Enriquecimento de Vírus Gigantes Baseado em Amebas a partir de uma Amostra Ambiental de Água

Utilize uma placa de múltipos poços contendo amebas cultivadas em meio de inanição.

O meio de inanição contém antibióticos e agentes antifúngicos que limitam o crescimento microbiano mantendo as amebas viáveis, sem multiplicação ou formação de cistos dormentes.

Tomar um tubo contendo a amostra de água ambiental e vorticá-lo para liberar vírus dos sólidos em suspensão e detritos.

Adicione a amostra de água contendo os vírus às amebas.

Coloque a placa em um saco com uma compressa úmida para evitar evaporação e incube.

Durante a incubação, as amebas englobam os vírus gigantes por fagocitose.

Uma vez internalizado, o vírus libera seu genoma no citoplasma da ameba.

Uma fábrica viral citoplasmática se forma ao redor do genoma viral, onde utiliza a maquinaria do hospedeiro para replicar e produzir proteínas virais que se montam em novos vírions.

Isso faz com que as células de ameba se arredondem e lisem, liberando novos vírions no meio, enriquecendo os vírus gigantes para a detecção subsequente.

Após coletar amostras de água suja de acordo com o protocolo descrito, prepare a célula hospedeira, V. vermiformis, adicionando as amebas a um frasco de cultura celular de 75 centímetros quadrados com 30 m