Medição da Indução Espontânea de Fagos em Bactérias Lisogênicas ao Longo do Tempo

Colete uma cultura de crescimento noturno de uma bactéria lisogênica, na qual a maioria das células abriga DNA de fago em estado latente integrado ao seu genoma.

Inocule-o em meio fresco e incube.

Algumas bactérias sofrem indução espontânea, entrando no ciclo lítico, no qual o DNA do fago é excisado, replicado e as proteínas virais são produzidas.

Fagos infecciosos recém-montados são liberados através da lise celular.

Coletar amostras de cultura em intervalos definidos.

Para quantificar os lisogênicos viáveis não induzidos, aplique diluições seriadas de cada amostra em uma placa de ágar e incube.

Conte as colônias para calcular as unidades formadoras de colônia (UFCs).

Para quantificar fagos infectivos, aplique as mesmas diluições em uma placa de ágar com antibiótico previamente semeadas com células hospedeiras indicadoras resistentes ao antibiótico. Como os lisogênicos são sensíveis ao antibiótico, apenas os hospedeiros resistentes podem crescer.

Os fagos infectam e lisam células, formando placas claras.

Conte as placas para calcular as unidades formadoras de placa (UFPs). Valores mais baixos de UFPs indicam menos eventos de indução espontânea.

Trace as UFCs e UPFs ao longo do tempo. Durant