Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:14 min. • September 26th, 2025
Pegue uma monocamada de células endoteliais pulmonares de rato.
Lave as células com tampão. Adicione uma suspensão de Pseudomonas aeruginosa e incube.
Durante a incubação, as bactérias entram em contato com as células e injetam proteínas efetoras no citoplasma.
Essas proteínas efetoras induzem a quebra dos microtúbulos e a ruptura do citoesqueleto.
A ruptura do citoesqueleto ativa as respostas ao estresse celular, levando à formação de oligômeros amilóides de agregados de proteínas citotóxicas e mal dobrados.
As proteínas efetoras também criam poros na membrana celular, permitindo a liberação do oligômero amilóide no espaço extracelular.
Além disso, a ruptura do citoesqueleto altera a morfologia celular, criando lacunas intercelulares na monocamada endotelial.
Em seguida, observe a monocamada sob um microscópio óptico. Assim que as lacunas intercelulares se tornarem evidentes, encerre a incubação.
Em seguida, colete o sobrenadante contendo amilóides citotóxicos e centrifugue para pellet os detritos.
Colete o sobrenadante e filtre-o para remover qualquer bactéria restante.
O sobrenadante colhido contendo amilóides citotóxicos está pronto para análise posterior.
Para produzir sobrenadante citot
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