Injeção intratorácica: entrega composta ao coração do peixe-zebra adulto

- Para começar, coloque uma esponja úmida com uma fenda em uma placa de Petri. Em seguida, anestesiar um peixe adulto com solução de tricaína e transferi-lo cuidadosamente para a fenda com o lado ventral voltado para cima. Coloque a placa de Petri sob um microscópio estéreo e observe o movimento do coração batendo sob a pele.

Posicione uma agulha de mincroinjeção em um ângulo de 45 graus em relação ao eixo do corpo acima do coração batendo localizado entre o opérculo e a cintura peitoral. Suavemente, avance a agulha através da pele até o pericárdio, uma membrana fina que envolve o coração. Administre a mistura de injeção no pericárdio.

A injeção contém um corante traçador, como vermelho de fenol, para rastrear o movimento das soluções. Retire a agulha do tórax. Transfira o peixe imediatamente para o tanque de recuperação contendo a água do sistema e monitore-o para uma recuperação completa da anestesia. No protocolo a seguir, realizaremos uma injeção intratorácica para administrar um composto de teste e examinar seus efeitos na regeneração do coração.

- Use uma rede para pegar um peixe adulto e transferi-lo para a solução anestésica. Após um a dois minutos, quando o peixe parar de nadar e o movimento do opérculo for reduzido, toque no peixe com uma colher de plástico para garantir que ele não reaja a nenhum contato. Em seguida, transfira rápida e cuidadosamente o peixe para a ranhura da esponja úmida com o lado ventral para cima. A cabeça do peixe deve apontar para longe da mão dominante do operador.

Sob o microscópio estéreo, observe cuidadosamente o movimento do coração batendo sob a pele do peixe. Visualmente, determine o ponto de injeção acima do coração batendo e no meio do triângulo definido pelas placas cartilaginosas ventrais. Insira a ponta do capilar em um ângulo entre 30 e 45 graus em relação ao eixo do corpo. Penetre suavemente na pele com a ponta do microcapilar no pericárdio.

Assim que a agulha estiver dentro do pericárdio, pressione o pedal do dispositivo microinjetor para completar a injeção. Após a injeção, retire suavemente o capilar do tórax e transfira imediatamente o peixe para um tanque com água do sistema para recuperação. Monitore os peixes até a recuperação total da anestesia. Para analisar os efeitos da injeção, colete o coração no momento desejado e prepare-o para uma análise mais aprofundada.