Avaliação do Equilíbrio e Coordenação Motor em camundongos usando o feixe de equilíbrio

Déficits na coordenação motora fina podem ser avaliados com o teste de trave de equilíbrio. Desempenho na trave é quantificado pela velocidade com que o feixe é percorrida eo número de vezes que o mouse desliza na trave.

O objetivo geral deste procedimento é avaliar a coordenação motora e o equilíbrio em camundongos. O primeiro passo é montar uma trave de equilíbrio com a posição do detector de movimento para registrar a latência do cruzamento da viga para iniciar o treinamento maer colocado no ponto inicial da trave de equilíbrio e permitido cruzar para uma plataforma segura. Às vezes é necessário encorajar o animal ao longo da viga em direção ao ponto final.

Após um intervalo entre tentativas de 10 minutos, o maer treinou em um feixe mais estreito para permitir maior sensibilidade. A etapa final do procedimento é testar os animais treinados em vigas de diferentes larguras. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostram déficits na coordenação motora e no equilíbrio.

Olá, sou Tim Luong e sou candidato a doutorado em MD no departamento de biologia do Instituto de Tecnologia da Califórnia. Eu sou Holly Carlisle e sou pós-doutoranda no Instituto de Tecnologia da Califórnia no departamento de biologia, e hoje vamos mostrar como avaliar o equilíbrio e a coordenação motora em camundongos usando o teste da trave de equilíbrio. Agora, a principal vantagem dessa técnica em comparação com outros métodos, como a haste do rotor, é que o teste da trave de equilíbrio tende a ser mais sensível até mesmo a déficits sutis na coordenação motora.

Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo comportamental, como se nossa coordenação motora e equilíbrio são afetados em certos modelos de doenças neurológicas e se nossos déficits motores são aliviados por tratamentos específicos. O objetivo deste teste é medir a quantidade de tempo que leva para um camundongo cruzar o feixe sem parar ou parar e sem aviso do investigador. Para obter uma corrida limpa no dia do teste, treinamos por dois dias antes do teste.

A demonstração visual desse método é útil, pois a maneira como os camundongos são manuseados e auxiliados no feixe pode ser difícil para aqueles menos familiarizados com testes comportamentais. Então vamos começar. Este protocolo é baseado nos de Southwell, etal e Carter etal.

O aparelho é montado apoiando uma viga de um metro de comprimento entre dois postes de 50 centímetros de altura. As vigas têm uma superfície plana de seis ou 12 milímetros de largura. Vigas de larguras maiores podem ser usadas para mouses maiores e aqueles que não são capazes de cruzar os tamanhos mais estreitos.

Uma caixa preta é colocada no final do feixe e o material de nidificação é colocado dentro da caixa preta para encorajar o mouse em direção ao ponto de chegada, iluminar o ponto de partida com uma lâmpada para servir como um estímulo aversivo. Os detectores de movimento são colocados em zero e 80 centímetros para registrar a latência do cruzamento do feixe, esticar uma rede de náilon abaixo do feixe e aproximadamente 7,5 centímetros acima do tampo da mesa para amortecer qualquer queda. Os camundongos usados neste procedimento são alojados em um ciclo claro escuro de 12 horas e foram aclimatados por duas semanas antes do teste.

Introduziu os animais na sala de teste aproximadamente 10 minutos antes de iniciar o experimento e usou uma coorte de pelo menos 10 camundongos por condição de teste para obter os melhores resultados. Para começar a treinar, coloque um mouse no local inicial de um feixe de 12 milímetros de largura. O cronômetro começa quando o nariz do rato entra no centro 80 centímetros e pára quando o animal atinge o final dos 80 centímetros.

Os ratos devem cruzar o feixe com uma quantidade mínima de parada ou estol. Se o animal parar de avançar, incentive-o a continuar, cutucando-o suavemente por trás. Assim que o animal tiver atravessado o feixe com sucesso, remova-o do cofre e coloque-o de volta na gaiola inicial por 10 minutos antes de iniciar a próxima sessão de treinamento.

A trave de equilíbrio e a caixa são limpas e limpas com etanol 70% antes de introduzir o próximo mouse. Cada camundongo é treinado no feixe de 12 milímetros de largura três vezes, seguido de treinamento no feixe de seis milímetros de largura. Um adicional de três vezes durante o treinamento pode aumentar a ocorrência de stalling à medida que o animal se familiariza com a tarefa e o aparelho.

Por outro lado, se os camundongos não conseguirem atravessar todo o feixe com sucesso após dois dias de treinamento, pode ser necessário treinamento adicional. Certifique-se de registrar as medições de linha de base antes que os animais recebam qualquer tratamento. Após a conclusão do treinamento do dia, devolva os ratos às gaiolas de suas casas nas instalações de detenção.

No dia do teste, traga os animais para a sala 10 minutos antes de iniciar o experimento, como mostrado anteriormente, coloque um mouse no local de partida e registre a latência para o animal atravessar o centro de 80 centímetros do feixe. Os dados são relatados como a média de duas tentativas bem-sucedidas nas quais o camundongo cruzou diretamente para o final sem parar e sem estímulo do investigador. As gravações de vídeo podem ser usadas para uma análise mais precisa de deslizamentos e outros déficits motores observáveis.

Neste exemplo, camundongos C 57 pretos de nove a 11 semanas de idade foram testados em feixes de 12 milímetros e seis milímetros de largura. O tempo médio para cruzar o feixe de 12 milímetros de largura foi de 4,6 mais ou menos 0,4 segundos para os homens, e 3,3 mais ou menos 0,3 segundos para as mulheres, os tempos nos seis feixes foram de 6,8 mais ou menos 0,7 segundos para os homens e 5,9 mais ou menos 0,5 segundos. Para mulheres.

O desempenho da trave de equilíbrio pode variar dependendo da idade e da linhagem dos camundongos. Os camundongos C 57 black six usados neste exemplo são tipicamente animais ativos, alguns deslizes, mas nenhuma queda foi observada para esses camundongos e animais geneticamente ou farmacologicamente manipulados, escorregões e quedas podem se tornar mais frequentes e podem ser quantificados. Ratos com deficiência podem se agarrar ao lado do feixe, o que aumenta seu tempo de travessia ao tentar este procedimento.

É importante ser persistente e consistente em estimular os ratos a avançarem se eles pararem ou se distraírem na viga. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como treinar ratos para cruzar a trave de equilíbrio e avaliar seu equilíbrio e coordenação. Obrigado por assistir e espero que você tenha achado isso útil.