Quantificando o alginato bacteriano usando um ensaio imunoenzimático baseado em anticorpos

Pegue uma microplaca com uma amostra contendo alginato, um exopolissacarídeo protetor produzido pela bactéria Pseudomonas aeruginosa.

Preparar uma diluição em série de um padrão derivado do alginato para quantificar a concentração de alginato da amostra.

Adicione um tampão de revestimento e incube para facilitar a aderência das moléculas à superfície do poço.

Lave para remover moléculas não ligadas.

Incubar com um agente bloqueador para mascarar locais de ligação não específicos.

Lave e incube com anticorpos primários específicos para alginato.

Lave novamente e incube com anticorpos secundários conjugados com enzimas que têm como alvo os anticorpos primários.

Lave e incube com um substrato cromogênico, que a enzima oxida para produzir um produto colorido.

Adicione uma solução ácida que interrompa a reação e melhore a cor para permitir a detecção colorimétrica.

Usando um leitor de microplacas, meça a intensidade da cor.

Crie uma curva padrão a partir das intensidades das diluições padrão e represente graficamente a intensidade da amostra para determinar a concentração de alginato.

Usando uma micropipeta, adicione 50 microlitros da amostra coletada a uma placa de 96 poços não tratada.

Em seguida