Name: Isolar células-tronco de tecidos moles músculo-esqueléticas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-05T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: Aprenda a isolar células-tronco adultas de tecidos moles músculo-esqueléticos, como músculo esquelético, usando digestão enzimática e pré-plaqueamento repetido. Este método permite caracterizar células para pesquisa em medicina regenerativa.

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Os autores são muito satisfeito com a Sra. Haiying Pan e Ian Mr. Bellayr por sua ajuda técnica sobre o isolamento de células para os filmes atuais e Kyle Sr. Holden eo Sr. Jonathan Lucas pela ajuda na edição de slide. Muito obrigado a seguinte lista de pessoas que estiveram envolvidas com o desenvolvimento das técnicas preplate modificado ao longo dos últimos anos: os drs. Burhan Gharaibeh, Baohong Cao, Deasy Bridget, Thomas R. Payne, Aiping Lu, Hairong Peng, Hideki Oshima, Bo Zeng, Xiaodong Mu, KIMIMASA Tobita, Ron Jankowski, Makato Ikezawa. Estamos gratos pela assistência técnica de James H. Cummins, Pruchnic Ryan, Feduska Joseph, C. Rebecca Schugar, Pan Haiying e Tebbets Jessica. O autor também gostaria de agradecer o apoio financeiro para este trabalho a partir da Muscular Dystrophy Association (MDA), o National Institutes of Health (NIH), o Departamento de Defesa (DOD), Hospital Infantil de Pittsburgh de UPMC, o Departamento de Cirurgia Ortopédica, e da Universidade de Pittsburgh.

Em geral, o procedimento completo preplate modificada exige 1-2 dias de preparação, uma semana de realizar o procedimento técnico, 2-3 dias de identificação de células com imunocitoquímica, e um adicional de 2-3 semanas de tronco expansão da população celular. Os equipamentos necessários para a cultura de células-tronco são semelhantes ao de sistemas de célula de outra cultura, que inclui uma Centrífuga de bancada, incubadora de CO 2, câmara de fluxo laminar de cultura de tecidos e um microscópio invertido equipado com fluorescência e uma câmera digital. As células-tronco isoladas também podem ser clonados e pode ser armazenado a longo prazo em nitrogênio líquido para os 1,2 estudos atuais ou futuras. Todos os reagentes e materiais utilizados para este procedimento deve ser estéril e manuseados assepticamente. Etapa 1: Preparação <ol><li> Colágeno casaco pratos de cultura de tecidos e frascos: colágeno tipo I derivado do bezerro de pele (0,1 g em 1 litro; Sigma-Aldrich). O plasticware para revestir inclui: T-25 frascos, 6 ou 12 pratos bem, pratos (60 e 100 mm, BD Falcon) como descrito anteriormente 1,2. Agite suavemente o plasticware cada meia hora, durante 4 horas para garantir até mesmo revestimento do colágeno. A solução de colágeno é então removido. E o plasticware revestido é então deixada para secar na capa de cultura de tecidos com a luz UV eo capô tanto, para garantir a esterilidade e, finalmente, recapeadas ou cobertas para uso posterior. </li><li> Prepare meio de cultura celular: 400mL DMEM (DMEM, glicose alta, Invitrogen), 50 ml de calor de soro fetal bovino inativado (FBS, Invitrogen), 50 ml soro de cavalo (HS, Invitrogen), e 5 mL Extrato de embrião de galinha (CEE; Accurate Chemical Co. ) será filtrada a vácuo através de um descartáveis ​​0,22 M-500-ml sistema de filtro estéril (Corning). Estéril de penicilina / estreptomicina solução (Invitrogen) será adicionado finalmente 100 Unidades / mL. As soluções preparadas podem ser armazenadas a 4 ° C durante pelo menos um mês. Esta solução é usada para separar as células do frasco quando as culturas divisão ou preparar as células para transplante. </li><li> Warm up soluções para isolamento de células: Os reagentes a seguir precisam ser aquecidos a 37 ° C antes da sua utilização para o isolamento de células: Solução de Hank Sal Buffered (HBSS, Invitrogen); 0,2% (wt / vol) colagenase do tipo XI (Sigma -Aldrich), com uma média de 3.200 unidades de digestão de colágeno por mL HBSS; Dispase 2,4 units/1mL (Invitrogen), 0,5% (wt / vol) de tripsina (Invitrogen). </li><li> Esterilizar equipamentos cirúrgicos em preparação: O procedimento cirúrgico requer instrumentos cirúrgicos estéreis, incluindo: diferentes tamanhos fórceps, micro-tesouras, tesoura de íris e / ou lâminas de bisturi. Além disso, 15 e 50 mL tubos de polipropileno de centrifugação (BD Falcon); filtro Cell (tamanho dos poros 70 m) (BD Falcon); 18 -, 23 - e 27-gauge agulha (BD PrecisionGild) e 10 - ou 20 ml seringas esterilizadas (BD). </li></ol> Passo 2: biópsias de tecidos, isolamento e dissociação mecânica 04/01 As biópsias de tecido são realizados sob uma capa de cultura estéreis e incluem recém-colhidas tendões e músculos esqueléticos são obtidos a partir dos músculos sóleo tíbia ou do membro posterior de camundongos selvagens (C57BL/6J Feminino, 4-5 semanas de idade ou mais jovens, Jackson laboratório). Qualquer tecido conjuntivo visíveis, vasos sanguíneos e tecido adiposo são então removidas das amostras de biópsia. Os tecidos de tendão e músculo são, então, cuidadosamente identificados sob um microscópio cirúrgico de dissecação para remover restos de pele e osso e colocada em um prato contendo frio (4 ° C) HBSS (suplementado com acrescentar 5% de FBS). Os tecidos isolados são então colocados separadamente em pratos de colágeno revestido contendo HBSS frio e será picada (&lt;milímetros 1x1 3) em uma pasta grossa usando micro-tesoura e / ou lâminas de bisturi. Passo 3: A digestão enzimática dos tecidos: O tecido é então enzimaticamente picada dissociado através de uma série de passos 2,4,5 <ol><li> Transferência de suspensões de tecido picada em separado, 15 ml tubos e centrifugar a 3.500 rpm ~ a 4 ° C por 5 minutos. </li><li> Remover o sobrenadante, lavar com HBSS e repita a centrifugação novamente. </li><li> Remover o sobrenadante, e digerir essas pastas, adicionando 10 ml de pré-aquecida 0,2% de colagenase tipo XI (Sigma). Incubar por 60 minutos a 37 ° C, enquanto continuamente balançando suavemente os tubos. Alternativamente, agitar a mão a cada 10 minutos. </li><li> Centrifugar e ressuspender essas suspensões em 10 ml dispase (2,4 Unidades / mL, Gibco) solução. Incubar por 45 minutos a 37 ° C, agitando delicadamente com as mãos ou balançar a cada 10 minutos. </li><li> Centrífuga e re-suspender estas lamas em 10 ml de solução de tripsina 0,2% HBSS. De incubação varia de acordo com a medida em que as células individuais são liberados a partir de tecidos que podem ser realizados através da observação da suspensão ao microscópio. Não é recomendável ultrapassar 30 minutos a 37 ° C com invertendo os tubos ou balançando suavemente a cada 10 minutos. </li><li> Centrífuga da célula, resultandos e re-suspender o pellet celular em 10 ml de Proliferação Médio (PM). </li><li> Dissociar a suspensão de células, passando o extrato através de uma série de agulhas. As células são então passadas duas vezes através de um 18G, em seguida, uma 23G e, finalmente, uma agulha 27G. </li><li> Passe o extrato celular através de um filtro de células 70 mícrons. </li></ol> Passo 4: Preplating para isolar populações de células diferentes com base em taxa de adesão celular 03/01 <ol><li> Centrifugar e ressuspender o pellets de células em meio de proliferação. </li><li> Misturas placa da célula em um colágeno revestido frasco T-25 (ou 60 prato mm) e marcá-la como PP1. A suspensão de células devem ser observados como possuindo um grande número de núcleos de refração e outros detritos sob o microscópio. </li><li> Incubar a 37 ° C em um umidificado, 5% incubadora de CO 2 por 2 horas. </li><li> Transferência de células não-aderentes a um novo colágeno revestido T-25 frasco (ou 60 prato mm) e marcar é tão PP2. Adicionar 5 ml da PM na placa rotulados PP1. As células iniciais aderindo, que atribuem ao balão são na sua maioria miofibroblastos 3. </li><li> Devolver os frascos para a incubadora por mais 24 horas, a transferência de células não-aderentes a um novo colágeno revestido T-25 frasco (ou prato) e marcá-la como PP3. Adicionar 5 ml de meio de proliferação na placa rotulados PP2. Estas células aderentes, que atribuem a este frasco são principalmente fibroblastos 2,3. </li><li> Frascos de retorno para a incubadora e repita o procedimento em mais 24 horas até PP6 população é criada. Manter cada grupo de células em suspensão e permitir que eles se proliferam e examiná-los regularmente usando um microscópio invertido. PP3 PP4-são principalmente os mioblastos, enquanto as células musculares satélite são muitas vezes vistos principalmente no PP5 2. </li><li> A maioria das células lentamente aderindo tipicamente anexar por PP6. Nesta fase, as células parecem pequenos, refração, redondos de luz e são muito escassos em número e são considerados uma haste 1,2 população celular. </li></ol> Passo 5: Identificação e expansão de células-tronco isoladas <ol><li> O isolado PP6 células são muito poucos em número e precisam ser mantidos em meio de proliferação FBS ricos (20% FBS em DMEM), que é trocada diariamente. A maioria das células presentes na cultura PP6 morrer durante os seguintes 1-2 semanas de cultivo, mas um grande PP6 população saudável é geralmente criado após um adicional de 1-2 semanas de expansão. As células-tronco isoladas de camundongos altamente expressar antígenos de células-tronco 1 (SCA1), CD34, quinase fígado fetal 1 (Flk1), e marcadores-tronco outros 1,2,6,7 que pode ser visualizado através de coloração imuno-histoquímico. Essas células-tronco também apresentam capacidades de diferenciação múltiplas 3,6,8. </li><li> As células isoladas são mantidas e expandidas com uma densidade baixa de células em cultura (12-bem pratos a 50-100 células / poço ou &lt;confluência de 20-30% no frasco ou prato) para evitar 1,2 diferenciação. Muito poucas células, formam clones durante a expansão, e essas células-tronco clonadas podem sofrer proliferação tempo (LTP) para quaisquer estudos competência outros. As células-tronco também podem ser clonados loja em nitrogênio líquido através de procedimentos gerais de armazenamento de células p.ex PM com DMSO 10%. Fazer uma série de unidades populacionais de baixa passagem das células-tronco para os estudos de outros para trás. </li></ol>

<ol><li>Gharaibeh, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+slowly+adhering+cell+fraction+containing+stem+cells+from+murine+skeletal+muscle+by+the+preplate+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique.</a> Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).</li>
<li>Qu-Petersen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+novel+population+of+muscle+stem+cells+in+mice%3A+potential+for+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Identification of a novel population of muscle stem cells in mice: potential for muscle regeneration.</a> J Cell Biol. 157, 851-864 (2002).</li>
<li>Li, Y. &amp, Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+muscle-derived+cells+into+myofibroblasts+in+injured+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Differentiation of muscle-derived cells into myofibroblasts in injured skeletal muscle.</a> Am J Pathol. 161, 895-907 (2002).</li>
<li>Watt, D. J., Lambert, K., Morgan, J. E., Partridge, T. A. &amp, Sloper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incorporation+of+donor+muscle+precursor+cells+into+an+area+of+muscle+regeneration+in+the+host+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Incorporation of donor muscle precursor cells into an area of muscle regeneration in the host mouse.</a> J Neurol Sci. 57, 319-331 (1982).</li>
<li>Lu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+myogenic+progenitor+populations+from+Pax7-deficient+skeletal+muscle+based+on+adhesion+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Isolation of myogenic progenitor populations from Pax7-deficient skeletal muscle based on adhesion characteristics.</a> Gene Ther. 15, 1116-1125 (2008).</li>
<li>Lee, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+isolation+of+muscle-derived+cells+capable+of+enhancing+muscle+regeneration+and+bone+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Clonal isolation of muscle-derived cells capable of enhancing muscle regeneration and bone healing.</a> J Cell Biol. 150, 1085-1100 (2000).</li>
<li>Cao, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+receptors+in+the+maturation-dependent+adenoviral+transduction+of+myofibers%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">The role of receptors in the maturation-dependent adenoviral transduction of myofibers.</a> Gene Ther. 8, 627-637 (2001).</li>
<li>Cao, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+stem+cells+differentiate+into+haematopoietic+lineages+but+retain+myogenic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscle stem cells differentiate into haematopoietic lineages but retain myogenic potential.</a> Nat Cell Biol. 5, 640-646 (2003).</li>
<li>Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+medicine+based+on+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Musculoskelet+Neuronal+Interact%22%5BJournal%5D)">Regenerative medicine based on muscle stem cells.</a> J Musculoskelet Neuronal Interact. 8, (2008).</li>
<li>Gates, C. B., Karthikeyan, T., Fu, F. &amp, Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+medicine+for+the+musculoskeletal+system+based+on+muscle-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Acad+Orthop+Surg%22%5BJournal%5D)">Regenerative medicine for the musculoskeletal system based on muscle-derived stem cells.</a> J Am Acad Orthop Surg. 16, 68-76 (2008).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Foi reconhecido que alguns tecidos adultos contêm células-tronco múltiplas. Ao longo dos últimos anos de estudo, células-tronco têm sido detectadas nos tecidos moles músculo-esqueléticas, incluindo o músculo esquelético e tendão. Este protocolo atual detalhes de um procedimento, conhecido como a técnica preplate modificado, que tem sido utilizado com sucesso em nosso laboratório para isolar células-tronco adultas a partir de tendões e músculo esquelético. Usando a técnica preplate modificado descrito acima as células po...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>#11995-073</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>#10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Soro de cavalo inativado pelo calor</td><td>Invitrogen</td><td>#26050-088</td><td></td></tr><tr><td>Extrato de embrião de galinha</td><td>Accurate Chemical</td><td>#CE650T-10</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina/estreptomicina 100 U/ml</td><td>Invitrogen</td><td>#15140-122</td><td></td></tr><tr><td>PBS de Dulbecco</td><td>Invitrogen</td><td>#14190-250</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada de Hank</td><td>Invitrogen</td><td>#24020-117</td><td></td></tr><tr><td>Colagenase tipo XI 0,2% (p/v)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#C7657</td><td></td></tr><tr><td>Dispase 2,4 U/ml</td><td>Invitrogen</td><td>#17105-041</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA 0,5% (p/v) (10x; 5 g/l de tripsina (1:250)</td><td>Invitrogen</td><td>#15400-054</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno para revestimento de frascos: colágeno tipo I derivado da pele de bezerro 0,1 g/l</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#C-9791</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>#D-2650</td><td></td></tr></tbody></table>

isolar células-tronco de tecidos moles músculo-esqueléticas

Isolating Stem Cells from Soft Musculoskeletal Tissues

Células-tronco adultas têm sido discutidas em relação à sua aplicação na medicina regenerativa. Células-tronco adultas têm gerado uma grande emoção para o tratamento de tecidos lesionados e doentes, devido à sua capacidade impressionante de se submeter multi-linhagem diferenciação celular e sua capacidade de auto-renovação. Mais importante ainda, essas qualidades fizeram-lhes vantajoso para uso em terapias de transplante autólogo de células. O protocolo atual irá introduzir os leitores à técnica preplate modificado onde os tecidos moles do sistema músculo-esquelético, por exemplo, tendão e músculo, são um<sup&gt; St</sup&gt; Enzimaticamente dissociada e depois colocadas em frascos de colágeno revestido com o meio. O sobrenadante, que é composto por médias e as células restantes flutuante, é em série transferidos diariamente para frascos de novo. As células-tronco são as mais lentas a aderir aos frascos que é normalmente leva 5-7 dias (transferências serial ou preplates). Usando esta técnica, células-tronco adultas presentes nesses tecidos podem ser facilmente colhidas através bastante procedimentos não invasivos.

Células adultas isolando-tronco de tecidos moles músculo-esqueléticas com base na velocidade da célula a adesão ao frasco.

Isolar células-tronco de tecidos moles músculo-esqueléticas

As células-tronco adultas têm sido amplamente discutidas em relação à sua aplicação na medicina regenerativa. As células-tronco adultas geraram uma grande quantidade de...

O objetivo geral deste procedimento é isolar células-tronco adultas de tecidos moles músculo-esqueléticos, como o músculo esquelético. Isso é realizado inicialmente por meio da coleta de uma biópsia do tecido mole, seguida de desbridamento e corte fino. O segundo passo do procedimento consiste na digestão enzimática do tecido.O terceiro passo do procedimento é isolar as células-tronco por meio de etapas repetidas de pré-plaqueamento. O passo final do procedimento é a identificação das células-tronco isoladas. Em última análise, podem ser obtidos resultados que demonstram os comportamentos morfológicos e celulares das células utilizando imunofluorescência, microscopia e/ou citometria de fluxo.Olá, sou y Lee do Laboratório de Patologia Molecular do Departamento de Cirurgia Ortopédica da Universidade de Pittsburgh. Hoje vou mostrar como isolar uma célula-tronco adulta dos tecidos moles do sistema esquelético de Mus, como o músculo esquelético. Olá, sou o Dr. Johnny Ward.Sou professor na Escola de Medicina da Universidade de Pittsburgh, no Departamento de Cirurgia Ortopédica. Tenho trabalhado, você sabe, em estreita colaboração com o Dr. Young Lee nesses procedimentos para isolar, você sabe, diferentes tipos de células-tronco do músculo esquelético e tecidos adjacentes, como o tecido padrão. Utilizamos esses procedimentos em nosso laboratório para isolar células-tronco destinadas basicamente a estudos de pesquisa com aplicações em medicina translacional.Então, vamos começar o estudo. Os tecidos dos quais as células-tronco podem ser isoladas incluem tendões e músculos esqueléticos obtidos dos músculos da tíbia ou sóleo da pata traseira de camundongos selvagens. Após remover os resíduos de pele e osso, coloque os tecidos em uma placa contendo HBSS frio suplementado com 5% de FBS.Em seguida, coloque o tecido separadamente em placas revestidas com colágeno contendo HBSS frio. Utilizaremos tecidos de músculo esquelético para demonstrar os procedimentos básicos de dissociação e digestão tecidual. Use tesoura microcirúrgica e/ou lâminas de bisturi para picar os tecidos esqueléticos em uma suspensão grossa para digestão enzimática dos tecidos.Inicie transferindo as suspensões teciduais do MIT para tubos separados de 15 mililitros e centrifugue a aproximadamente 3.500 RPM a quatro graus Celsius por cinco minutos. Remova a lavagem SANE ressuspendendo em HBSS e repita a centrifugação. Após a remoção do sobrenadante, digira as suspensões adicionando 10 mililitros de colagenase 0,2% pré-aquecida.Incubar o tipo 11 por 60 minutos a 37 graus Celsius, agitando os tubos manualmente a cada 10 minutos. Após a incubação de 60 minutos, centrifugar e, em seguida, ressuspender as suspensões em 10 mililitros de solução DYS. Incubar por 45 minutos a 37 graus Celsius, agitando manualmente a cada 10 minutos. Após a incubação de 45 minutos, centrifugar e ressuspender as suspensões em 10 mililitros de trips a 0,2% em solução HBSS.Normalmente, incubamos por 15 a 20 minutos a 37 graus Celsius, invertendo os tubos a cada 10 minutos, até que a incubação esteja completa. Quando um número suficiente de células isoladas for liberado dos tecidos, como ilustrado aqui, centrifugue as células resultantes e ressuspenda o pellet celular em cinco mililitros do meio de proliferação. Dissocie a suspensão celular passando o extrato por uma série de agulhas: duas vezes por uma agulha de 18 gauge, depois uma vez por uma agulha de 23 gauge e, finalmente, uma vez por uma agulha de 27 gauge.Por último, passe o extrato celular através de um filtro celular de 70 mícrons para iniciar a técnica prepl. Centrifugue o extrato celular recém-preparado e re-suspenda os pellets em meio de proliferação. Plaque cinco mililitros da mistura celular em um frasco T 25 revestido com colágeno e identifique como PP1, incubado a 37 graus Celsius em um incubador umidificado com 5% de dióxido de carbono por duas horas.Após duas horas, transfira as células não aderentes para um novo frasco T 25 revestido com colágeno e identifique como PP dois. Adicione cinco mililitros de PM ao frasco T 25 anterior identificado como PP um.Retorne ambos os frascos ao incubador por 24 horas. Após 24 horas, transfira as células não aderentes do PP dois para um novo frasco T 25 revestido com ENC de colágeno e marque-o como PP três. Adicione cinco mililitros de meio de proliferação ao frasco identificado como PP dois.Retorne os frascos ao incubador. Repita o procedimento a cada 24 horas até a população PP seis. A população de células-tronco é criada.As células isoladas do PP seis são muito poucas em número e precisam ser mantidas em um meio de proliferação rico em soro bovino fetal. Esse meio é trocado diariamente. Embora a maioria das células na cultura do PP seis morra durante as próximas uma a duas semanas de cultivo.Uma população grande e saudável de PP seis geralmente é criada após uma expansão adicional de uma a duas semanas. Mantenha também todos os outros grupos de células suspensas, permitindo que proliferem e examinando-os regularmente com um microscópio invertido. As células aderentes precoces que se ligam aos frascos PP um e PP dois são principalmente células fibroticas.Células que aderem a frascos revestidos com colágeno após um período mais longo, entre 48 e 96 horas. PP três e PP quatro são principalmente mioblastos. Enquanto células satélite musculares são frequentemente observadas principalmente na PP cinco, as pré-pl células posteriores, 96 horas ou mais tarde, PP seis, são consideradas células-tronco adultas e apresentam-se pequenas, arredondadas e translúcidas.No início do seu isolamento, eles podem ser ainda caracterizados por imuno-histoquímica quanto à expressão de marcadores de células-tronco, como célula-tronco, antígeno um e CDC 34. Acabamos de mostrar como isolar células-tronco de uma massa secundária do camundongo. Ao realizar este procedimento, é importante lembrar de manter o esteroide durante todos os passos.Uma vez que a célula-tronco tenha sido isolada, certifique-se de cultivar essas células em baixa densidade para manter as características das células-tronco. É isso. Obrigado por assistir e boa sorte com o seu experimento. Desejo-lhe sucesso ao tentar utilizar isso em seu experimento.Obrigado.

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Biology

Biologia

Este vídeo mostra como micro-dissecar o saco vitelino e aorta-gônadas-mesonefro região a partir de embriões e uso de citometria de fluxo para classificar as células-tronco hematopoiéticas.

Isolamento de Células-Tronco Hematopoéticas início de murino saco vitelino e AGM

O micro-dissecados técnica de explantes é um método robusto e confiável para isolar proliferativa das células do músculo esquelético juvenil, adulto ou músculos embrionárias como fonte de células-tronco do músculo esquelético. Excepcionalmente, estas células têm sido clonal para produzir derivados do músculo esquelético linhas de células-tronco usado para in vivo o transplante.

Adultas e embrionárias Cultura Microexplant Músculo Esquelético e isolamento de células-tronco musculares

O isolamento e cultura de uma população pura de células satélites quiescentes, uma população de células estaminais musculares, é essencial para a compreensão da haste músculo biologia celular e regeneração, bem como o transplante de células estaminais para terapias em distrofia muscular e outras doenças degenerativas.

Isolamento, cultura e transplante de células musculares satélite

Vasos sanguíneos dentro do porto músculo esquelético várias populações precursoras multi-linhagem humana que são ideais para aplicações de regeneração. Este método de isolamento permite purificação simultânea de três populações de células multipotentes precursor, respectivamente, de três camadas estruturais de vasos sanguíneos: as células endoteliais de miogênica íntima, pericitos de mídia e células adventícias de adventícia.

Isolamento de Blood-derivado do navio Multipotentes Precursores do músculo-esquelético humano

Este protocolo descreve técnicas para isolamento de células vivas e cultura primária de linhagens celulares miogênicas e de fibroblastos do tecido muscular ou cutâneo.  Uma técnica para a imortalização dessas linhagens celulares também é descrita.  Juntos, esses protocolos fornecem uma ferramenta confiável para gerar e preservar células derivadas de pacientes para aplicações a jusante.

Isolamento e Imortalidade de linhas celulares derivadas do paciente a partir de biópsia muscular para a doença Modeling

A identificação precisa de células progenitoras fibro-adipogênicas (FAPs) e células-tronco musculares (MuSCs) é fundamental para estudar sua função biológica em condições fisiológicas e patológicas. Este protocolo fornece diretrizes para o isolamento, purificação e cultura de FAPs e MuSCs de músculos de camundongos adultos.

FACS-isolamento e Cultura de Progenitores Fibro-Adipogênicos e Células-Tronco Musculares de Músculo Esquelético não perturbado e lesionado

Apresentamos um protocolo passo a passo para o isolamento de células-tronco hematopoéticas de longa duração (CT-HSCs) e CTHs de curta duração (CTH-ST) utilizando o sistema repórter Hoxb5.

Método de Isolamento de Células-Tronco Hematopoéticas de Longa e Curta Duração

Este protocolo descreve o isolamento de células-tronco musculares e progenitores fibroadipogênicos de músculos esqueléticos individuais em camundongos. O protocolo envolve dissecção muscular única, isolamento de células-tronco por classificação de células ativadas por fluorescência, avaliação da pureza por coloração de imunofluorescência e medição quantitativa da entrada da fase S pelo ensaio de incorporação de 5-etinil-2'-desoxiuridina.

Isolamento de Populações de Células-Tronco Quiescentes de Músculos Esqueléticos Individuais

Aqui apresentamos protocolos que permitem o isolamento de células estromais de osso murino, medula óssea, timo e tecido tímico humano compatível com multiômica de célula única.

Isolamento de células estromais de órgãos hematopoiéticos

Esse protocolo fornece um método padronizado para isolar e enriquecer mioblastos primários do músculo esquelético de camundongos adultos e neonatos por meio de dissociação tecidual, filtração sequencial, pré-placagem e condições definidas de cultura, possibilitando o estabelecimento e manutenção de culturas de mioblastas derivadas de células satélite para aplicações experimentais posteriores.

Isolamento de Células Satélites do Músculo Esquelético para Estudos de Miogênese In Vitro

Aprenda a isolar células-tronco adultas de tecidos moles músculo-esqueléticos, como músculo esquelético, usando digestão enzimática e pré-plaqueamento repetido. Este método permite caracterizar células para pesquisa em medicina regenerativa.

Isolar células-tronco de tecidos moles músculo-esqueléticas

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