Técnica de registro baseada em eletroencefalografia para registrar a atividade epileptiforme

Os neurotransmissores químicos liberados de um neurônio afetam as células vizinhas, permitindo que os impulsos elétricos passem entre os neurônios. O excesso de neurotransmissores excitatórios causa distúrbios na atividade elétrica do cérebro, levando a convulsões recorrentes - excitação repetitiva anormal de neurônios e morte neuronal gradual, levando à epilepsia.

Para registrar a atividade epileptiforme ex vivo, comece tomando uma inserção de membrana contendo fatias organotípicas de córtex rinal-hipocampo derivadas do cérebro de filhote de rato, que retratam eventos epilépticos em evolução. Cada fatia tem um giro dentado definido - região DG e cornu ammonis - região CA, consistindo de neurônios piramidais multipolares compactados.

Cultive as fatias por um período prolongado, simulando condições de estresse induzidas pela privação sérica gradual que levam à morte neuronal, assemelhando-se a condições epilépticas in vivo. Coloque uma fatia organotípica na câmara de gravação de uma configuração de eletrofisiologia - EEG -, com o hipocampo tocando o fundo da câmara.

A câmara de gravação é pré-preenchida com um meio contendo L-glutamina - um precursor de neurotransmissor - que inicia a excitação neuronal. Coloque o eletrodo receptor conectado a um capilar de vidro contendo líquido cefalorraquidiano artificial em uma região CA3 rica em neurônios piramidais.

Registre a atividade elétrica. Gere um eletrograph, que mostra brevemente eventos ictais - áreas com picos repentinos - correspondentes ao início da atividade epileptiforme.

Um número aumentado de eventos ictais, com duração prolongada, indica convulsões recorrentes.

Prepare a configuração de eletrofisiologia em um circuito fechado. Verifique se a vazão da câmara do tipo interface está ajustada para dois mililitros por minuto e abra a válvula da caixa. Verifique o nível de água no sistema e coloque um pedaço de papel de filtro na câmara de gravação da interface para drenar o excesso de meio.

Coloque um pedaço de papel de limpeza de lentes embaixo da armação para fornecer meio à fatia e ligue o controlador de temperatura, amplificadores e micromanipuladores.

Use uma seringa para carregar o eletrodo de vidro com líquido cefalorraquidiano artificial recém-preparado. Coloque o eletrodo de vidro no eletrodo receptor e espere que a temperatura na câmara de interface se estabilize em 37 graus Celsius.

Trabalhando em um gabinete de biossegurança, coloque o inserto em uma placa de 60 milímetros com uma gota de meio. Use uma lâmina afiada para cortar uma fatia da inserção e coloque a fatia na câmara de interface com o hipocampo no canto inferior direito. Em seguida, coloque o eletrodo receptor na camada de células piramidais CA3.

Inicie o protocolo de aquisição contínua e registre a fatia por 30 minutos.