias epiteliais em xenopus laevis</em

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Embrionárias células epiteliais servir como um modelo ideal para estudar a morfogênese em tecidos multicelulares sofrer alterações em sua geometria, tais como mudanças na área da superfície celular e altura da célula, e onde as células sofrem mitose e migram. Além disso, as células epiteliais também podem regular os movimentos morfogenéticos em tecidos adjacentes<sup&gt; 1</sup&gt;. Um método tradicional para estudar células epiteliais e tecidos envolvem fixação química e métodos histológicos para determinar a morfologia das células ou localização de proteínas de interesse particular. Estas abordagens continuar a ser úteis e proporcionam &quot;instantâneos&quot; de formas celulares e arquitetura do tecido, no entanto, ainda há muito a ser entendido sobre como as células adquirem formas específicas, como várias proteínas mover ou localizar a posições específicas, e que caminhos seguir células em direção a seus finais destino diferenciado. De alta resolução de imagem ao vivo complementa os métodos tradicionais e também permite uma investigação mais direta para os processos dinâmicos celulares envolvidos na formação, morfogênese, manutenção e de folhas epiteliais multicelulares. Aqui demonstramos métodos experimentais do isolamento dos tecidos cap animal de<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embriões para imagem confocal de células epiteliais e abordagens de medição simples, que em conjunto podem aumentar os estudos moleculares e celulares da morfogênese epitelial.

Xenopus embrionárias epitélios são um sistema modelo ideal para estudar os comportamentos das células, como o desenvolvimento de polaridade e mudar de forma durante a morfogênese epitelial. Histologia tradicional de amostras fixa é cada vez mais sendo complementado por live-célula de imagem confocal. Aqui nós demonstrar os métodos para isolar os tecidos de rã e visualizar ao vivo as células epiteliais e seus citoesqueleto usando live-célula microscopia confocal.

Em células vivas, Imagem e Análise Quantitativa de células embrionárias epiteliais em Xenopus laevis</em

Células epiteliais embrionárias servem como um modelo ideal para estudar a morfogênese, na qual tecidos multicelulares passam por mudanças em sua geometria, tais como mudanças...

O objetivo geral deste procedimento é demonstrar métodos de imagem viva e quantificação simples para analisar a morfologia de células epiteliais embrionárias. Isso é realizado primeiramente preparando todas as ferramentas e aparelhos necessários. O segundo passo do procedimento consiste em dissecar X explan de embriões de rã e mantê-los em câmaras para cultura de longo prazo.O terceiro passo do procedimento é coletar imagens de alta resolução de células epiteliais em tempo real. O passo final do procedimento é quantificar os detalhes morfológicos das células epiteliais utilizando o Image J. Em última análise, podem-se obter resultados que mostram áreas celulares rastreadas e intensidades de membrana por meio de microscopia confocal de alta resolução. Olá, sou Sagar Joshi do Laboratório Davidson, do Departamento de Bioengenharia da Universidade de Pittsburgh.Hoje vamos mostrar um procedimento para imagem de células vivas e análise quantitativa de células epiteliais embrionárias de Xenos lavia. Utilizamos este procedimento para estudar alterações em tempo real no citoesqueleto celular. Então, vamos começar.Para preparar as câmaras para o cultivo de explantes de calota animal, use gra

live-cell-imaging-quantitative-analysis-embryonic-epithelial-cells

Research

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Biology

Biologia

Usando ponta fina micropipetas injetamos DNA plasmídeo em subdomínios de somitos frango ou tubos neural. A concentração do plasmídeo é ajustada para gerar única células transfectadas. Em seguida, permitir que as células de se transformar em populações clonais.

Transfecção única célula em embriões de galinha

Imagem tecido embrionário em tempo real, é um desafio durante longos períodos de tempo. Aqui nós apresentamos um ensaio para o monitoramento das alterações celulares e sub-celular na medula espinhal pinto por longos períodos com resolução espacial e temporal. Esta técnica pode ser adaptado para outras regiões do sistema nervoso e embrião em desenvolvimento.

De alta resolução de imagem ao vivo de comportamento de células no desenvolvimento neuroepitélio

Xenopus laevis proporciona um sistema de modelo ideal para o estudo da especificação célula destino e função fisiológica de células individuais da retina em cultura celular primária. Aqui apresenta-se uma técnica para dissecar os tecidos da retina e geração de culturas de células primárias que têm imagem para a actividade de cálcio e analisados ​​por hibridação in situ.

Dissecção, Cultura, Análise e de<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Tecido embrionário da retina

Aqui vamos desenvolver as ferramentas necessárias...

Ex vivo imagens ao vivo de divisões celulares simples no mouse neuroepithelium

O manuscrito aqui fornece um simples conjunto de métodos que permitam analisar a secreção e difusão de ligantes marcados fluorescentes em Xenopus. Isto proporciona um contexto para testar a capacidade de outras proteínas para modificar a distribuição de ligando e permitindo experiências que podem dar uma visão sobre os mecanismos que regulam a gradientes de morfogénio.

Utilizando Análise de confocal<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Para Investigar moduladores de Wnt e Shh morfogénio gradientes

Este protocolo demonstra um método baseado em fluorescência para visualizar a vasculatura e quantificar sua complexidade em Xenopus tropicalis . Os vasos sanguíneos podem ser visualizados minutos após a injecção de um corante fluorescente no coração batendo de um embrião após manipulações genéticas e / ou farmacológicas para estudar o desenvolvimento cardiovascular in vivo .

Visualização e Análise Quantitativa da Angiogênese Embrionária<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Descrevemos as etapas que permitem rápida situ em amostragem de uma pequena porção de uma célula individual com alta precisão e mínima invasão usando microamostragem baseada em capilar, para facilitar a caracterização química de um instantâneo da atividade metabólica em viver de embriões utilizando uma plataforma de espectrometria de massa e eletroforese capilar Custom-Built única célula.

Microsonda eletroforese capilar espectrometria de massa para célula única Metabolomics em embriões de viver rã (Xenopus laevis)

Apresentamos um protocolo de duas partes que combina imagens fluorescentes de cálcio com hibridização in situ, permitindo que o experimentador correlacione padrões de atividade de cálcio com perfis de expressão genética em um nível unicelular.

Imagem fluorescente de cálcio e subsequente hibridização em Situ para caracterização do precursor neuronal em xenopus laevis

Descrevemos um protocolo simples para desenvolver organoides epiteliais mucociliais a partir de células ectoderm profundas isoladas dos embriões Xenopus laevis. Os progenitores multipotentes regeneram precursores de células de cálice epitelial e permitem o acompanhamento ao vivo da iniciação e progressão das transições celulares na superfície dos organoides.

Organoides epiteliais mucociliais de células embrionárias xenopus: geração, cultura e imagem ao vivo de alta resolução

Descrevemos um método para a preparação e imagem ao vivo de extratos citoplasmáticos não diluídos de ovos de Xenopus laevis .

Xenopus laevis Preparação de extrato de ovo e métodos de imagem vivos para visualização da organização citoplasmática dinâmica

Descrevemos aqui uma caracterização proteômica baseada em espectrometria de massa de linhagens celulares com destino tecidual conhecido no embrião do vertebrado Xenopus laevis .

Proteômica por Espectrometria de Massas Guiada por Linhagem Celular no Embrião em Desenvolvimento (Rã)

Aprenda técnicas de imagem em células vivas para analisar morfologia de células epiteliais embrionárias em Xenopus laevis usando microscopia confocal. Este método permite quantificar áreas celulares e intensidades de membrana em tempo real.

Em células vivas, Imagem e Análise Quantitativa de células embrionárias epiteliais em Xenopus laevis

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