JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:18 min • August 31st, 2026
Obtenha uma cultura de ameba infectada com um vírus gigante conhecido como Faustovirus.
Colete o sobrenadante da cultura contendo o Faustovirus.
Em uma grade de microscopia eletrônica submetida à descarga elétrica, deposite o sobrenadante.
Incube para permitir a adsorção das partículas virais na grade.
Enxugue a grade em papel filtro para remover partículas virais não ligadas.
Deposite uma gota de molibdato de amônio.
O molibdato de amônio atua como corante negativo ao se ligar à grade ao redor do vírus e escurecer o fundo, aumentando o contraste durante a imagem.
Remova o molibdato de amônio em excesso borrifando a grade em papel filtro.
Coloque a grade em uma placa de Petri e deixe secar.
Em seguida, coloque a grade no suporte da amostra.
Introduza o suporte no microscópio eletrônico.
Capture uma imagem do Faustovirus e meça o tamanho do Faustovirus para análises posteriores.
Para realizar a microscopia eletrônica, deposite cinco microlitros da amostra positiva sobre uma grade pré-tratada com descarga elétrica e incube-a à temperatura ambiente por aproximadamente 20 minutos. Seque cuidadosamente a grade, adicione uma pequena quantidade de molibdato de amônio a 1% e incube por 10 segundos. Após remover cuidadosamente a gota, deixe a grade secar por cinco minutos. Em seguida, ajuste o microscópio eletrônico em 200 quiloeletronvolts. Coloque então a grade no suporte e introduza o suporte no microscópio. Clique no ícone de visão geral do vácuo e verifique o vácuo. Feche então as válvulas e ajuste um tamanho de ponto cinco e uma ampliação de 25.000 antes de iniciar a observação. Após localizar um vírus gigante na tela de aquisição, utilize a ferramenta de medição para medir o vírus.
Realize a biologia molecular e o sequenciamento do genoma viral de acordo com o protocolo descrito no texto.