Quantificação de alginato bacteriano usando o ensaio de carbazol de ácido urônico

Faça uma cultura da bactéria Pseudomonas aeruginosa em caldo.

Coloque a cultura em ágar de isolamento e incube para promover o crescimento bacteriano e a produção de alginato, um exopolissacarídeo composto de ácidos urônicos.

Adicione solução salina isotônica ao gramado bacteriano e raspe para coletar as células bacterianas junto com o alginato.

Transfira a suspensão para um tubo, vórtice para dispersar o conteúdo e coloque-o no gelo para evitar a degradação enzimática.

Meça a densidade óptica, ou OD, para determinar a densidade bacteriana.

Adicione a suspensão bacteriana à solução de borato ácido e misture para hidrolisar o alginato em monômeros de ácido urônico.

Adicione carbazol, um reagente cromogênico, e incuba. Sob condições ácidas, o reagente reage com ácidos urônicos para formar complexos coloridos.

Meça a absorbância para quantificar os níveis de ácido urônico, que refletem a concentração de alginato.

Usando uma curva padrão, determine a concentração de alginato e, em seguida, divida-a pela densidade celular bacteriana medida para calcular a produção de alginato por unidade de biomassa.

Para iniciar o ensaio de carbazol de ácido urônico, identifique uma única colônia de uma cultura